Окраска по ожешко микробиология кратко

Обновлено: 04.07.2024

Метод окраски Ожешко — это, по сути, модифицированный метод Циля — Нильсена. Если метод Циля — Нильсена подходит для окраски кислотоустойчивых микроорганизмов, то метод Ожешко подходит для окраски ещё и споровых форм. Почему?

По методу Циля — Нильсена мазок окрашивают фуксином (красный) при нагревании, который легко фиксируют все микроорганизмы. Однако клеточная стенка кислотоустойчивых микроорганизмов богата липидами, слабо восприимчивыми к кислоте (потому они и называются кислотоустойчивыми), а поэтому после обработки окрашенного фуксином мазка серной кислотой краска вымывается отовсюду, кроме клеточных стенок кислотоустойчивых микроорганизмов. Потом для контраста добавляют метиленовый синий.

По методу Ожешко происходит всё то же самое, но все действия предваряются одним дополнительным: первоначально добавляется серная кислота. Споры наименее восприимчивы к красителям, поэтому эта первично добавляемая кислота нужна для разрыхления их стенок и улучшения впитывания ими красителя. Затем уже можно окрашивать клетки и дифференцировать кислотоустойчивые, как в методе Циля — Нильсена.

Таким образом, схематично эти методы можно сравнить так:

Метод Циля — Нильсена:
1. фуксин (все клетки красные, споры бесцветные) →
2. серная кислота (кислотоустойчивые клетки красные, остальное бесцветное) →
3. метиленовый синий (кислотоустойчивые клетки красные на контрастном синем фоне)

Метод Ожешко:
1. серная кислота (споры разрыхляются) →
2. фуксин (все клетки и споры красные) →
3. серная кислота (кислотоустойчивые клетки и споры красные, остальное бесцветное) →
4. метиленовый синий (кислотоустойчивые клетки и споры красные на контрастном синем фоне, вегетативные некислотоустойчивые формы не выделяются).

Итак, первая серная кислота нужна для разрыхления, вторая для дифференцировки.

1. На нефиксированный мазок нанести 0,5 % раствор хлористоводородной кислоты и подогреть в течение 2—3 мин на пламени.

2. Кислоту слить, препарат промыть водой, просушить и фиксировать над пламенем.

3. Окрасить по методу Циля—Нильсена.

Споры бактерий приобретают красный цвет, а вегетативные формы — синий (рис. 2.2.3; на вклейке). Споры бактерий имеют многослойную клеточную стенку сложного строения, практически непроницаемую для красителей, поэтому для повышения их тинкториальных свойств используют более жесткие условия протравливания, чем для окрашивания кислотоустойчивых бактерий.

Окраска спор по методу Шеффера—Фултона

1. На фиксированный мазок нанести 5 % раствор малахитового зеленого и 3—4 раза нагреть до появления паров.

2. Промыть водой.

3. Докрасить 0,5 % сафранином в течение 30 с.

4. Промыть водой, высушить и микроскопировать.
Споры бактерий окрашиваются в зеленый цвет, вегетатив
ные клетки — в красный.

Методы окраски препаратов. Окраска по методу Синева и метиленовым синим

В лаборатории применяются анилиновые краски, приготавливаемые из анилина и других производных каменноугольного дегтя. Для окраски препаратов применяются основные и кислые краски. Основные краски хорошо воспринимаются микробами и ядерным хроматином. Кислые краски хорошо окрашивают протоплазму и слабее микроорганизмы.

Кислыми красителями называются свободные окрашенные кислоты или соли этих кислот, обычно соли натрия. Основные красители — это соли красящих оснований, чаще всего хлоргидраты.

Насыщенные спиртовые растворы красок, из которых готовят рабочие краски, хранят в стеклянных банках с притертой пробкой.

Изготовление растворов заключается в следующем.

В флакон с притертой пробкой насыпают 10 г сухой краски, наливают 100 мл 96° спирта ректификата и при ежедневном взбалтывании оставляют раствор на несколько дней, после чего эта краска может быть употреблена для спирто-водных растворов, необходимых для окраски препаратов.

Наиболее часто употребляющиеся растворы красок:

Разведенный фуксин (фуксин Пфейффера)

10 мл карболового фуксина Циля, 90 мл дистиллированной воды. Этот раствор при хранении портится, поэтому его готовят по мере надобности и хранят не более суток.

Карболовый раствор кристалл-виолета

Краски — 1 г Спирта ректификата 96°— 10 мл Кристаллической карболовой кислоты — 2 г Дистиллированной воды — 100 мл

Краску растирают с карболовой кислотой, добавляя спирт, а потом дистиллированную воду, через сутки фильтруют.

Примечание. Вместо кристалл-виолета можно пользоваться насыщенными растворами метил-виолета либо генцианвиолета. Последний при окрашивании выпадет в осадок, в практике он менее применим.

Окраска по методу Синева

Для окраски применяются кусочки фильтровальной бумаги, пропитанные спиртовым раствором краски. Листы фильтровальной бумаги, разложенные на стекле, обливают 1—2% раствором (в 96° спирте) краски и затем окрашенную высушенную бумагу разрезают на кусочки размером 2X4 см и сохраняют в стеклянных темных банках с притертой пробкой. Приготовленные таким способом бумажки не теряют окрашивающих свойств весьма продолжительное время. Приготовленные препараты красятся в зависимости от исследуемого материала простым либо сложным методом.

К простому методу относится: окраска разведенным фуксином (фуксином Пфейффера), окраска щелочной метиленовой синькой. Окраска разведенным фуксином. На приготовленный на предметном стекле фиксированный на пламени и остывший исследуемый препарат наливают на 1—2 минуты разведенный фуксин. Затем препарат промывают водой и высушивают на воздухе.

Окрашивание метиленовой синькой. На приготовленный, высушенный и фиксированный мазок наливают пипеткой метиленовую синьку на 2—3 минуты, после чего препарат смывают водой и высушивают.

Ядра при этом окрашивании более интенсивно воспринимают окраску и резко выделяются над протоплазмой, которая окрашивается слабее.

К сложным методам окраски относятся окрашивания одного и того же препарата растворами нескольких красок в определенном порядке для дифференциации микробов вследствие их сродства к определенным краскам.

В число сложных методов входят: окраска кислотоустойчивых микробов по Циль-Нильсену, окраска по Граму, окраска па Романовскому-Гимза и другие.

Микроскопическое исследование. Подготовка материала для микроскопического исследования2. Темнопольная микроскопия. Техника темнопольной микроскопии3. Фазово-контрастная микроскопия. Техника фазово-контрастной микроскопии4. Подготовка материала для электронной микроскопии.

Подготовка материала к окраске5. Методы окраски препаратов. Окраска по методу Синева и метиленовым синим6. Окраска кислотоустойчивых микробов. Окраска микробов по Граму7. Окраска по Романовскому-Гимза. Окраска спор8. Приготовление питательных сред. Требования к питательным средам9. Взятие малых количеств крови. Как брать кровь из пальца для исследований?10. Приготовление мазков крови.

Взятие крови для определения СОЭ

1 2 3 4 5 6 7 8 9 … 40

ОКРАСКА КИСЛОТОУСТОЙЧИВЫХ БАКТЕРИЙ ПО ЦИЛЮ-НИЛЬСЕНУ.

Кислотоустойчивые бактерии отличаются высоким содержанием липидов в клеточной стенке. Они с трудом окрашиваются, но затем удерживают основной краситель при обесцвечивании кислотой. Некислотоустойчивые бактерии обесцвечиваются кислотой и окрашиваются дополнительным красителем. .

Mycobacterium tuberculosis в мокроте больного. Окраска по Цилю-Нильсену. Увеличение х___________________

ОКРАСКА СПОР ПО ОЖЕШКО.

Метод Ожешко сходен с методом Циля-Нильсена, но отличается использованием раствора соляной кислоты в качестве протравы, разрыхляющей оболочку споры, которая плохо воспринимает красители.

Окраска по Ожешко. Увеличение х_

ОКРАСКА ВОЛЮТИНА ПО НЕИССЕРУ.

При окраске метиленовым синим образуется нерастворимый в воде комплекс: краситель + волютин. При промывке водой тело микробной клетки обесцвечивается, а гранулы волютина сохраняют синюю окраску. Тело клетки затем докрашивается везувином в желтый цвет.

Corynebacterium diphtheriae. Окраска по Нейссеру. Увеличение х_

БАКТЕРИОСКОПИЧЕСКИЙ МЕТОД ДИАГНОСТИКИ

Бактериоскопический метод диагностики -______________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________

Метод используется для диагностики заболеваний, возбудители которых обладают характерными морфологическими, тинкториальными свойствами и типичной локализацией в организме. Например: гонорея, сифилис, возвратные тифы, туберкулез, некоторые микозы.

Грам (+) и Грам (-) представители и их воздействие на организм

Итак, клеточная стенка грамположительных бактерий имеет лишь один слой. Единственное исключение, известное в современной микробиологии, – Deinococcus-Thermus. Несмотря на наличие защитной мембраны, при проведении теста она хорошо окрашивается в синий цвет.

Основными представителями Грам (+) бактерий являются:

Кокковые или шаровидные (кроме протеобактерий Neisseria):
- стафилококк, провоцирующий сепсис крови и гнойные высыпания на коже;
- стрептококк, ведущий к развитию ревматизма и тонзиллитов;
Палочковидные:
- фирмикуты, служащие источником сибирской язвы и токсических инфекций;
- клостридии, как возбудители столбняка и ботулизма;
- листерия, заражение которой приводит к воспалению мозга.
Булавовидные:

Грамотрицательные бактерии, более устойчивые к антителам за счет дополнительной мембраны, представлены такими разновидностями:

Спиралевидные:
- спирохеты, которые являются возбудителями лептоспироза, возвратного тифа и сифилиса;
- спириллы, вызывающие содоку – лихорадкоподобное состояние.
Палочки:
- риккетсии, чей главной характеристикой служит внутриклеточный паразитизм;
- хламидии – без лечения могут развиться ЗППП, конъюнктивит, пневмония.

Алгоритм окраски по Ожешко;

Алгоритм окраски по Бурри-Гинсу

Морфологические значения клетки

1. На предметное стекло (ближе к узкому краю) нанести каплю черной туши, разведенной в 10 раз.

2. В нее внести каплю культуры, перемешать две капли

3. Ребром шлифовального стекла сделать мазок, так же как и мазок крови

4. Высушить на воздухе

5. Зафиксировать химическим способом

Осторожно промыть водой. 7

Окрасить фуксином Пфейффера — 3-5 минут

7. Окрасить фуксином Пфейффера — 3-5 минут

Осторожно промыть водой, высушить на воздухе

Фильтровальной бумагой для высушивания препарата не пользоваться, не повредить препарат.

Микроскопия иммерсионная. Видим: фон препарата черный, клетки красные, капсулы не окрашены, в виде бесцветного ореола вокруг клетки.

1. На высушенный на воздухе мазок налить несколько капель 0,5% р-ра хлороводородной кислоты.

2. Подогреть до образования паров

3. Высушить и зафиксировать над пламенем спиртовки

4. Фиксировать препарат покрыть фильтровальной бумагой и нанести фуксин Циля

5. Удерживая стекло пинцетом, препарат подогреть над пламенем спиртовки до отхождения паров. Добавляя красителя подогреть 2-3 раза

6. После охлаждения препарата снять бумажку и промыть водой.

7. Препарат обесцветить 5% раствором серной кислоты, погружая 2-3 раза в раствор

8. Промыть водой

9. Окрасить водно-спиртовым раствором метиленового синего в течение 3-4 минут

10. Промыть водой, высушить

11. Микроскопия иммерсионная. Споры — красные, клетки — синие.

Окраска спор по методу Ожешко

2. Кислоту слить, препарат промыть водой, просушить и фиксировать над пламенем.

3. Окрасить по методу Циля—Нильсена.

Окраска спор по методу Шеффера—Фултона

1. На фиксированный мазок нанести 5 % раствор малахитового зеленого и 3—4 раза нагреть до появления паров.

2. Промыть водой.

3. Докрасить 0,5 % сафранином в течение 30 с.

4. Промыть водой, высушить и микроскопировать. Споры бактерий окрашиваются в зеленый цвет, вегетатив ные клетки — в красный.

Отключите adBlock! и обновите страницу (F5)очень нужно

Метод Бурри

Техника. Каплю исследуемой культуры смешивают на предметном стекле с каплей туши, затем с помощью другого стекла, поставленного к первому под углом в 45, делают тонкий мазок по принципу приготовления мазков из крови.

Мазок высушивают на воздухе и микроскопируют нефиксированным.

При использовании раствора конго рот после высушивания мазок обрабатывают 1% раствором соляной кислоты в абсолютном алкоголе, затем высушивают и микроскопируют.

Микроскопическая картина: на окрашенном фоне ясно видны неокрашенные светлые микробные клетки.

ОКРАСКА ФИКСИРОВАННЫХ ПРЕПАРАТОВ МИКРООРГАНИЗМОВ

В микробиологической работе наиболее употребительны способы окраски фиксированных микроскопических препаратов, которые в основном можно разделить на две группы: ориентировочные, или простые, и дифференциальные, выявляющие химические и структурные особенности того или иного вида микроорганизма.

Простые методы окраски микробов

Простые методы окраски препаратов предполагают использование одного анилинового красителя и позволяют изучить такие морфологические признаки микроорганизма, как форму, размеры, расположение в мазке. Для этих целей используется ряд красителей: метиленовый синий, фуксин и др.

Окраска разведенным карболовым фуксином

Техника. На зафиксированный мазок наносят фуксин Циля, разведенный непосредственно перед окраской, дистиллированной водой в соотношении 1:10. Выдерживают 1-2 минуты, после чего смывают водопроводной водой, высушивают и микроскопируют.

Микроскопическая картина. Все клетки равномерно окрашиваются в розово-красный цвет.Приготовление и окраска препаратов для люминесцентной микроскопии

Препараты для люминесцентной микроскопии готовят так же, как для световой.

Это относится и к их фиксации. Окраска препаратов отличается тем, что для люминесцентной микроскопии применяют специальные красители – флуорохромы. Их отличительная особенность – способность светиться под воздействием ультрафиолетовых и сине-фиолетовых лучей. Среди флуорохромов встречаются самые разнообразные органические вещества. Для окраски микроскопических препаратов применяют очень слабо концентрированные (1:500-1:100000) растворы флуорохромов.

Растворы готовят на дистиллированной воде, изотоническом растворе хлорида натрия или буферных смесях и хранят в темной склянке, избегая действия света.

Нарисуем невидимое, или Методы окраски микроорганизмов

Как все начиналось

В конце девятнадцатого века датский биолог Кристиан Грам предложил решение этой проблемы. Если что-то невидимо, его нужно покрасить и посмотреть, что получится. Метод окраски бактерий, предложенный Грамом, был настолько убедителен, что и по сей день микроорганизмы разделяют на грамположительные (удерживающие окраску) и грамотрицательные (обесцвечивающиеся после обработки спиртом).

Старый – не значит плохой

Пожалуй, самый практичный и широко применяемый способ окрашивания микроорганизмов – метод Грама. Мазок, зафиксированный огнем, покрывают метиловым фиолетовым красителем, фиксируют йодом, просушивают и промывают спиртом. На этом этапе, в зависимости от свойств клеточной мембраны, бактерии становятся:

ярко-синими (грамположительные);
бесцветными (грамотрицательные).

Витальные методы окраски

По состоянию исследуемых организмов в микробиологии существуют:

витальный способ, т. е. работа с живыми бактериями (опасен, требует строгого соблюдения техники безопасности);
поствитальный метод – работа с фиксированными (убитыми) клетками;
негативный, может быть витальным и поствитальным, удобен для работы с капсулами.

Работа с фиксированными препаратами

Белым по черному

Еще одна разновидность окраски бактерий основана на свойствах негатива, т. е. на темном фоне препарата четко видны бесцветные бактерии, иными словами, окрашивается среда, а не сам организм.

Иногда бактерии, попадая в определенные условия, образуют капсулы. Это слизистые образования, покрывающие клетку, чем-то похожие на гель. Капсулы прозрачны, их химический состав может сильно отличаться у разных видов бактерий, т.е. просто покрасить и оценить результат по получившемуся цвету не выйдет.

Окраска спорообразующих бактерий

Если говорить о клеточных оболочках, то нельзя не вспомнить о спорообразующих бактериях. Споры образуются при неблагоприятных для клетки условиях и могут существовать в агрессивной среде довольно длительное время. То, что хорошо для сохранения клетки, плохо для ее изучения. Споры очень плотные и почти не пропускают жидкости, кроме того, они кислотоустойчивы. Следовательно, простое окрашивание или метод Грама оставят споры бесцветными.

Как рассмотреть бактериальные жгутики

Еще одна непростая задача – окраска бактерий со жгутиками. Это спирально закрученные очень тонкие нити, которые микроорганизмы используют для перемещения. Жгутики необычайно тонкие, при окрашивании они легко отрываются от клетки. Поэтому перед началом окрашивания жгутики протравливают, искусственно увеличивая в объеме.

Для получения окрашенного препарата нельзя просто взять кисточку, краски и отловить бактерию. Существует определенная схема работы с микроорганизмами:

Несмотря на свое название, кислотоустойчивые бактерии предпочитают расти на нейтральных средах. Их устойчивость к перепадам кислотности внешней среды обусловлена особым строением клеточной стенки и составом клеточного содержимого.

Окраска таких бактерий карболовым фуксином в красный цвет является очень стойкой – в результате кислотоустойчивые микроорганизмы не обесцвечиваются после обработки их раствором серной кислоты.

Что же делать в такой ситуации ? Для начала советуем почитать эту статью. В данной статье подробно описываются методы борьбы с паразитами. Также рекомендуем обратиться к специалисту. Читать статью >>>

Кислотоустойчивые бактерии окрашиваются в красный цвет, некислотоустойчивые – в синий

Окрашивание

Интересно, что термин кислотоустойчивые бактерии применяется к микроорганизмам, не в плане их экологических особенностей, а в том смысле, что они окрашиваются по Цилю-Нильсену и не обесцвечиваются после окраски слабыми растворами кислот и этанолом. Эти методы позволяют успешно выявлять кислотоустойчивые формы в мазках. Однако обнаружены и такие особенности этих бактерий, как устойчивость к повышенному содержанию в среде кислот и щелочей.

Кислотоустойчивые формы бактерий считаются грамположительными, поскольку таксономия этих организмов основана на толщине их стенок, которую демонстрирует окраска по Граму.

Стандартные методы окрашивания (например, окраска по Граму) не дают удовлетворительных результатов. Кислотоустойчивые бактерии окрашиваются по Граму, только если применяются большие концентрации красителей или высокие температуры. Такие препараты кислотоустойчивых бактерий можно длительно хранить.

Для выявления кислотоустойчивых бактерий в мазке применяют следующие препараты:

Генциан фиолетовый, 1% феноловый или спиртовой раствор.
Раствор Люголя, содержащий кристаллический йод и йодид калия.
Этиловый спирт 96%.
Фуксин Пфейффера (фуксин Циля смешивается с дистиллированной водой в пропорции 1:9).

Окраска производится после фиксации стандартных препаратов на пламени. После этого на него накладывают фильтровальную бумагу, смоченную фуксином Циля, и нагревают стекло над пламенем 5 минут, не допуская закипания жидкости. Препарат не должен высыхать. После завершения фиксации его промывают большим количеством воды под малым напором.

После высыхания мазка его обрабатывают слабыми растворами серной или соляной кислоты и еще раз промывают водой. Заключительным этапом является окраска метиленовым синим (краситель Леффлера).

Окраска по Цилю-Нильсену является одним из методов выявления возбудителей туберкулеза и проказы. Таксономия относит их к числу грамположительных организмов.

Кислотоустойчивость и строение клетки

Наиболее часто бактерии, обладающие кислотоустойчивостью, микробиология описывает среди микобактерий и актиномицетов. Это связано с особенностью строения их клеточной стенки, содержащей миколовые кислоты, небольшое количество липидов, тейхоевых кислот, полисахаридов и полипептидов, а также воска. Используя методы выявления кислотоустойчивости, микробиологи узнали много нового о строении бактериальных спор и клеточной стенки.

Обнаружено сходство клеточных стенок кислотоустойчивых бактерий и бактериальных спор, обуславливающее их свойства.

Разновидности

Методы выявления кислотоустойчивости разрабатывались для патогенных микроорганизмов – возбудителей туберкулеза и проказы. Однако постепенно среди кислотоустойчивых бактерий обнаружились сапрофитные формы, обладающие аналогичными свойствами клеточной стенки. Они имеют ряд отличий (быстрый рост в культуре, более быстрое или, наоборот, медленное обесцвечивание этанолом), однако для их выявления применяются такие же методы.

Аналогичное строение клеточной стенки наблюдается у большинства актиномицетов. Эти малоизученные микроорганизмы всегда присутствуют в пристеночной микрофлоре человека и животных. В случае ослабления иммунной системы хозяина, они способны вызывать состояния, напоминающие туберкулез.

Эти организмы умеют перерабатывать сложные среды, содержащие парафин, воск, смолу или керосин, производить витамин В12, биотин, рибофлавин, пантотеновую кислоту.

Интерес к актиномицетам стал причиной того, что методы выявления бактерий с характерной клеточной стенкой начали применяться не только для изучения патогенных и сапрофитных бактерий человека и животных.

Так среди азотфиксирующих организмов были обнаружены бейеринкии (Beijerinckia), имеющие высокую устойчивость в средах с различной кислотностью. Выявлена неплохая кислотоустойчивость у некоторых азотфиксирующих клостридиумов (Clostridium). Исследования с применением изотопов позволили выявить азотфиксирующие формы среди актиномицетов (Actinomyces).

Способы окраски бактерий

Простой метод окраски

Препарат помещают на подставку для окраски, исследуемым материалом вверх. Пипеткой наносят на него раствор красителя. По истечении указанного времени краситель осторожно сливают, препарат промывают водой и высушивают фильтровальной бумагой. При простом методе используют один краситель. Метиленовым синим и щелочным синим Леффлера окрашивают препарат в течение 3-5 мин, фуксином Пфейффера — 1-2 мин.

На окрашенный и высушенный препарат наносят каплю иммерсионного масла и микроскопируют с помощью иммерсионной системы.

Сложные методы окраски

Окраска по Граму (универсальный метод). Наиболее распространенным методом дифференциальной окраски является окраска по Граму.

В зависимости от результатов окраски все микроорганизмы делят на две группы — грамположительные и грамотрицательные.

Грамположительные бактерии содержат в клеточной стенке магниевую соль РНК, которая образует комплексное соединение с йодом и основным красителем (генциановым, метиловым или кристаллическим фиолетовым). Этот комплекс не разрушается при действии спирта, и бактерии сохраняют фиолетовый цвет.

Грамотрицательные бактерии не способны удержать основной краситель, так как не содержат магниевой соли РНК. Под действием спирта краситель вымывается, клетки обесцвечиваются и окрашиваются дополнительным красителем (фуксином) в красный цвет.

На препарат накладывают бумажку по Синеву и наносят несколько капель воды или раствор генцианового фиолетового. Окрашивают 1-2 мин. Снимают бумагу или сливают краситель.
Не промывая водой, наносят раствор Люголя до почернения (1 мин), затем краситель сливают.
Не промывая водой, наносят 96% спирт до отхождения красителя (30-60 с). Можно опустить препарат в стаканчик со спиртом на 1-2 с.
Промывают препарат водой.
Докрашивают фуксином Пфейффера 3 мин, промывают водой и высушивают.

Микроскопируют с помощью иммерсионной системы.

Окраска по Цилю — Нильсену (для кислотоустойчивых бактерий). Этот метод применяют для выявления бактерий туберкулеза и проказы, имеющих в оболочке клеток большое количество липидов, воска и оксикислот. Бактерии кислото-, щелоче- и спиртоустойчивы. Для увеличения проницаемости клеточной стенки первый этап окрашивания проводят при подогревании.

Фиксированный препарат покрывают фильтровальной бумагой и наносят фуксин Циля. Удерживая стекло пинцетом, препарат подогревают над пламенем горелки до отхождения паров. Добавляют новую порцию красителя и подогревают еще 2 раза. После охлаждения снимают бумагу и промывают препарат водой.
Препарат обесцвечивают 5% раствором серной кислоты, погружая 2-3 раза в раствор или наливая кислоту на стекло, затем несколько раз промывают водой.
Окрашивают водно-спиртовым раствором метиленового синего в течение 3-5 мин, промывают водой и высушивают.

Микроскопируют с помощью иммерсионной системы.

Кислотоустойчивые бактерии окрашиваются в красный цвет, остальные — в синий.

Окраска по Ожешко (выявление спор).

На высушенный на воздухе мазок наливают несколько капель 0,5% раствора хлороводородной кислоты и подогревают до образования паров. Препарат высушивают и фиксируют над пламенем.
Окрашивают по способу Циля — Нильсена. Кислотоустойчивые споры окрашиваются в розово-красный, а бактериальная клетка — в голубой цвет.

Окраска по Бурри — Гинсу (выявление капсулы). Этот метод назван негативным, так как окрашивается фон препарата и бактериальная клетка, а капсула остается неокрашенной.

На предметное стекло наносят каплю черной туши, разведенной в 10 раз. В нее вносят каплю культуры. Ребром шлифовального стекла делают мазок, так же как мазок крови, и высушивают.
Фиксируют химическим способом спиртом или сулемой. Осторожно промывают водой.
Окрашивают фуксином Пфейффера 3-5 мин. Осторожно промывают и высушивают на воздухе.

Внимание! Фильтровальной бумагой не пользоваться, чтобы не повредить препарат.

Микроскопируют с помощью иммерсионной системы. Фон препарата черный, клетки — красные, капсулы — неокрашенные.

Прижизненная окраска микроорганизмов

Для изучения живой культуры используют чаще всего метиленовый синий и другие красители в больших разведениях (1:10000). Каплю исследуемого материала смешивают на предметном стекле с каплей красителя и накрывают покровным стеклом. Микроскопируют с помощью объектива 40×.

Изучение подвижности микроорганизмов

Для исследования используют культуру бактерий, выращенных в жидкой питательной среде, или взвесь бактерий в изотоническом растворе натрия хлорида.

Метод раздавленной капли. На предметное стекло наносят пипеткой каплю культуры и покрывают ее покровным стеклом. Чтобы не образовывалось пузырьков воздуха, покровное стекло подводят ребром к краю капли и резко опускают его. Для предохранения препарата от высыхания его помещают во влажную камеру.

Влажная камера представляет собой чашку Петри, на дне которой находится влажная фильтровальная бумага. На бумагу кладут две спички и на них помещают препарат. Чашку закрывают крышкой.

Микроскопируют при увеличении объектива 40х в темном поле).

Метод висячей капли. Для приготовления препарата необходимы стекло с лункой, покровное стекло и вазелин. Края лунки покрывают тонким слоем вазелина.

На покровное стекло наносят каплю культуры. Затем осторожно накрывают покровное стекло стеклом с лункой так, чтобы капля оказалась в центре. Склеившиеся стекла быстро переворачивают покровным стеклом вверх. Капля находится в герметической камере и сохраняется долгое время. При микроскопии сначала при малом увеличении (8×) находят край капли, а затем проводят изучение препарата при большом увеличении.

Победить паразитов можно!

Антипаразитарный комплекс® - Надежное и безопасное избавление от паразитов за 21 день!

В состав входят только природные компоненты;
Не вызывает побочных эффектов;
Абсолютно безопасен;
Защищает от паразитов печень, сердце, легкие, желудок, кожу;
Выводит из организма продукты жизнедеятельности паразитов.
Эффективно уничтожает большую часть видов гельминтов за 21 день.

Сейчас действует льготная программа на бесплатную упаковку. Читать мнение экспертов.

Морфологические свойства и строение бактериальной клетки

Микобактерии туберкулеза: форма, исследования, устойчивость, анализы

Аскариды: размеры, окраска, характер движений, форма яиц и личинок

Актиномицеты: морфология, особенности строения, среда обитания

Замкнутая кровеносная система аскариды или нет, описание и строение аскариды человеческой

Глисты и алкоголь: как спирт влияет на паразитов и как много его нужно, чтобы их убить

Список литературы

Centers for Disease Controland Prevention. Brucellosis. Parasites. Ссылка
Corbel M. J. Parasitic diseases // World Health Organization. Ссылка
Young E. J. Best matches for intestinal parasites // Clinical Infectious Diseases. — 1995. Vol. 21. — P. 283-290. Ссылка
Ющук Н.Д., Венгеров Ю. А. Инфекционные болезни: учебник. — 2-е издание. — М.: Медицина, 2003. — 544 с.
Распространенность паразитарных болезней среди населения, 2009 / Коколова Л. М., Решетников А. Д., Платонов Т. А., Верховцева Л. А.
Гельминты домашних плотоядных Воронежской области, 2011 / Никулин П. И., Ромашов Б. В.

Статья для пациентов с диагностированной доктором болезнью. Не заменяет приём врача и не может использоваться для самодиагностики.

Лучшие истории наших читателей

Тема: Во всех бедах виноваты паразиты!

От кого: Людмила С. ([email protected])

Не так давно мое состояние здоровья ухудшилось. Начала чувствовать постоянную усталость, появились головные боли, лень и какая-то бесконечная апатия. С ЖКТ тоже появились проблемы: вздутие, понос, боли и неприятный запах изо рта.

Думала, что это из-за тяжелой работы и надеялась, что само все пройдет. Но с каждым днем мне становилось все хуже. Врачи тоже ничего толком сказать не могли. Вроде как все в норме, но я-то чувствую, что мой организм не здоров.

Решила обратиться в частную клинику. Тут мне посоветовали на ряду с общими анализами, сдать анализ на паразитов. Так вот в одном из анализов у меня обнаружили паразитов. По словам врачей – это были глисты, которые есть у 90% людей и заражен практически каждый, в большей или меньшей степени.

Мне назначили курс противопаразитных лекарств. Но результатов мне это не дало. Через неделю мне подруга прислала ссылку на одну статью, где какой-то врач паразитолог делился реальными советами по борьбе с паразитами. Эта статья буквально спасла мою жизнь. Я выполнила все советы, что там были и через пару дней мне стало гораздо лучше!

Улучшилось пищеварение, прошли головные боли и появилась та жизненная энергия, которой мне так не хватало. Для надежности, я еще раз сдала анализы и никаких паразитов не обнаружили!

Кто хочет почистить свой организм от паразитов, причем неважно, какие виды этих тварей в вас живут - прочитайте эту статью, уверена на 100% вам поможет! Перейти к статье>>>

Читайте также: