Заливка в парафин гистологического материала кратко

Обновлено: 05.07.2024

Получение тонких срезов с образцов исследуемых тканей возможно только после их пропитывания достаточно плотными средами, какими являются парафин и целлоидин.

Парафин - смесь высокомолекулярных предельных углеводородов, получаемая при перегонке нефти. Сорта парафина, используемые в качестве среды для гистологической заливки, имеют температуру плавления от 48° до 60°С. Наиболее удобен в повседневной работе парафин с температурой плавления 52°-56°С. Технический, пищевой и медицинский парафины без дополнительной подготовки не позволяют производить заливку, обеспечивающую высокое качество срезов. В гистологической лаборатории желательно использовать очищенные сорта парафина с добавлением восков или специально разработанные на основе парафина среды с модифицирующими добавками (Paraplast -Sigma (CШA), Histoplast - Shandon (CШA), Histomix - БиоВитрум (Россия).

Пропитку парафином проводят в термостате, обеспечивающем поддержание температуры на 1-2 градуса выше температуры плавления используемого парафина (обычно устанавливают температуру 58°С).

Поскольку расплавленный парафин и этанол не смешиваются, из обезвоженного материала следует удалить спирт (или метилсалицилат) при помощи промежуточной среды - растворителя парафина, смешивающегося с этанолом. В качестве таких промежуточных сред можно использовать хлороформ, авиационный бензин, петролейный эфир, ксилол, бензол, толуол, октан, гексан и др.

Абсолютный спирт пригоден для обезвоживания (в качестве абсолютного спирта), если его крепость не ниже 98°. В практической работе наиболее часто применяют хлороформ. При доступности абсолютного этанола, хлороформу следует предпочесть менее токсичный петролейный эфир, который лучше удаляет этанол и позволяет достичь более высокого качества пропитки парафином.

Можно рекомендовать следующие схемы проводки и пропитывания материала.

1. Заливка в парафин с использованием хлороформа

Обезвоженные объекты помещают последовательно в:
Смесь абсолютного этанола с хлороформом (1:1) 1-2 ч
Хлороформ (I) 1ч,
Хлороформ (II) 1ч
Хлороформ (III) 1 ч
Хлороформ-парафин (1:1) при 37°С в термостате 12-24 ч
Проводят через 3 порции расплавленного парафина (в термостате при 56°-58°С) по 40-60 мин

2. Заливка в парафин с использованием петролейного эфира.

Обезвоженные объекты помещают последовательно в:
Петролейный эфир (I) 30-60 мин
Петролейный эфир (II) 30-60 мин
Петролейный эфир (III) 30-60 мин
Петролейный эфир-парафин (1:1) при 37°С в термостате 3-24 ч
Проводят через 2 порции расплавленного парафина (в термостате при 5б°-58°С) по 60 мин.

3. Схема проводки материала и заливки в парафин после фиксации объектов в жидкости Буэна, применяемая в Отделе морфологии НИИЭМ РАМН

Перед фиксацией мелкие, тонкие и легко деформирующиеся объекты необходимо поместить на кусочек плотной бумаги.
Фиксация в жидкости Буэна 1 сут. (при комнатной температуре).
Короткая промывка в водопроводной воде 1-15 мин.
70° этанол 1 сут.
80° этанол 1 сут. (можно оставить на срок до 1 недели)
90° этанол 1 сут.
96° этанол 1 сут.
Абсолютный этанол 1 сут.
Абсолютный этанол-хлороформ (1:1) 2-3 ч
Хлороформ (I) 90 мин
Хлороформ (II) 90 мин
Хлороформ-парафин 1:1 в термостате 37° оставить на ночь
Парафин 1 -1 час (в термостате 56-58°С)
Парафин 2 - 1 час (в термостате 56-58°С)
Парафин 3 — 1 час (в термостате 56-58°С)

Неудовлетворительное качество заливки при использовании хлороформа может быть обусловлено применением хлороформа "для спектроскопии", в который добавлен этанол, разливного хлороформа (при использовании недостаточно просушенных после промывки емкостей) и реактива, длительно хранившегося на свету.

При отсутствии возможности использовать абсолютный этанол, этот этап проводки можно пропустить, однако качество пропитки парафином при этом может быть несколько хуже. После обезвоживания с использованием метилсалицилата (или метилбензоата) этот этап следует пропустить. Качество заливки при этом не ухудшится.

По окончании проводки осуществляется заливка - объект помещают в формочку (бумажную, пластиковую или металлическую и заливают свежей порцией разогретого до 58°-65°С парафина. В случае необходимости особой ориентации кусочка ткани при изготовлении срезов, с помощью подогретых препаровальной иглы и глазного пинцета можно повернуть материал, обратив плоскость резки ко дну формочки.

Для получения лучшей консистенции парафинового блока и обеспечения более высокого качества срезов производят ускоренное охлаждение залитых объектов. Для этого формочки (бумажные или пластиковые) опускают в холодную воду или помещают на охлажденную поверхность (на специальный охлаждающий столик или в камеру холодильника при +4°С).

Из затвердевшего парафина (обычно спустя час и более после заливки) подогретым скальпелем вырезают блоки, таким образом, чтобы по периметру кусочка оставалась кайма парафина 1-2 мм. В случае прямоугольных кусочков, которые при изготовлении срезов должны располагаться более длинной стороной параллельно лезвию микротомного ножа, парафин с более коротких сторон может быть подрезан до края ткани. Приготовленные блоки с помощью разогретых скальпеля или специальной лопаточки (шпателя) прикрепляют к деревянному блокодержателю, на котором карандашом, ручкой или фломастером надписывают номер объекта. К изготовлению срезов можно приступать после охлаждения блока.

Металлические и пластиковые (из полипропилена, полистирола и т.п.) формы следует перед заливкой прогреть в термостате.

Разогрев заливочного парафина свыше 56 °С рекомендуется в связи с возможностью быстрого застывания парафина, вынутого из термостата , что приводит к неравномерной заливке блока с сохранением пустот.

До тек пор как парафин не застынет, формочки должны плавать на поверхности воды. Полное погружение в воду до застывания парафина производить не рекомендуется в связи с опасностью
проникновения воды во внутрь блока и его растрескивания и деформации.

Не рекомендуется длительное охлаждение при температурах ниже 0 °С в связи с опасностью появления трещин в блоке.

Применение целлоидина при заливке в парафин

В случае заливки в парафин плотных тканей, из которых трудно изготовить качественные срезы, и при необходимости сохранения формы легко деформирующихся объектов (например эмбрионов) рекомендуется комбинированная заливка в целлоидин-парафин.

Существует несколько методов, цель которых состоит в первоначальной пропитке тканей слабыми растворами целлоидина. Приводимый способ, на наш взгляд, наиболее удачный (по простоте и качеству результатов).

После обезвоживания в абсолютном этаноле (или 96%-ном) кусочки переносят в смесь равных объемов этанола и метилсалицилата на 1-24 ч (до просветления). Затем переносят объекты в чистый метилсалицилат и оставляют на 12-24 ч. Перекладывают материал в 1-2% раствор целлоидина в метилсалицилате и оставляют на 3-7 сут. Отмывают объект от метилсалицилата петролейным эфиром (хлороформом) и переносят в петролейный эфир - парафин (хлороформ-парафин 37°С) или сразу в первый заливочный парафин. Далее продолжают заливку в соответствии с одной из рекомендованных прописей.

Для приготовления раствора целлоидина в метилсалицилате берут 1-2 г целлоидина в хлопьях и помещают в плотно закрывающуюся емкость со 100 мл метилсалицилата, ставят в термостат (37°С) на 2-3 нед. Раз в сутки емкость желательно встряхивать для ускорения растворения целлоидина. Готовый раствор представляет собой прозрачную, слегка желтоватую сиропообразную жидкость, которая может храниться длительное время при комнатной температуре.

Для получения тонких (до 6 мкм) гистологических срезов необходимо фиксированный и промытый материал залить в плотную среду, предварительно пропитав ею кусочки тканей. В зависимости от способа растворения все заливочные среды разделяют на растворимые в органических растворителях и водорастворимые. К первым относятся парафин, пластические полимеры на основе парафина, целлоидин, ко вторым — желатин, полиэтиленгликоли, полиэфиры, некоторые метакрилаты и т.д.

Заливка ткани в парафин

Важнейшим условием успешной заливки материала является своевременная смена реактивов в процессе их загрязнения, а также соблюдение рекомендуемых временных и температурных параметров. Кроме того, нужно стремиться к тому, чтобы одновременно заливать одинаковые по толщине и плотности кусочки ткани.

Другие способы заливки.

Заливка по Ромейсу ручным способом 1 вариант	Заливка по Ромейсу ручным способом 2 вариант	Заливка в парапласт с помощью автомата	Заливка в парапласт с помощью вакуум-автомата.	Быстрая заливка в парапласт с помощью автомата
Фиксация 10% формалин 12ч	10% формалин 12ч	Фиксация в 5 % формалине 2ч	Фиксация в 5 % формалине при 60°С 10мин
Промывание в проточной воде 2ч	Промывание в проточной воде 2ч	Спирт 70 % I 2ч	Спирт 70 % I 5 мин	Ацетон I 30мин
50% спирт 2ч	50% изопропиловый спирт 2ч	Спирт 70 % II 1ч	Спирт 70 % II 12мин	Ацетон II 30мин
75% спирт 3ч	75% 3ч	Спирт 96 % I 1ч	Спирт 96 % I 12мин	Ацетон III 30мин
96% 4ч	90% 6ч	Спирт 96 % II 1ч	Спирт 96 % II 12мин	Ацетон IV 30мин
100% I 4ч	100% Изопропиловый спирт I 4ч	Спирт 100 % I 1ч	Спирт 100 % I 12 мин
100% II 4ч	100% II 4ч	Спирт 100 % II 1ч	Спирт 100 "оII 12мин
Метилбензоат I 2ч	Изопропиловый спирт+парафин (1:1) 60*С 12ч	Спирт 100 % III 1ч	Спирт 100 "оIII 12мин
Метилбензоат II 2ч	Хлороформ I (бензол) 1ч	Бензол I 15мин	Ацетон-ксилол (1:1) 10мин
Бензол 2ч	Хлороформ II (бензол) 1ч	Бензол II 15мин	Ксилол 10мин
Бензол+парафин(1:!) 1ч	Парапласт I 60 °С 2ч	Парапласт плюс I 60°С 15мин
Парафин 60*С 8ч	Парафин 60*С 8ч	Парапласт П 60 'С 3ч	Парапласт плюс II 60°С 25мин	Парапласт плюс 60°С 30мин
Всего 47ч	Всего 54ч	17ч	12 ч 27 мин	3 ч

Наиболее быстрым, простым, не требующим применения специальной аппаратуры методом заливки материала является способ, разработанный И. И. Золотых в патологоанатомическом отделении Института хирургии им. А. В. Вишневского.

· 96 % спирте 15 мин

· 100 % Спирт 15 мин

· Хлороформ 15 мин

· Хлороформ-парафин при 56 °С15 мин

· Парафин при 56 °С, энергично встряхивая 1 мин

· Парафин при 56 °С 45 мин

Продолжительность 2 ч 30 мин

У насзаливка проходит следующим образом:

· Формалин 10% 24 часа

· Промывка проточной водой 1 час

· спирт 70% (обезвоживание) больше 4 часов

· спирт 80% больше 4 часов

· спирт 96% больше 4 часов

· спирт+хлороформ 1:1 до 1 часа(пересушивается)

· хлороформ чистый до 1 часа

· хлороформ+парафин 1:1 37С до 1 часа

· парафин 1 56С 45 м

· парафин 2 56С 45 м

Для приготовления препаратов следует:

· ксилол 1 (депарафинизация) 56С 10 м

· ксилол 2 56С 10 м

· гематоксилин 5 м

· промываем дистиллированной водой

· ксилол 56С больше 10 м (для просветления)

ЗАЛИВОЧНЫЕ СРЕДЫ

Заливка ткани в парафин

Другие способы заливки.

Заливка по Ромейсу ручным способом 1 вариант	Заливка по Ромейсу ручным способом 2 вариант	Заливка в парапласт с помощью автомата	Заливка в парапласт с помощью вакуум-автомата.	Быстрая заливка в парапласт с помощью автомата
Фиксация 10% формалин 12ч	10% формалин 12ч	Фиксация в 5 % формалине 2ч	Фиксация в 5 % формалине при 60°С 10мин
Промывание в проточной воде 2ч	Промывание в проточной воде 2ч	Спирт 70 % I 2ч	Спирт 70 % I 5 мин	Ацетон I 30мин
50% спирт 2ч	50% изопропиловый спирт 2ч	Спирт 70 % II 1ч	Спирт 70 % II 12мин	Ацетон II 30мин
75% спирт 3ч	75% 3ч	Спирт 96 % I 1ч	Спирт 96 % I 12мин	Ацетон III 30мин
96% 4ч	90% 6ч	Спирт 96 % II 1ч	Спирт 96 % II 12мин	Ацетон IV 30мин
100% I 4ч	100% Изопропиловый спирт I 4ч	Спирт 100 % I 1ч	Спирт 100 % I 12 мин
100% II 4ч	100% II 4ч	Спирт 100 % II 1ч	Спирт 100 "оII 12мин
Метилбензоат I 2ч	Изопропиловый спирт+парафин (1:1) 60*С 12ч	Спирт 100 % III 1ч	Спирт 100 "оIII 12мин
Метилбензоат II 2ч	Хлороформ I (бензол) 1ч	Бензол I 15мин	Ацетон-ксилол (1:1) 10мин
Бензол 2ч	Хлороформ II (бензол) 1ч	Бензол II 15мин	Ксилол 10мин
Бензол+парафин(1:!) 1ч	Парапласт I 60 °С 2ч	Парапласт плюс I 60°С 15мин
Парафин 60*С 8ч	Парафин 60*С 8ч	Парапласт П 60 'С 3ч	Парапласт плюс II 60°С 25мин	Парапласт плюс 60°С 30мин
Всего 47ч	Всего 54ч	17ч	12 ч 27 мин	3 ч

Здравствуйте, коллеги!

После того или иного способа гистологической проводки образцы ткани
должны быть залиты в парафин или другие заливочные среды.

Заливка материала

Заливку можно выполнять двумя способами: вручную, используя
разные формы и автоматически, с помощью заливочного
центра. В заливочном центре есть таймеры старта и отсрочки. Желательно заливочный центр держать горячим в течение всего рабочего дня, например, с 6 утра и до 17 часов, так как перезаливка может потребоваться в любое время.

При любом способе необходимо соблюдать следующие
принципы:

Заливочный парафин должен быть нагрет на 5-6оС выше
точки плавления парафина и при заливке он не должен
застывать. При застывании и наливке остывшего парафина в
нем образуются пузырьки воздуха.
Ткань, подлежащая заливке, также не должна застывать и покрываться плёнкой.
Заливать нужно с помощью горячего, но и не перегретого
пинцета, чтобы не оставить ожоги на ткани.
Пинцет необходимо протирать после каждого залитого объекта во избежании попадания микроскопических кусочков в другой блок. Бывает, невидимые глазу кусочки соскобов или плацент попадают в материал другого пациента, и патологам остаётся только гадать, откуда, например, в коже ворсины хориона.

5. Следует сперва наливать парафин в форму, а затем помещать в него кусочек ткани и ориентировать в форме так, как необходимо (об ориентации объектов расскажем в наших следующих выпусках).

6. При заливке формы не должны быть переполнены, но количество налитого парафина должно быть достаточным, чтобы блок удерживался на кассете во время микротомии.

7. Необходимо избегать механического травмирования
заливаемых объектов, они могут распадаться от сильного
нажатия.

8. При заливке вручную на верхнюю часть залитого блока
помещают номер. При заливке в аппарате, сверху заливочной
формы помещают маркированную кассету.

9. Дать остыть блоку. Чем блок больше и толще, тем дольше
он должен застывать.

10. По окончании работы с каждого рабочего место должны
быть убраны все остаки парафина и заливаемого материала, а ёмкости для расплавленного парафина должны быть наполнены.

Как понять, что блок застыл?

Парафин начинает застывать со всех краев одновременно, и происходит это
относительно быстро, за несколько минут. Но внутри он
застывает дольше, и длится этот процесс может от 20 минут до суток (в зависимости от состава парафина и размера блока).

Если после схватывания блока форму с залитым кусочком ткани из заливочного центра поместить в морозилку, то блок уже можно будет резать примерно через 1 час.

Из формы блок можно вынуть через несколько минут, парафин
на холоде сжимается и отскакивает от формы (обычно
раздается характерный щелчок; если блоков много — можно
услышать треск). Но это не значит, что блок готов к резке, его
нужно еще подержать в морозилке или на охлаждающей панели, желательно не менее часа.

Практические советы

При работе с большим количеством кассет обязательно нужно
соблюдать правило: открывать только одну кассету, заливать
только одну форму и следующую кассету брать в руки только
после сбрасывания крышки (при использовании заливочной станции) или всей кассеты (при ручном
методе, если лабораторию не обеспечивают кассетами и приходится их вторично использовать).

Чтобы уголки или формы не прилипали к поверхностям и друг другу, и от них легко отходил парафин, их нужно смазывать раствором этанола/глицерина 1/1, либо 4/1.

Пинцет также не должен остывать при заливке. Лучше всего пользоваться специальными пинцетами с электроподогревом. При их отуствии нагревать пинцет можно над пламенем спиртовки (не самый безопасный метод), нагревательных столиках, либо подогревать инструменты в специальных лунках заливочного центра.

Продуктивность этапа

Средний уровень продуктивности на заливке равен 60 блоков/час. Он посчитан исходя из коэффициента использования рабочего времени 75% и эквивалентен различным уровням выхода: 90 блоков/2 часа и 180 блоков/4 часа.
Поскольку при заливке высокий уровень напряжения, то эта задача должна быть ограничена сменой, но не более 4 последовательных часов.
Поэтому рабочее место для заливки должно быть хорошо освещено, не быть на сквозняке или в холоде и оснащено удобными инструментами (пинцетами, прессами для придавливания материала к дну блока) и мебелью, позволяющей работать несколько часов непрерывно.

Для гистологического исследования берут кусочки органов и тканей величиной не более 1 см³. Материал желательно получать как можно раньше после смерти людей (метод исследования материала трупа человека — аутопсия).

С диагностической целью материал для гистологического исследования может забираться у людей прижизненно с помощью специальных инструментов или во время операций. Этот способ получения материала носит название биопсии.

Взятый для гистологического исследования материал сразу же должен подвергаться фиксации. Фиксация – метод обработки ткани с целью закрепления ее прижизненной структуры. Это достигается путем воздействия на ткань специальных растворов (фиксаторов). Наиболее существенным изменением, происходящим в тканях под воздействием фиксатора является процесс свертывания (коагуляции) белков. Количество фиксатора следует брать в 20-100 раз больше объема кусочка фиксируемого материала.

Существуют фиксаторы простые и сложные. К простым относятся 10-20% раствор формалина, 96 º спирт, 100 (абсолютный) спирт, 1-2% раствор осмиевой кислоты и др. Сложные фиксаторы: спирт – формол (спирт 70º — 100 мл. и формалин 2-5 мл.) жидкость Ценкера (сулема – 5 г, сернокислый натрий — 1 г., двухромовокиолый калий – 2,5 г, дистиллированная вода – 100 мл., ледяная уксусная кислота 5 мл.) и др. Продолжительность фиксации – от нескольких часов до 1 суток и более в зависимости от свойств фиксатора и характера исследуемого материала.

3.Помывка в воде.

После фиксации материал промывают (чаще всего в течение нескольких часов в проточной воде) с тем, чтобы избавить его от избытка фиксатора и различных осадков фиксирующих жидкостей.

Изучить с помощью микроскопа такие фиксированные кусочки органов невозможно, т.к. они не прозрачны. Чтобы кусочек органа можно было микроскопировать, его надо разрезать на очень тонкие пластинки – срезы, толщина которых измеряется в микрометрах. Такие срезы получают с помощью специальных приборов – микротомов. Но для того, чтобы резать на микротоме кусочек ткани, ее надо предварительно уплотнить. Это достигается путем пропитывания застывающими жидкостями – расплавленным парафином. Парафин в воде не растворяется, и поэтому промытый после фиксации кусочек ткани необходимо предварительно обезводить, и только затем пропитывать.

4. Обезвоживание.

Обезвоживание ткани производятся постепенно (чтобы не произошло сморщивания) путем проведения ее через спирты возрастающей крепости: 50º, 60º, 70º, 80º, 90º, 96º, 100º. В каждом спирте кусочки находятся от нескольких часов до 1 суток в зависимости от величины кусочка.

5.Уплотнение (заливка).

При заливке кусочки предварительно пропитываются теми жидкостями, которые служат растворителями для парафина (ксилол или толуол). Заливка в парафин. При заливке в парафин кусочки из абсолютного спирта

переносятся в смесь абсолютного спирта с хлороформом или ксилолом, взятых поровну, затем чистый ксилол и, наконец, в расплавленный насыщенный раствор парафина в хлороформе, где они находятся в термостате при температуре 37º до 1 суток и более. Дальнейшая заливка проводится в термостате при температуре 54º -56º в трех порциях парафина.

Окончательная заливка проводится в парафин с добавлением воска, который наливают в специальные бумажные коробочки или стеклянные чашки, а затем эти коробочки или чашки после появления на поверхности парафина пленки, погружают в воду.

Происходит полное затвердение парафина. Кусочки с окружающим их парафином извлекают из коробочек и с помощью расплавленного парафина, наклеивают на деревянные кубики, получаются парафиновые блоки.

Уплотнения также можно добиться замораживанием кусочка органа (срочная биопсия).

6. Приготовление срезов.

Срезы с блоков изготовляются на микротоме. Наиболее распространены микротомы санный и замораживающий. В специальных устройствах микротома зажимается парафиновый блок и микротомный нож. Существует механизм, поднимающий объектодержатель с блоком на заданное количество микрометров. Это позволяет при каждом скольжении ножа в плоскости параллельной поверхности блока получать срезы толщиной 5-10 микрометров с парафиновых блоков.

7. Окрашивание.

Изготовленные на микротоме срезы окрашиваются. Перед окраской из парафиновых срезов обязательно удаляют парафин (растворением в ксилоле).

Окрашивание необходимо производить для того, чтобы отчетливо выявить под микроскопом тонкие структуры объекта. В неокрашенных срезах большинство структур одинаково преломляет свет, поэтому рассмотреть их не удается.

Выявление на срезе гистологических структур основано на неодинаковом их отношении к красителям. Одни структуры среза вступают в реакцию с кислыми красителями и ими окрашиваются (ацидофильные, оксифильные структуры), другие реагируют с основными красителями и окрашиваются преимущественно ими (базофильные структуры). Некоторые структуры окрашиваются и кислыми и основными красителями.

По происхождению различают краски естественные, к которым относятся краски растительного и животного происхождения, и краски искусственные. Краской растительного происхождения является гематоксилин, который добывается из кампешевого дерева, растущего в Америке и в Армении. К краскам животного происхождения относится кармин, который добывается из насекомых кошенили, живущих на кактусовых деревьях в Мексике, Армении и др. В настоящее время большинство красок готовят синтетически(искусственные краски).

По окрашиванию определенных гистологических структур различают краски ядерные (окрашивание ядра), цитоплазматические (окрашивающие цитоплазму), и специальные, окрашивающие избирательно определенные структуры.

Ядерные краски – гематоксилин, кармин, сафранин, метиленовая синь, азур, тионин. Цитоплазматические краски – эозин, пикрофуксин.

Существуют специальные краски и реактивы: судан Ш (окрашивает жир в оранжевый цвет), осмиевая кислота (импрегнируемый ею жир окрашиватся в черный цвет), резорцинфуксин Вейгерта (дает темно-синюю окраску эластических волокон), орсеин (окрашивает эластические волокна в бурый цвет). Метиленовый синий окрашивает нервные элементы в синий цвет, а при импрегнации серебром они приобретают коричневый цвет.

Чаще всего для окрашивания гистологических срезов применяется окрашивание раствором гематоксилина (приготовленным по методу Бемера) и 1-2% эозином.

8. Заключение среза.

Окрашенные и промытые в воде срезы во избежание помутнения обезвоживают в спиртах (70º, 96º), просветляют в карбол-ксилоле, ксилоле, а затем на предметное стекло, где находится срез, помещают каплю бальзама и срез накрывают покровным стеклом. Бальзам представляет собой растворенную в ксилоле смолу одного из видов сосны, растущей в Канаде (канадский бальзам), смолу пихты (сибирский бальзам) или специальную синтетическую среду.

При исследовании биопсий с целью уточнения диагноза в гистологических лабораториях прибегают к ускоренной обработке материала. Кусочки тканей и органов при этом проходят те же этапы обработки, но за 5-7 дней. Иногда производится так называемая срочная биопсия, когда в течение 15-80 мин. материал фиксирует, получают срезы, окрашивают их и заключают. Быструю фиксацию производят в 10% формалине, подогреваемом пламенем горелки или с использованием СВЧ-печи. Уплотнения добиваются замораживанием (хлорэтилом, углекислотой или с помощью замораживающего микротома).

Примерная схема окраски препаратов гематоксилин — эозином

1. Парафиновые или замороженные срезы доводят до воды.

2. Окраска гематоксилином — в течении 3-5 минут.

3. Промывка в воде – 2 минуты.

4. Дифференцировка в спирте, подкисленном соляной кислотой (1% раствор соляной кислоты в 70 % спирте), несколько секунд с последующим восстановлением подщелоченной водой (около 1 минуты). Этот этап желателен, но не обязателен.

Читайте также: