Реакция преципитации это кратко

Обновлено: 02.07.2024

Реакция преципитации (РП) – это формирование и осаждение из раствора комплекса растворимого молекулярного антигена (преципитиногена) с антителами (преципитинами) в виде помутнения, называемого преципитатом.Он образуется при смешивании антигенов и антител в эквивалентных количествах; избыток одного из них снижает уровень образования иммунного комплекса.

Для РП используются коллоидные растворы антигена. Преципитиноген – это молекулярный продукт разрушенных клеток микроорганизмов, например, бактериальный белок, полисахарид, вытяжки из инфицированных органов. Степень разведения преципитиногена обычно велика – 1: 1млн и более.

Преципитирующие сыворотки изготавливают централизованно путем гипериммунизации животных (кроликов, коз, ослов) взвесью бактерий, фильтратами бульонных культур, солевыми экстрактами микроорганизмов или сывороточными белками. Титр преципитирующей сыворотки, в отличие от титра других диагностических сывороток, определяется максимальным разведением антигена, который дает преципитацию с этой сывороткой. Преципитирующие сыворотки выпускаются с титром не ниже 1:100000.

Существует несколько модификаций постановки реакции преципитации:

1. Реакция кольцепреципитации– наслаивание раствора антигена на преципитирующую сыворотку в специальных преципитационных пробирках.

Если в качестве антигенов в реакции кольцепреципитации использовать прокипяченные и профильтрованные экстракты органов и тканей, то такая реакция называется реакцией термопреципитации(реакция Асколи при сибирской язве).

Недостатками реакции кольцепреципитации являются нестойкость преципитата (кольца), который исчезает даже при легком встряхивании, а также невозможность установить количество разных антигенов, участвующих в формировании преципитата.

2. Реакция преципитации в геле основана на взаимодействии гомологичных антител и антигенов в агаровом геле с образованием видимых полос преципитации. Антитело и антиген в результате встречной диффузии в гель образуют макромолекулярные иммунные комплексы в виде белых мутных полос.

При наличии в растворе нескольких антигенов они диффундирую независимо друг от друга, при этом количество полос равно количеству антигенов. Серологически родственные антигены образуют полосы преципитации, сливающиеся друг с другом, полосы разнородных антигенов перекрещиваются.

Вопрос 3. Реакция гемолиза.

Реакция гемолиза – это растворение эритроцитов при взаимодействии с антителами-гемолизинами в присутствии комплемента.

Гемолизины получают путем иммунизации кроликов эритроцитами барана, полученная таким образом сыворотка называется гемолитической. Комплемент – это белковые фракции сыворотки крови морской свинки.

Реакция гемолиза проявляется растворением (гемолизом) эритроцитов барана, при этом взвесь эритроцитов в физиологическом растворе превращается в прозрачную ярко-красную жидкость (лаковая кровь).

реакция взаимодействия in vitro антигена с антителом, приводящая к видимому невооруженным глазом помутнению среды или образованию осадка иммунного комплекса (преципитата). Применяется для идентификации антигенов и антител, контроля чистоты антигена, количественного определения антигенов и антител в исследуемом материале. Дляпостановки П. р. необходимы прозрачные растворы антигена и соответствующей сыворотки.

пробирочная реакция взаимодействия Ат с Аг в жидкой фазе или в геле, к-рая приводит к образованию видимых невооруженным глазом иммунных преципитатов (помутнения). Применяют для идентификации Аг и Ат, контроля чистоты Аг, количественного содержания Ат и Аг. Для постановки П. р. необходимы прозрачный р-р Аг, антисыворотка, физраствор или гель (1,5 - 2% агаровый и агарозный в вероналацетатном буфере, рН 6,8, ионная сила - 0,1). Чаще используют следующие методики: 1) реакцию колъцепреципитации. В преципитационную пробирку (пробирки) наливают по 0,2 мл преципитирующей с-ки с высоким титром и на нее осторожно наслаивают примерно такое же количество р-ра Аг (цельного или разведенного). В положительном случае через несколько минут на границе реагентов образуется подвижное кольцо белого цвета. Обязательны контроли Аг, с-ки, заведомо положительный, заведомо отрицательный и др. Применяют для идентификации Аг в экстрактах из различных материалов, в т.ч. инфекц.; 2) двойную радиальную иммунодиффузию по Оухтерлони. В равномерном слое 1% агарового геля толщиной около 1,5 мм пробивают лунки на расстоянии 4-10 мм и заполняют их р-рами антисыворотки и Аг. Результат учитывают через сутки (до 6 - 7 сут) инкубации при 4°, 20° и 37°С на влажном или высушенном и окрашенном препарате по числу и расположению линий преципитации. У однокомпонентных систем между лунками с Аг и Ат появляется одна линия, у многокомпонентных -несколько линий, при идентичных Аг линии сливаются, при неидентичных- пересекаются. Используют для качественного анализа, определения чистоты препаратов, идентификации Ат и Аг; 3) простую линейную иммунодиффузию по Удену. Применяют с теми же целями, что и двойную. Содержащий антисыворотку гель разливают по пробиркам или трубочкам. На гель в пробирках наливают р-р Аг, а трубочки помещают в стаканчик с р-ром Аг. Результаты учитывают после выдерживания системы при +4°С в течение 48 ч по наличию преципитата и фронта, к-рый прошел Аг. По формуле находят количество Аг; 4) простую радиальную иммунодиффузию по Манчини. Гель с моноспецифической с-кой ровным слоем наливают на стеклянную поверхность. После застывания в геле пробивают лунки и заливают в них р-ры иссл. Аг. Систему выдерживают 40 ч при +4° или 20°С. В положительных случаях вокруг лунки образуется преципитат, площадь к-рого отражает количество Аг. Аналогичным образом ставят контроль с серией разведении стандартного Аг. Измеряют диаметр зоны преципитата, высчитывают площадь и по калибровочной кривой находят количество Аг в 1 мл субстрата.

Полезное

Смотреть что такое "преципитации реакция" в других словарях:

реакция преципитации — — [Англо русский глоссарий основных терминов по вакцинологии и иммунизации. Всемирная организация здравоохранения, 2009 г.] Тематики вакцинология, иммунизация EN precipitation reaction … Справочник технического переводчика

Реакция Вассермана — (RW или ЭДС Экспресс Диагностика Сифилиса) устаревший метод диагностики сифилиса. В настоящее время заменён микрореакцией преципитации (антикардиолипиновый тест, MP, RPR Rapid Plasma Reagin). Названа по имени немецкого иммунолога Августа… … Википедия

реакция преципитации — rus реакция (ж) преципитации eng precipitin test, precipitation test fra réaction (f) de précipitation (f) deu Präzipitintest (m), Präzipitations Reaktion (f) spa reacción (f) de precipitación, reacción (f) de precipitinas, prueba (f) de… … Безопасность и гигиена труда. Перевод на английский, французский, немецкий, испанский языки

реакция преципитации — метод обнаружения и идентификации антител или растворимых антигенов, основанный на феномене преципитации … Большой медицинский словарь

Реакция преципитации — Преципитация (лат. praecipitatio стремительное падение) В химии и биохимии синоним слова осаждение В иммунологии иммунологическая реакция осаждения из раствора нерастворимого комплекса антиген антитело, образующегося в результате соединения… … Википедия

реакция задержки — метод обнаружения малых концентраций антител, моновалентных гаптенов или поливалентных антигенов, основанный на торможении в их присутствии реакций преципитации, агглютинации или связывания комплемента вследствие специфического блокирования… … Большой медицинский словарь

реакция кольцепреципитации — модификация реакции преципитации, при которой регистрируют формирование преципитата в виде кольца на границе между растворами антигена и антител … Большой медицинский словарь

Реакция Кана (Kahn Reaction) — тест на наличие сифилиса, в котором определение характерных для этого заболевания антител в крови обследуемого производится с помощью реакции преципитации. Данный тест является менее доступным, чем некоторые другие. Источник: Медицинский словарь … Медицинские термины

РЕАКЦИЯ КАНА — (Kahn reaction) тест на наличие сифилиса, в котором определение характерных для этого заболевания антител в крови обследуемого производится с помощью реакции преципитации. Данный тест является менее доступным, чем некоторые другие … Толковый словарь по медицине

Реакции преципитации ( РП ). Краус. Реакция кольцепреципитации. Реакция микропреципитации.

Реакции преципитации (РП) [от лат. praecipito, осаждать] предложены Краусом (1897) и основаны на феномене образования видимого осадка (преципитата) или общего помутнения среды после взаимодействия растворимых либо находящихся в коллоидном дисперсном состоянии Аг с AT. РП ставят в специальных узких пробирках. В качестве реагентов используют гипериммунные преципитирующие сыворотки с высокими титрами AT к гомологичным Аг. При постановке РП разводят не сыворотку, а Аг. Реакционная среда должна содержать электролиты (физиологический раствор) и иметь нейтральный рН. РП позволяет быстро (в течение нескольких секунд) выявлять незначительные количества Аг. Они очень чувствительны, и их применяют для тонкого иммунохимического анализа, выявляющего отдельные компоненты в смеси Аг. Метод имеет несколько разновидностей (рис. 10-16).

Реакция кольцепреципитации

На слой антисыворотки наслаивают жидкость, содержащую растворимый Аг, и через несколько секунд наблюдают образование кольца преципитата (рис. 10-16, А). Широкое распространение получила реакция термопреципитации Асколи на Аг возбудителя сибирской язвы, использующая Аг, экстрагированные кипячением из различного сельскохозяйственного сырья.

Рис. 10-16. Выявление АГ в реакции преципитации. Схемы реакций кольцепреципитации (А) и диффузии в геле (Б).

Реакцией кольцепреципитации также выявляют AT к бруцеллам в молоке (кольцевая проба Банга).

Реакция микропреципитации

Для выявления низких титров AT (например, при сенсибилизации к ЛС) применяют нефелометрическую реакцию микропреципитации (или реакция помутнения), предложенная Уанье (1955). При её постановке в исследуемую сыворотку крови вносят Аг в убывающей концентрации; при отсутствии AT разведение сыворотки крови Аг уменьшает её оптическую плотность. Однако в присутствии минимальных количеств AT образуются микропреципитаты, повышающие оптическую плотность среды.

Информация на сайте подлежит консультации лечащим врачом и не заменяет очной консультации с ним.
См. подробнее в пользовательском соглашении.

Реакция преципитации (РП)(лат. praecipito ¾осаждать) ¾ это формирование и осаждение комплекса растворимого молекулярного антигена с антителами в виде помутнения, называемого преципитатом. Он образуется при смешивании антигенов и антител в эквивалентных количествах; избыток одного из них снижает уровень образования видимого иммунного комплекса.

Реакции преципитации ставят в пробирках (реакция кольцепреципитации), в гелях, питательных средах и др. Широкое распространение получили разновидности реакции преципитации в полужидком геле агара или агарозы: двойная иммунодиффузия по Оухтерлони, радиальная иммунодиффузия, иммуноэлектрофорез и др.

Реакция кольцепреципитации.Реакцию проводят в узких преципитационных пробирках с иммунной сывороткой, на которую наслаивают растворимый антиген. При оптимальном соотношении антигена и антител на границе этих двух растворов образуется непрозрачное кольцо преципитата. Избыток антигена не влияет на результат реакции кольцепреципитации вследствие постепенной диффузии реагентов к границе жидкости. Если в качестве антигенов в реакции кольцепреципитации используют прокипяченные и профильтрованные водные экстракты органов или тканей, то такая реакция называется реакцией термопреципитации (реакция Асколи, при сибирской язве).

Реакция двойной иммунодиффузии по Оухтерлони.Для постановки реакции расплавленный агаровый гель тонким слоем выливают на стеклянную пластинку и после его затвердевания в нем вырезают лунки размером 2-3 мм. В эти лунки раздельно помешают антигены и иммунные сыворотки, которые диффундируют навстречу друг другу. В месте встречи в эквивалентных соотношениях они образуют преципитат в виде белой полосы. У многокомпонентных систем между лунками с разными антигенами и антителами сыворотки появляется несколько линий преципитата; у идентичных антигенов линии преципитата сливаются; у неидентичных — пересекаются.

Реакция радиальной иммунодиффузии.Иммунную сыворотку вносят в расплавленный агаровый гель и равномерно наливают на стекло. После застывания в геле делают лунки, в которые помещают антиген в различных разведениях. Антиген, диффундируя в гель, образует с антителами кольцевые зоны преципитации вокруг лунок. Диаметр кольца преципитации пропорционален концентрации антигена. Реакцию используют для определения содержания в крови иммуноглобулинов различных классов, компонентов системы комплемента и др.

Реакция флоккуляции(по Рамону) (лат. floccus — хлопья шерсти) ¾ появление опалесценции или хлопьевидной массы (иммунопреципитации) в пробирке при реакции токсин ¾ антитоксин или анатоксин ¾ антитоксин. Ее применяют для определения активности антитоксической сыворотки или анатоксина.

2. Реакция связывания комплемента (РСК): этапы реакции, методика определения рабочей дозы комплемента, подготовка гемолитической системы

Реакция связывания комплемента (РСК)заключается в том, что при наличии специфичности антигены и антитела образуют иммунный комплекс, к которому через Fc-фрагмент антител присоединяется комплемент, то есть происходит связывание комплемента комплексом антиген-антитело. Если же комплекс антиген-антитело не образуется, то комплемент остается свободным. РСК проводят в две фазы: 1-я фаза ¾ инкубация смеси, содержащей три компонента: антиген, антитело и комплемент; 2-я фаза (индикаторная) — выявление в смеси свободного комплемента путем добавления к ней гемолитической системы, состоящей из эритроцитов барана и гемолитической сыворотки, содержащей антитела к ним. В 1-й фазе реакции при образовании комплекса антиген-антитело (специфичности антигена и антител) происходит связывание им комплемента, и тогда во 2-й фазе гемолиз сенсибилизированных антителами эритроцитов не произойдет, реакция считается положительной. Если специфичность антигена и антител не соответствуют друг другу, то комплемент остается свободным и во 2-й фазе присоединится к комплексу эритроцит-антиэритроцитарное антитело, вызывая гемолиз, реакция считается отрицательной. РСК применяют для диагностики многих инфекционных болезней, в частности риккетсиозов, гонореи, коклюша, сифилиса (реакция Вассермана).

3. Реакции нейтрализации

Антитела иммунной сыворотки способны нейтрализовать повреждающее действие микробов или их токсинов на чувствительные клетки и ткани, что связано с блокадой микробных антигенов антителами, т. е. их нейтрализацией. Реакцию нейтрализации (РН) проводят путем введения смеси антиген-антитело животным или в чувствительные тест-объекты (культуру клеток, эмбрионы). При отсутствии у животных и тест-объектов повреждающего действия микроорганизмов или их антигенов, токсинов говорят о нейтрализующем действии иммунной сыворотки и, следовательно, о специфичности взаимодействия комплекса антиген-антитело.

III. План практической работы

1. Изучить технику постановки и учесть реакцию преципитации (РП) в геле с целью определения токсигенности дифтерийной палочки (РН токсина антитоксической сывороткой).

Полоску фильтровальной бумаги, пропитанной антитоксической противодифтерийной сывороткой, накладывают на поверхность прозрачного агара в чашке Петри. Культуры дифтерийной палочки сеют бляшками на расстоянии 0,6-0,8 см от полоски фильтровальной бумаги и 1-1,5 см друг от друга. Исследуемые и контрольную (токсигенную) культуры дифтерийной палочки чередуют с одной стороны полоски фильтровальной бумаги, а напротив, с другой стороны полоски сеют одноименные культуры (дубли). Чашку инкубируют при 37ºС в течение 24-48 часов. Затем проводят учет. Положительной реакция считается при наличии тонкой линии преципитата между полоской фильтровальной бумаги и ростом бактерий в виде бляшки, отрицательной ¾ при её отсутствии. Реакция считается специфичной, если контрольная культура дала положительный результат.

2. Поставить и учесть реакцию кольцепреципитации Асколи в диагностике сибирской язвы (с целью обнаружения антигенов возбудителя сибирской язвы в исследуемом материале).

Из органов трупа животного (селезенки, участков воспаления и геморрагий кишечной стенки, легких) готовят термоэкстракт, путем кипячения в изотоническом растворе хлорида натрия и фильтрования, возможно содержащий термостабильный антиген возбудителя сибирской язвы. Реакцию ставят в узких преципитационных пробирках, внося равные объемы (0,3-0,5 мл) каждого компонента, причем второй компонент реакции осторожно наслаивают на первый, наклоняя пробирку под углом 45º. Реакция ставится согласно схеме (таблица).

Ингредиенты	Рабочая пробирка	Отрицательный контроль сыворотки	Положительный контроль сыворотки	Контроль термоэкстракта
Исследуемый материал (термоэкстракт из органов животного)	+	+
Диагностикум (стандартный сибиреязвенный антиген)	+
Преципитирующая сибиреязвенная сыворотка (на дно)	+	+	+
Нормальная сыворотка животного (на дно)	+
Изотонический раствор NaCl	+

В случае наличия антигенов возбудителя сибирской язвы втермоэкстрактена границе между жидкостями появляется мутно-белое кольцо преципитата не позднее, чем через 15 минут.

3. Изучить схему постановки и учесть РСК в серодиагностике сыпного тифа.

Реакция связывания комплемента (РСК) ¾ это сложная многокомпонентная серологическая реакция, в которой используются две системы AГ- AT (исследуемая и индикаторная) и комплемент в рабочей дозе.

Первую систему называют исследуемой или тест-системой, она содержит один неизвестный компонент (исследуемая сыворотка, в которой определяется наличие антител) и известный компонент (диагностикум). Вторую систему называют индикаторной или гемолитической (эритроциты барана + антитела сыворотки кролика). РСК проходит в два этапа:

1) тест-система (№1) + комплемент ¾ 1 час инкубации при 37ºС

2) добавляют гемолитическую систему (№ 2) ¾ 1 час инкубации при 37ºС

РСК имеет много компонентов, поэтому ставят несколько контролей. Все компоненты используют в эквивалентных количествах. Постановке основного опыта РСК предшествует титрование комплемента для определения его рабочей дозы, так как при этой реакции необходимо точное соблюдение количественных соотношений ингредиентов.

Титрование комплемента

Из коммерческого препарата комплемента, представляющего собой лиофилизированную сыворотку крови морской свинки, готовят разведения 1:10, 1:15, 1:20, 1:25, 1:30, 1:35 и 1:40. К 0,2 мл каждого разведения комплемента добавляют по 0,4 мл гемолитической системы (смесь равных объемов 3% суспензии эритроцитов барана в изотоническом растворе хлорида натрия и гемолитической сыворотки кролика в тройном титре после их инкубации в течение 30 минут). После инкубации пробирок 30 минут при 37ºС определяют титр комплемента — наибольшее его разведение, которое вызывает полный лизис эритроцитов в гемолитической системе. В реакции РСК используют рабочую дозу комплемента, которая на 25% больше, чем титр комплемента.

3. Реакции нейтрализации

III. План практической работы

Ингредиенты	Рабочая пробирка	Отрицательный контроль сыворотки	Положительный контроль сыворотки	Контроль термоэкстракта
Исследуемый материал (термоэкстракт из органов животного)	+	+
Диагностикум (стандартный сибиреязвенный антиген)	+
Преципитирующая сибиреязвенная сыворотка (на дно)	+	+	+
Нормальная сыворотка животного (на дно)	+
Изотонический раствор NaCl	+

3. Изучить схему постановки и учесть РСК в серодиагностике сыпного тифа.

1) тест-система (№1) + комплемент ¾ 1 час инкубации при 37ºС

2) добавляют гемолитическую систему (№ 2) ¾ 1 час инкубации при 37ºС

Титрование комплемента

Механическое удерживание земляных масс: Механическое удерживание земляных масс на склоне обеспечивают контрфорсными сооружениями различных конструкций.

Организация стока поверхностных вод: Наибольшее количество влаги на земном шаре испаряется с поверхности морей и океанов (88‰).

Поперечные профили набережных и береговой полосы: На городских территориях берегоукрепление проектируют с учетом технических и экономических требований, но особое значение придают эстетическим.

Читайте также: