Санитарно бактериологическое исследование почвы реферат
Обновлено: 02.07.2024
Важную роль в изучении почвенной микрофлоры играет экологический метод.
При изучении почвенной микрофлоры и вызываемых ею микробиологических процессов, прежде всего, изучаются сообщества микроорганизмов, участвующие в разложении растительных остатков (грибы, маслянокислые и аммонифицирующие бактерии) и минерализации (нитрифицирующие, аэробные целлюлозоразлагающие и др.).
При исследовании микрофлоры почвенных горизонтов необходимо делать разрез почвы.
При взятии проб снимают верхний слой почвы на глубину 0,5 – 1,0 см и очищают наружный слой вертикальной стенки почвенного разреза.
Пробы почвы по слоям и горизонтам необходимо брать чистым и стерильным инструментом.
При изучении микрофлоры почвы проводится количественное определение физиологических групп микроорганизмов.
Санитарными показателями почвы являются: общее микробное число, коли – титр и перфрингенс – титр.
Счет бактерий в грунте проводится двумя методами: методом разливок и прямым методом в той или иной модификации.
При определении содержания бактерий методом разливок необходимо сделать разведение почвенной суспензии, поскольку почва богата бактериями.
Для приготовления разведений необходимо иметь стерильную посуду (колбы, пробирки, пипетки) и стерильную воду или физиологический раствор.
В стерильную колбу, содержащую 100 мл стерильной воды, помещается стерильно отвешенный 1 г почвы и содержимое колбы тщательно взбалтывается.
Из полученной суспензии в пробирках со стерильной водой готовятся разведения почвы 1/100. 1/1000. 1/10 000 г.
Для этого 1 мл основной суспензии стерильно вносится в пробирку с 9 мл стерильной воды, а затем методом переката (из предыдущей пробирки в последующую с 9 мл стерильной воды) готовятся последующие разведения почвы.
После приготовления разведений делаются посевы из основной суспензии и приготовленных разведений в чашки Петри. В чашки Петри к исследуемой суспензии добавляется расплавленный и охлажденный до 42 градусов мясо – пептонный агар (МПА). Содержимое чашек Петри тщательно аккуратно перемешивается (так, чтобы агар не выливался за бортики чашки). Чашки выдерживаются на ровной поверхности до полного остывания агара. Затем все чашки переворачивают вверх дном и помещают в термостат.
Чашки необходимо переворачивать вверх дном для того, чтобы капля образующейся на крышке конденсационной воды не капнула на агар и не обусловила слияние выросших на агаре колоний микроорганизмов.
Слияние колоний не позволит сделать правильно количественный учет особей микробов в исследуемом объеме почвы.
Подсчет выросших колоний производится через 48 часов и через 10 суток. Из всех посевов высчитывают среднее арифметическое число на 1 г влажной и сухой почвы.
Для прямого подсчета бактерий в почве применяют различные способы, в основу которых положен метод прямого счета, разработанный С.Н.Виноградским.
По способу А.С.Разумова 1 г почвы добавляют к 500 мл стерильной водопроводной воды и встряхивают в течение 10 минут.
Полученной суспензии дают отстоятся 2 – 3 секунды и стерильной пипеткой отбирают 4 мл, которые фильтруют через мембранный фильтр.
Фильтр стерильно переносится и наносится на питательную среду в чашке Петри.
После экспозиции в термостате производится подсчет выросших колоний и делается перерасчет на 1 г почвы.
Для выявления микроорганизмов различных физиологических групп и их количественного учета пользуются методом предельных разведений.
С этой целью готовят взвесь почвы в воде (10 г почвы добавляют к 90 мл стерильной воды) и тщательно взбалтывают в течение 5 минут.
Из полученной маточной суспензии готовят разведения и производят посев на соответствующие плотные и жидкие питательные среды.
Для выявления аммонифицирующих бактерий используется пептонная вода.
Признаками развития аммонифицирующих бактерий являются помутнение питательной среды, образование пленки и осадка, положительная реакция на аммиак с реактивом Несслера.
Общее количество маслянокислых бактерий определяют путем посева на картофельную среду. Основным показателем присутствия маслянокислых бактерий является газообразование, пигментация и мацерация картофеля.
Для выявления нитрифицирующих бактерий разведения почвенной суспензии высевают на среду, содержащую аммонийно-магниевую соль фосфорной кислоты. О наличии нитрифицирующих бактерий судят по реакции на азотистую и азотную кислоты и образованию прозрачных зон на поверхности соли.
Для выявления спорообразующих анаэробов, основная почвенная суспензия предварительно прогревается при 80 градусах в течение 20 минут, после чего разведения суспензии высеваются на питательные среды. Посевы выдерживаются в термостате в анаэробных условиях.
При определении перфрингенс – титра разведения почвенной суспензии высеваются в пробирки со средой Вильсон – Блера.
Количество грибов из родов аспергиллюс и пенициллиум определяется путем посева разведений исследуемой почвенной суспензии на сусло – агар.
Микробное число почвы – общее количество микроорганизмов, содержащихся в 1 г почвы.
Определение бактерий группы кишечной палочки
Коли-индекс – количество жизнеспособных E. coli в 1 г почвы.
При анализе малозагрязненных почв используют метод мембранных фильтров. При предполагаемой невысокой степени фекального загрязнения рекомендуется применение титрационного метода. При высокой степени фекального загрязнения рекомендуется метод прямого посева почвенной суспензии (1:10) на среду Эндо.
Метод мембранных фильтров. Почвенную суспензию 1:10 центрифугируют при 2000 об/мин в течение 5 мин, затем 5-10 мл суспензии фильтруют через мембранные фильтры №3 в аппарате Зейтца. После фильтрования верхнюю часть прибора снимают и фильтр осторожно стерильным пинцетом переносят на среду Эндо в чашку Петри. Фильтр накладывают вверх поверхностью, на которой осели бактерии. Чашки Петри инкубируют при 37 0 С 24 ч. При наличии в почве БГКП на фильтрах появляются колонии типичные для кишечных палочек – темно-красные с металлическим блеском или розовые с красным центром. Из таких колоний делают мазки, окрашивают по Граму. Для отличия бактерий семейства Enterobacteriaceae от Pseudomonadaceae ставят оксидазный тест. Для этого на культуру микроорганизмов в чашке Петри наносят индикатор – 1% раствор диметилпарафенилендинитролазы. В положительном случае через 15-20 мин появляется темно-синее окрашивание. Колонии учитывают как БГКП, в случае если они образованы грамотрицательными палочками, ферментирующими глюкозу до кислоты и газа и не обладающие протеолитической активностью.
Колонии подсчитывают на тех фильтрах, на которых из соответствующего разведения почвенной суспензии выросло не более 30-50 колоний.
Пересчитывают количество выросших колоний на фильтрах на 1 г почвы и определяют коли-индекс.
Коли-титр почвы – наименьшее количество почвы, в котором обнаруживается жизнеспособная E. coli.
Титрационный метод. Из приготовленных разведений почвенной суспензии делают посевы в питательную среду Кесслера (1% пептона, 5% желчи, 0,25% лактозы, генциановый фиолетовый). Из разведений 1:10 10 мл засевают во флакон с 50 мл среды, что соответствует 1 г почвы. Посев меньших количеств (0,1 и 0,01) делают по 1 мл из соответствующих разведений почвенной суспензии в пробирки с 9 мл среды. Отсутствие во всех пробирках роста и газообразования указывает на отсутствие БГКП. В случае если в посевах обнаруживается рост или рост и газообразование, делают высев в чашки Петри со средой Эндо или в пробирки с розоловым агаром, инкубируют 24 ч при 37 0 С и проводят дальнейшую идентификацию выделенных бактерий. Результат выражают в коли-титре.
Перфрингенс-титр почвы – наименьшее весовое количество почвы, выраженное в граммах, в котором обнаруживается жизнеспособная клетка C. perfringens.
Определение перфрингенс-титра является важным критерием для санитарной оценки почвы и ее самоочищения, так как в почве, загрязненной фекалиями, уже через 4-5 мес эшерихии исчезают, а C. perfringens обнаруживаются в титре 0,01. Перфрингенс-титр дает возможность судить о давности фекального загрязнения.
Из приготовленных разведений почвенной суспензии по 1 мл переносят в два параллельных ряда пробирок. Один ряд прогревают при 80 0 С 15 мин. Далее во все пробирки наливают по 9-10 мл расплавленной и охлажденной до 45 0 среды Вильсона-Блер.
Определение термофильных бактерий
Учёт термофильных бактерий производят на МПА, разлитом в чашки Петри более толстым слоем, чем обычно. Посев делают из разведений 1:10, 1:100, 1:1000, причем из каждого разведения рекомендуется засевать по 2-3 параллельные чашки. Термофильные бактерии выращивают при температуре около 60 0 . Результат учитывают через 24 ч после посева. Подсчет количества бактерий проводят на 1 г почвы.
Санитарно-микробиологическая оценка почвы
Ее производят по комплексу показателей. Важно заметить, что для санитарной оценки почвы крайне важно пользоваться показателями таблицы 2.
Санитарно-бактериологическое исследование почвы - понятие и виды. Классификация и особенности категории "Санитарно-бактериологическое исследование почвы" 2017, 2018.
Читайте также: