Реакция кумбса микробиология кратко

Обновлено: 05.07.2024

Прямая реакция Кумбса

Антитела, находящиеся на поверхности эритроцитов, могут быть как в статичном, так и в свободном состоянии в плазме крови. В зависимости от состояния антител проводится прямая или непрямая реакция Кумбса. Если есть основания для предположения, что антитела зафиксированы на поверхности эритроцитов, проводится прямой тест Кумбса. В этом случае тест проходит в один этап — добавляется антиглобулиновая сыворотка. Если на поверхности эритроцитов присутствуют неполные антитела, происходит агглютинация эритроцитов.

Непрямая реакция

Непрямая реакция Кумбса протекает в 2 этапа. Сначала необходимо искусственно осуществить сенсибилизацию эритроцитов. Для этого эритроциты и исследуемую сыворотку крови инкубируют, что вызывает фиксацию антител на поверхности эритроцитов. После чего проводится второй этап теста Кумбса — добавление антиглобулиновой сыворотки.

Примечания

Wikimedia Foundation . 2010 .

Полезное

Смотреть что такое "Реакция Кумбса" в других словарях:

РЕАКЦИЯ КУМБСА — (Coombs test) метод определения резусантител на поверхности эритроцитов, которые вызывают осаждение глобулинов в сыворотке крови. Данный тест используется для диагностики гемолитической анемии у младенцев с резус несовместимостью, у которых… … Толковый словарь по медицине

Реакция Кумбса (Coombs' Test) — метод определения резусантител на поверхности эритроцитов, которые вызывают осаждение глобулинов в сыворотке крови. Данный тест используется для диагностики гемолитической анемии у младенцев с резус несовместимостью, у которых наблюдается… … Медицинские термины

Кумбса реакция — (антиглобулиновал проба) метод обнаружения естественно или искусственно связанных с клетками (обычно с эритроцитами) неполных Ат с помощью антиглобулиновой с ки (А. с.). А. с., преципитируя неполные Ат, включает в этот процесс клетки носители,… … Словарь микробиологии

КУМБСА РЕАКЦИЯ — (по имени британского иммунолога R. R. A. Coombs, род. в 1921, синоним – антиглобулиновая проба) – серологическая реакция, основанная на агглютинации эритроцитов неполными ауто– и изоантителами в присутствии антиглобулиновой сыворотки. При… … Энциклопедический словарь по психологии и педагогике

РЕАКЦИЯ ТРАНСФУЗИОННАЯ ГЕМОЛИТИЧЕСКАЯ — мед. Трансфузионная гемолитическая реакция (ТГР) гемолиз эритроцитов реципиента или донора (редко), возникающий при переливании крови и её компонентов. Реакции могут быть иммунной или неиммунной природы. Этиология и патогенез • Иммунные реакции… … Справочник по болезням

Кумбса реакция — (R. R. A. Coombs, род. в 1921 г., англ. иммунолог) серологическая реакция, основанная на агглютинации эритроцитов неполными ауто и изоантителами в присутствии антиглобулиновой сыворотки; применяется в трансфузиологии, судебной медицине, а также… … Большой медицинский словарь

КУМБСА РЕАКЦИЯ — Кумбса реакция, серологическая реакция, позволяющая обнаружить неполные антитела, фиксированные на поверхности эритроцитов или содержащиеся в плазме крови. К. р. основана на применении антиглобулиновой сыворотки, получаемой путём гипериммунизации … Ветеринарный энциклопедический словарь

КУМБСА РЕАКЦИЯ — Используется для обнаружения моновалентных или так называемых неполных антител, в частности для анализа групп крови свиней и некоторых других животных … Термины и определения, используемые в селекции, генетике и воспроизводстве сельскохозяйственных животных

Иммунологи́ческие ме́тоды иссле́дования — диагностические методы исследования, основанные на специфическом взаимодействии антигенов и антител. Широко используются для лабораторной диагностики инфекционных и паразитарных болезней, определения групп крови, тканевых и опухолевых антигенов,… … Медицинская энциклопедия

Реакцию агглютинации для определения антирезусных антител (непрямую реакцию Кумбса) применяют у больных при внутрисосудистом гемолизе. У некоторых таких боль­ных обнаруживают антирезусные антитела, которые являются неполными, одновалент­ными. Они специфически взаимодействуют с резус-положительными эритроцитами, но не вызывают их агглютинации. Наличие таких неполных антител определяют в непрямой реакции Кумбса. Для этого в систему антирезусные антитела + резус-положительные эритроциты добавляют антиглобулиновую сыворотку (антитела против иммуноглобули­нов человека), что вызывает агглютинацию эритроцитов. С помощью реакции Кумбса диагностируют патологические состо­яния, связанные с внутрисосудистым лизисом эритроцитов иммунного генеза, например ге­молитическую болезнь новорожденных: эрит­роциты резус-положительного плода соединя­ются с циркулирующими в крови неполными антителами к резус-фактору, которые пере­шли через плаценту от резус-отрицательной матери.

Механизм. Сложность выявления неполных (моновалентных) антител связана с тем, что эти антитела, связываясь с эпитопами специфического антигена, не образуют структуру решетки и реакция между антигенами и антителами не выявляется ни агглютина­цией, ни преципитацией, ни другими тестами. Для выявления образовавшихся комплексов антиген — антитело приходится ис­пользовать дополнительные тест-системы. Для выявления непол­ных антител, например к резус-антигену эритроцитов в сыворот­ке крови беременной женщины, реакция ставится в два этапа: 1) к двукратным разведениям испытуемой сыворотки добавляют эритроциты, содержащие резус-антиген, и выдерживают при 37 °С в течение часа; 2) к тщательно отмытым после первого этапа эритроцитам добавляют кроличью античеловеческую анти-глобулиновую сыворотку (в заранее оттитрованном рабочем раз­ведении). После инкубации в течение 30 мин при 37 °С резуль­таты оценивают по наличию гемагглютинации (положительная реакция). Необходимо ставить контроль ингредиентов реакции: 1) антиглобулиновая сыворотка + заведомо сенсибилизирован­ные специфическими антителами эритроциты; 2) обработанные нормальной сывороткой эритроциты + антиглобулиновая сыво­ротка; 3) обработанные исследуемой сывороткой резус-отрица­тельные эритроциты + антиглобулиновая сыворотка.


50. Реакция пассивной гемагглютинации. Механизм. Компоненты. Применение.

Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (РНГА, РПГА) основана на использова­нии эритроцитов (или латекса) с адсорбиро­ванными на их поверхности антигенами или антителами, взаимодействие которых с соот­ветствующими антителами или антигенами сыворотки крови больных вызывает склеива­ние и выпадение эритроцитов на дно пробирки или ячейки в виде фестончатого осадка.

Компоненты. Для постанов­ки РНГА могут быть использованы эритроциты барана, лошади, кролика, курицы, мыши, человека и другие, которые заготавли­вают впрок, обрабатывая формалином или глютаральдегидом. Ад­сорбционная емкость эритроцитов увеличивается при обработке их растворами танина или хлорида хрома.

Антигенами в РНГА могут служить полисахаридные АГ микро­организмов, экстракты бактериальных вакцин, АГ вирусов и риккетсий, а также другие вещества.

Эритроциты, сенсибилизированные АГ, называются эритроцитарными диагностикумами. Для приготовления эритроцитарного диагностикума чаще всего используют эритроциты барана, обла­дающие высокой адсорбирующей активностью.

Применение. РНГА применяют для диагностики инфекционных болезней, определения гонадотропного гор­мона в моче при установлении беременности, для выявления повышенной чувствительнос­ти к лекарственным препаратам, гормонам и в некоторых других случаях.

Механизм. Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) отличается значительно более высокой чувствительностью и специфич­ностью, чем реакция агглютинации. Ее используют для иденти­фикации возбудителя по его антигенной структуре или для индикации и идентификации бактериальных продуктов — токси­нов в исследуемом патологическом материале. Соответственно используют стандартные (коммерческие) эритроцитарные анти­тельные диагностикумы, полученные путем адсорбции специфи­ческих антител на поверхности танизированных (обработанных танином) эритроцитов. В лунках пластмассовых пластин готовят последовательные разведения исследуемого материала. Затем в каждую лунку вносят одинаковый объем 3 % суспензии на­груженных антителами эритроцитов. При необходимости реакцию ставят параллельно в нескольких рядах лунок с эритроцитами, нагруженными антителами разной групповой специфичности.

Через 2 ч инкубации при 37 °С учитывают результаты, оценивая внешний вид осадка эритроцитов (без встряхивания): при отри­цательной реакции появляется осадок в виде компактного.диска или кольца на дне лунки, при положительной реакции — харак­терный кружевной осадок эритроцитов, тонкая пленка с неров­ными краями.

Диагностика

1. Что такое антиглобулиновый тест, или реакция Кумбса?

Антиглобулиновый тест, или реакция Кумбса проводится для того, чтобы выявить определенные антитела, которые атакуют красные кровяные клетки (эритроциты).

Антитела это белки, производимые иммунной системой. Как правило, антитела связываются с посторонними веществами, такими как бактерии и вирусы, и уничтожают их.

2. Зачем нужен тест на антитела?

Тест на антитела может проводиться в следующих случаях:

Перед переливанием крови

Вы наверняка знаете, что у человека может быть одна из четырех групп крови. И антиглобулиновый тест можно проводить для определения возможности переливания крови. Если вам делают переливание, кровь донора должна соответствовать вашему типу (иметь одинаковые антигены). Если при переливании антигены отличаются, иммунная система разрушит перелитые клетки. Это может привести к серьезным заболеваниям и даже смерти. Именно поэтому поиск нужного типа крови является столь важным фактором.

Для выявления риска резус-сенсибилизации

Резус это антиген. Его полное название - резус-фактор. Тест Кумбса используется для обнаружения антител к резус-фактору в крови у беременных женщин. Если женщина с отрицательным резус-фактором крови беременна ребенком с положительным резус-фактором (он может передаваться от отца), есть риск наступления резус-сенсибилизации. Резус- сенсибилизация происходит, когда кровь ребенка смешивается с кровью матери во время беременности или родов. Если группа крови матери несовместима с группой крови ребенка, то ее иммунная система может атаковать плод, воспринимая его чужеродным объектом. При этом может развиться тяжелое заболевание, именуемое эритробластозой плода. В редких случаях, если заболевание не лечить, плод или новорожденный могут погибнуть.

Женщине с отрицательным резус-фактором крови могут провести инъекцию анти-Rh- гаммаглобулина (например, RhoGAM), используемого для предотвращения развития Rh- гемолитической болезни.

Для диагностики аутоиммунной гемолитической анемии

Аутоиммунная гемолитическая анемия является редким заболеванием, связанным с образованием антител к собственным антигенам эритроцитов.

3. Типы антиглобулиновой пробы

Существуют два типа антиглобулиновой пробы, или реакции Кумбса: прямой и непрямой.

Прямая реакция Кумбса, или прямой антиглобулиновый тест обнаруживает антитела, связанные с эритроцитами. Он используется для определения анемии. При этой болезни эритроциты разрушаются быстрее, чем производятся.

Непрямая реакция Кумбса, или непрямой антиглобулиновый тест проводится для поиска антител, не связанных с эритроцитами. Для пробы используется сыворотка крови, в которой и находятся антитела. Эта процедура достаточно редкая: в основном ее проводят для определения возможности переливания крови или как этап обследования беременных женщин.





АГС производится путем смешивания сыворотки из крови лабораторных животных, иммунизированных иммуноглобулинами класса G человека, и моноклональных антител к одному из компонентов – C3D комплементу сыворотки человека. АГС вызывает агглютинацию эритроцитов, сенсибилизированных специфическими антителами. При отсутствии антител на эритроцитах под воздействием АГС положительная реакция не происходит.

Непрямая реакция Кумбса позволяет определить наличие:

Непрямой антиглобулиновый тест: выявление антигенов эритроцитов

Приводим методику непрямой реакции Кумбса на примере цоликлона анти-D IgG.

  1. Промаркируйте чистую пробирку: укажите ФИО исследуемого лица.
  2. Внесите в пробирку 2 капли (приблизительно 0,1 мл) цоликлона анти-D IgG.
  3. Добавьте 2 капли 5 % взвеси предварительно отмытых физиологическим раствором анализируемых эритроцитов. Смешайте исследуемые образцы с цоликлоном.
  4. Инкубируйте смесь на водяной бане или в термостате при 37 °С на протяжении 30 минут.
  5. Добавьте в пробирку пастеровской пипеткой 5 - 10 мл физраствора.
  6. Центрифугируйте пробирку с центробежным ускорением 1200 g при 18 – 25 °С на протяжении одной минуты.
  7. Удалите физраствор.
  8. Повторно проведите процедуру отмывки эритроцитов с помощью центрифугирования еще 2 – 3 раза.
  9. Добавьте 2 капли антиглобулиновой сыворотки к осадку кровяных телец, выполните перемешивание.
  10. Центрифугируйте пробирку с центробежным ускорением 1200 g в течение минуты при температуре 18 – 25 °С.
  11. Добавьте с помощью дозатора или пастеровской пипетки 3 – 5 капель физраствора.
  12. Ресуспендируйте осадок и визуально оцените наличие агглютинации. Выраженные агглютинаты на дне пробирки на фоне прозрачного раствора свидетельствуют об обнаружении антигена эритроцитов. Непрозрачная суспензия кровяных телец говорит об отсутствии антигена.

маркировка пробирки

маркировка пробирки

добавление цоликлона в пробирку

добавление цоликлона в пробирку

отбор образца крови

отбор образца крови

инкубация смеси в термостате

инкубация смеси в термостате

центрифугирование пробирки

центрифугирование пробирки

внесение антиглобулиновой сыворотки

внесение антиглобулиновой сыворотки

агглютинаты на дне пробирки

агглютинаты на дне пробирки

непрозрачная суспензия – отрицательный результат

непрозрачная суспензия – отрицательный результат

Реакция Кумбса: скрининг изоиммунных антиэритроцитарных антител

Обнаружение IgG-антител в тесте Кумбса

  1. При отрицательном результате на прошлом этапе исследования добавьте в пробирку пастеровской пипеткой 5 мл 0,9 % раствора NaCl.
  2. Центрифугируйте пробирку при 1200 g на протяжении 15 – 20 секунд при температуре воздуха 18 – 25 °С. Пастеровской пипеткой аккуратно избавьтесь от супернатанта.
  3. Повторно выполните отмывание эритроцитов еще 2 – 3 раза.
  4. Добавьте в пробирку 1 – 2 капли антиглобулиновой сыворотки. Выполните тщательное перемешивание.
  5. Центрифугируйте пробирку при 1200 g 15 – 20 секунд.
  6. Аккуратно разбейте осадок эритроцитов и проведите визуальную оценку результата реакции. Выявление агглютинации означает присутствие в сыворотке больного IgG-антител против антигенов эритроцитов донора.

центрифугирование смеси

центрифугирование смеси

выявление агглютинации

выявление агглютинации

Читайте также: