Нст тест спонтанный краткий доклад патофизиология

Обновлено: 28.04.2024

Метод определения Фагоцитарная активность - оценка фагоцитоза бактерий с флюоресцентной меткой. Иммуноглобулины A,M,G – иммунотурбидиметрия.

Оценка состояния различных звеньев иммунитета, используемая в диагностике первичных и вторичных иммунодефицитов, аутоиммунных, лимфопролиферативных, инфекционных, гематологических заболеваний.

Концентрация ЦИК
Патогенность ЦИК
Акт. фагоцитоза нейтрофилов
Фагоцит. число нейтроф.
НСТ спонтанная, активность (нейтр.)
НСТ индуциров., активность (нейтр.)
Индекс стимуляц.НСТ-теста(нейтр.)
Акт. фагоцитоза моноцитов
Фагоцит. число моноцитов
НСТ спонтанная, активность (мон.)
НСТ индуциров., активность (мон.)
Индекс стимуляц.НСТ-теста (мон.)
Лейкоциты
Нейтрофилы (общ.число)
Лимфоциты, %
Лимфоциты
Моноциты, %
Моноциты
Эозинофилы
Базофилы
Ig A
Ig M
Ig G

Т-лимфоциты – лимфоциты, созревание которых происходит в тимусе (отсюда их название). Они контролируют работу В-лимфоцитов, ответственных за образование антител, т. е. за гуморальный иммунный ответ. Т-хелперы, Th (от англ. to help – помогать) – разновидность Т-лимфоцитов, несут на своей поверхности структуры, способствующие распознаванию антигенов, презентированных вспомогательными клетками, участвуют в регуляции иммунного ответа, вырабатывая различные цитокины. Цитотоксические Т-клетки - распознают фрагменты антигена, на поверхности клеток-мишеней, ориентируют свои гранулы по направлению к мишени и высвобождают их содержимое в области контакта с ней. При этом некоторые цитокины являются сигналом гибели (по типу апоптоза) для клеток-мишеней.

ЕК-клетки (естественные клетки-киллеры) или натуральные киллеры-клетки с естественной, неиммунной цитотоксической активностью к неопластически изменённым клеткам-мишеням, которые не относятся ни к зрелым Т- или В-лимфоцитам, ни к моноцитам. Т-ЕК-клетки (ЕКТ) – клетки с естественной неиммунной киллерной активностью, имеющие признаки Т-лимфоцитов.

HLA-DR – один из антигенов MHC класса II (major histocompatibility complex - главный комплекс гистосовместимости), участвующих в презентации потенциально чужеродных антигенов, что необходимо для формирования адекватного иммунного ответа. При иммунофенотипировании может быть использован в качестве маркёра активированных клеток. CD3+HLA-DR+ - клетки, представляющие собой зрелые активированные Т-лимфоциты человека. CD3-HLA-DR+ - активированные клетки, не относящиеся к Т-лимфоцитам (В-лимфоциты и активированные ЕК).

Способность лимфоцитов к активации.

Способность лимфоцитов к активации в данном тесте оценивают по содержанию лимфоцитов, экспрессирующих CD69 в ответ на инкубацию в присутствии ФГА (митоген растительного происхождения). CD69 (другие названия - activation inducer molecule, AIM; early activation antigen, EA-1) – ранний маркёр активации, трансмембранный белок типа I. Этот белок вовлечен в ранние механизмы активации Т-клеток, ЕК-клеток, В-клеток, моноцитов и тромбоцитов.

Фагоцитарная активность лейкоцитов.

Данные по фагоцитарной активности нейтрофилов и моноцитов (относительное содержание клеток, фагоцитировавших добавленные к пробе при инкубации меченые флюоресцентной меткой бактерии) позволяют оценить резервные возможности этих клеток по поглощению и перевариванию чужеродных агентов.

Циркулирующие иммунные комплексы общие (ЦИК)

Одновременное присутствие высоких концентраций антигенов и их специфических антител может вести к образованию циркулирующих иммунных комплексов. Иммунные комплексы могут выходить из кровотока в мелких сосудах и откладываться в тканях, например, в гломерулах почек, в лёгких, коже, суставах, стенке сосудов. ЦИК обладают способностью связывать и активировать комплемент, что ведёт к повреждению ткани. Повышение уровня ЦИК может наблюдаться при аутоиммунных заболеваниях, хронических инфекционных заболеваниях, при которых постоянная продукция антигена инфекционным агентом сочетается с иммунным ответом на него (хронические гепатиты). Клинически это часто проявляется гломерулонефритами, артритами, нейропатиями. Несмотря на непосредственную роль в патогенезе некоторых заболеваний, определение ЦИК не всегда информативно, поскольку количество иммунных комплексов, отложившихся в тканях более важно, чем количество комплексов, циркулирующих в крови. Исследование ЦИК может быть недостаточно чувствительным и специфичным в диагностике болезней, вызываемых иммунными комплексами, и должно дополняться исследованием эффектов ЦИК на функцию органов (например, концентрация креатинина и анализ мочи), а также определением С3 С4 компонентов комплемента (см. тест № 193 ), количество которых снижается вследствие усиленного потребления.

Иммуноглобулины. См. информацию.к тестам Иммуноглобулины IgG, IgA, IgM, - №№ 45 , 46 , 47 .

Данные иммунологического исследования интерпретирует врач-иммунолог в комплексе со всеми клинико-анамнестическими данными конкретного пациента. При оценке иммунного статуса пациента результаты исследования оценивают с точки зрения природы и стадии патологического процесса, сопутствующих заболеваний, приёма лекарственных препаратов и пр. При этом важны не только абсолютные значения отдельных показателей, но и их соотношение и динамика показателей. Изменения иммунологических показателей могут быть проявлением нормальной реакции организма на воздействие физиологических или патологических факторов (с различной картиной сдвигов на разных стадиях заболевания), отражать чрезмерную активацию, истощение иммунной системы, характеризовать врождённый или приобретённый дефект отдельных звеньев иммунной системы.

Строго натощак (в период с 7.00 до 11.00) после ночного периода голодания от 8 до 14 часов.

Важнейшей характеристикой функции гранулоцитов является оценка их фагоцитарной активности.Ее снижение может быть результатом как недостаточности опсонизирующих факторов сыворотки,так и дефектов самих клеток.(нарушения двигательной и метаболической активности врожденного или приобретенного характера).Для определения фагоцитарной активности используют стандартные штаммы непатогенных микроорганизмов (например стафилококки штамма 209,убитые бактериями, или аутофлора больного).

Тест с нитросиним тетразолием используется для выявления так называемых активированных гранулацитов и моноцитов. В основе активации фагоцитов лежит резкое усиление окислительных реакций. К числу индикаторов этого явления относятся НСТ-тест. Поглощенные из раствора НСТ под влиянием окислительных процессов в клетке превращается в нерастворимый формазан. Последний определяется в клетке в виде темно-синих гранул.

Различают спонтанный и стимулированный НСТ-тест. Результаты спонтанного теста указывают на количество активированных клеток по крови больного, например под влиянием инфекции. Результаты стимулированного теста дают представление о способности исследуемых нейтрофилов к активации in vitro. Этот тест следует проводить при сниженном числе спонтанных НСТ-положительных клеток у больного, чтобы выявить наличие или отсутствие окислительного метаболизма.

. Методика исследования.

Необходимые реактивы и материалы. КН42ОРО44О, На42ОРО44О,NaCl,глюкоза, НСТ, гепарин, спирт, однопроцентный водный раствор метиленового зеленого, микропипетки, микроскоп.

Приготовление раствораа. Один процент 15м фосфатного буфера с рН 7,2 и 0,6 % раствора натрия хлора.

б. 0,1 % НСТ в изотоническом растворе натрия-хлора. Для получения красителя необходимо длительное перемешивание и подогревание в горячей воде. Растворы а. и б. фильтруют через бумажные фильтры и хранят в холодильнике при температуре 10 с в течение 2-4 недель. Непосредственно перед установкой теста смешивают равное количество растворов а и б, смесь нагревают до 30-37 с. Кровь из пальца больного берут пипеткой, промытой гепарином. В центрифужной пробирке смешивают 0,1 мл крови и подогретой смеси. Инкубация 25 мин в термостате при 37 с , затем 10 мин при комнатной температуре. Из верхнего слоя клеточного осадка готовят мазки, высушивают на воздухе 3-5 мин, фиксируют СН3-ОН затем окрашивают метиленовым зеленым в течение 10 мин. Препараты просматривают под микроскопом с иммерсией.

Постановка стимулированного нст-теста.

Гипарнизированную кровь инкубируют со стимулятором (двух миллиардная взвесь стафилококка - штамм 209 и др.) в равных количествах. Затем проводят вышеописанный тест.

Учет результатов.

В клинико-лабораторной практике при постановке теста распространение получил цитохимический учет результатов, основанный на микроскопическом определении процентного содержания нейтрофилов с гранулами формазана в цитоплазме. Обычно анализу подвергают 100-200 сегментоядерных нейтрофилов. Показатель индуцированного варианта реакции вычисляют как разницу процентного содержания поглотивших и восстановивших тетразолей клеток после действия фактора стимуляции по сравнению с данными, полученными до стимуляции.

Для количественной оценки активности теста все клетки делят на 4 группы. К нулевой группе относят нейтрофилы без гранул, в первую группу включают клетки с единичными гранулами или в которых площадь окраски занимает от 25 до 30%. Во вторую группу относят нейтрофилы цитоплазма которых на 30-70% занята гранулами формазана (2степ активность), в третью - нейтрофилы до 100% заполненные гранулами. Определяют число клеток, принадлежащих в зависимости от активности ферментов к каждому из типов. Это число умножают на номер типа. Сумма полученных произведений - показатель реакции.

Показатель НСТ-теста = 1а+2б+3с, где а, б, с -количество клеток соответственного типа.

Результаты влияния локального применения эпидермального фактора роста на функциональную активность фагоцитов периферической крови при экспериментальной термической травме представлены в табл. 35. На 1 сутки наблюдения не обнаружено значимых отличий при сравнении с контрольной группой. Через 3 суток после термической травмы обнаружено статистически значимое снижение поглотительной активности фагоцитов: уменьшалось количество активно фагоцитирующих частицы латекса клеток, а также количество захватываемых объектов фагоцитоза в пересчете на 100 или 1 клетку, при этом, отмеченные показатели не достигали уровня интактных животных и продолжали оставаться повышенными. В это же время, снижалось количество фагоцитов, активно генерирующих АФК в спонтанном НСТ-тесте, но функциональный резерв фагоцитов, оцениваемый в индуцируемом НСТ-тесте, не изменялся и был снижен при сравнении с группой интактных животных.

На 7 сутки термической травмы поглотительная способность фагоцитов у крыс опытной группы также снижалась по сравнению с контрольной группой, причем фагоцитарное число, т.е. количество частиц латекса, захваченных 1 фагоцитом, достигало значений в группе интактных животных. До уровня интактных животных снижалась активность спонтанного НСТ-теста и повышалась интенсивность индуцированного НСТ-теста, что отражает восстановление способности фагоцитов к генерации АФК, впрочем, активность индуцированного НСТ-теста продолжала оставаться сниженной. Через 14, 21 и 28 суток после индукции термической травмы при локальном использовании ЭФР функциональная способность фагоцитов полностью восстанавливалась и не отличалась от группы интактных животных. При этом, в контрольной группе животных, не получающих ЭФР, на 21 сутки наблюдения интенсивность фагоцитоза сохранялась повышенной.

В целом, полученные результаты свидетельствуют, что локальное применение ЭФР приводит к более раннему восстановлению функциональной активности фагоцитов. Изменение активности фагоцитоза, спонтанного и индуцированного НСТ-тестов может быть обусловлено падением количества нейтрофилов в периферической крови – основной по количественному составу популяции фагоцитов. Действительно, нами обнаружены положительные связи между количеством нейтрофилов в крови и активностью фагоцитоза на 3 сутки (R = 0,39; p

Читайте также: