Кольцевая проба геллера кратко
Обновлено: 04.07.2024
Протеинурия (наличие белка в моче) является патологией в любом возрасте, при любых условиях и состояниях организма. Другое дело, что некоторые виды протеинурии бесследно проходят, являясь лишь следствием супернагрузки (инфекции с гипертермиями, например) на организм, но без патологии в самих почках. Но и при патологии почек белок тоже не всегда будет в ОАМ (при успешном достижении ремиссии). Это знают все врачи и в зависимости от конкретного пациента принимают решение: наблюдать (вплоть до нормализации ОАМ) либо проводить дальнейшее обследование ренальной системы.
Видов протеинурии очень много: почечная (истинная), непочечная (ложная), ортостатическая (лордотическая), органическая (поражение паренхимы почки), функциональная (без поражения ткани почки, следствие ледяных обливаний и сверхчеловеческих нагрузок в спорте), физиологическая (у новорожденных), алиментарная (у любителей сырых яиц особенно). Ни в коем случае даже не пытайтесь разобраться, какой именно вид протеинурии у вас! Есть правило: при обнаружении белка в моче необходима консультация врача. Это настолько серьёзно, что можно сказать: белок в моче — это самый главный показатель в ОАМ. Поэтому не оставляйте без внимания такой пункт в результатах анализа, если не хотите вырастить пациента гемодиализных отделений в почтенном возрасте.
В частных лабораториях принято выражать показатель белка в моче в МГ/Л, в государственных — в Г/Л. То есть 64 мг/л = 0,064 г/л.
Если в общем анализе мочи у вас будет обнаружен белок, то необходимо проверить и в суточной моче. Определение белка в СУТОЧНОЙ моче — это усреднённая цифра, т.к. в разовой порции могли отразиться колебания белка в течение дня. Для определения количества белка, выделенного за сутки, полученную концентрацию белка (при условии, что он будет, но в норме он и в суточной н/о (не определяется) общепринятыми унифицированными методами) умножают на количество мочи (в литрах). Сдают суточную мочу так: собрать в чистую банку, начиная со второй порции с утра и заканчивая первой утренней (берите сразу 3-литровую банку), резервуар придётся хранить на холоде, затем измерьте общее количество собранной мочи (ОБЯЗАТЕЛЬНО ЗАПИШИТЕ, что получилось, и укажите это в бланке, поскольку количество белка лаборанту нужно ещё умножить на количество выделенной за сутки мочи). После этого нужно перемешать все и отлить 50 мл в чистый контейнер, который вы отнесёте в лабораторию.
Способов определения белка в моче несколько.
Самым современным методом определения белка является пирогаллоловый (красиво красится в разные цвета), он же считается наиболее чувствительным, но его результат в 3,3 раза больше показателей, получаемых привычными методами. И в интерпретации результатов в связи с этим часто бывает путаница, т.к. не может миллиграмм на одних весах весить одну гирьку, а на других — три гири. К тому же обязательно нужно использовать контрольные растворы не только альбумина, но и глобулина. Также на результат влияет приём многих препаратов. В общем, я считаю, что нужно было выводить другие единицы измерения, чтоб это считалось унифицированной методикой. А пока использование этого метода некорректно, поскольку на него не переведены ВСЕ лаборатории государства. Ведь можно сдать мочу на ещё более точный метод диагностики — микроальбуминурию, или МАУ.
Возможно, это неинтересно, но некоторые путают пробу Геллера (кольцевая) и метод Брандберга-Робертса-Стольникова (с таблицей Эрлиха). Проба Геллера — это качественный метод определения (да/нет, то бишь есть белок или нет), а уже использование разведений с кольцевой пробой — это полуколичественный метод (Брандберга-Робертса-Стольникова)
Определение белка в моче тест-полосками — о-о-очень приблизительно и ненадёжно.
Внешне протеинурия на человеке никак не проявляется, отёки совершенно не закономерность.
Но вот один из случаев. Недавно сдавал анализы мальчик, 7 лет. Анализ крови полностью вписывался в возрастную норму (соэ 4 мм/ч), однако анализ мочи просто повергал в шок. Микроскопия скудная, норма. Но его белок был 17 (. ) г/л — такое впечатление, что это не моча, а сыворотка. Я такого не видела ни разу до этого. А из клиники — вялость и отеки на лице, которые появились несколько дней назад.
На первом фото — в пробирке должно быть легкое помутнение разной степени интенсивности (это качественная проба на белок с сульфосалициловой кислотой). Здесь же — будто влит куриный белок.
· Изучить количественные методы определения белка в моче.
1. Записать алгоритмы определения белка в моче в дневник (Приложение 1)
2. Составить схемы по алгоритмам определения белка
3. Ответить на вопросы (Приложение 2)
Задание на дом
Подготовка по темам «лекция 1-8 и п/з № 1-4
- Составление вопросников с ответами по темам лекций 7,8
Преподаватель оценивает работу студентов, корректирует ошибки, отвечает на вопросы студентов
Преподаватель высшей категории _____________к.б.н Зейналиева Э.Н.
Алгоритм 1. Унифицированный метод Брандберга–Робертса–Стольникова
Принцип метода. В основу положена кольцевая проба Геллера, заключающаяся в том, что при добавлении к моче азотной кислоты на границе сред (кислота—моча) при наличии белка происходит его коагуляция, и появляется белое кольцо.
Реактивы: 30% раствор азотной кислоты (HNO3) (d = 1,2) или реактив Ларионовой: 20–30 г натрия хлорида (NaCl) растворяют при нагревании в 100 мл дистиллированной воды, остужают, фильтруют; к 99 мл фильтрата приливают 1 мл концентрированной HNO3.
Ход определения. В пробирку наливают 1–2 мл 30% раствора HNO3 или реактива Ларионовой и осторожно по стенке наслаивают столько же профильтрованной мочи.
Оценка результатов. Появление на границе двух жидкостей между 2-й и 3-й минутами тонкого белого кольца указывает на наличие белка в концентрации примерно 0,033 г/л. При появлении кольца раньше 2 мин после наслаивания мочу следует развести дистиллированной водой и провести повторное исследование с разведенной мочой. Степень разведения мочи подбирают в зависимости от вида кольца, его ширины, компактности и времени появления. При нитевидном кольце, появившемся ранее 2 мин, мочу разводят в 2 раза, при широком — в 4 раза, при компактном — в 8 раз и т. д. Концентрацию белка вычисляют, умножив степень разведения на 0,033 г/л.
Примечание.Белое кольцо может образовываться при наличии больших количеств уратов; в отличие от белкового, оно появляется немного выше границы двух жидкостей и растворяется при легком нагревании
Алгоритм 2. Определение количества белка в моче по реакции с сульфосалициловой кислотой фотометрическим методом
Принцип метода. Концентрация белка в моче пропорциональна помутнению, появляющемуся при его коагуляции сульфосалициловой кислотой.
Реактивы: 1) 3% раствор сульфосалициловой кислоты (C7H5O6S); 2) 0,9% раствор NaCl; 3) 1% стандартный раствор альбумина: 1 г лиофилизированного альбумина (из человеческой или бычьей сыворотки) растворяют в небольшом количестве 0,9% раствора NaCl в колбе емкостью 100 мл, а затем доводят до метки тем же растворителем. Реактив стабилизируют прибавлением 1 мл 5% раствора азида натрия (NaN3). При хранении в холодильнике реактив стабилен в течение 2 месяцев.
Ход определения. В пробирку вносят 1,25 мл профильтрованной мочи, добавляют 3,75 мл 3% раствора сульфосалициловой кислоты, перемешивают. Через 5 мин пробу фотометрируют на ФЭКе при длине волны 590–650 нм (оранжевый или красный светофильтр) против контроля в кювете с длиной оптического пути 5 нм. Контролем служит проба, в которой к 1,25 мл мочи добавлено 3,75 мл 0,9% раствора натрия хлорида. Концентрацию белка рассчитывают по калибровочному графику, для построения которого готовят разведения стандартного раствора альбумина (см. таблицу: Приготовление разведений для построения калибровочного графика).
Приготовление разведений для построения калибровочного графика
№ пробирки | Стандартный раствор, мл | 0,9% NaCl, мл | Концентрация белка, г/л |
1 | 0,05 | 9,95 | 0,05 |
2 | 0,1 | 9,9 | 0,1 |
3 | 0,2 | 9,8 | 0,2 |
4 | 0,5 | 9,5 | 0,5 |
5 | 1,0 | 9,0 | 1,0 |
Из каждого полученного разведенного раствора берут по 1,25 мл и обрабатывают, как опытные пробы.
Примечание. Прямолинейная зависимость величины экстинкции и концентрации белка сохраняется до 1 г/л. При более высоких концентрациях белка пробу следует разводить и учитывать разведение при расчете.
При наличии в моче веществ, содержащих йод, могут быть получены ложноположительные результаты. Поэтому тест нельзя использовать у больных, принимающих препараты йода или прошедших исследование с применением йодсодержащих рентгено-контрастных соединений. Ложноположительные реакции при проведении исследования могут быть вызваны приемом сульфаниламидных лекарственных средств, больших доз пенициллина и при высоких концентрациях в моче мочевой кислоты.
Алгоритм 3. Определение белка Биуретовым методом
Принцип метода. Пептидные связи белка с солями меди в щелочной среде образуют комплекс фиолетового цвета. Белки предварительно осаждают трихлоруксусной кислотой (ТХУ).
Реактивы. 1) 10% раствор ТХУ; 2) 20% раствор сульфата меди (CuSO4 × 5Н2O); 3) 3% раствор NaOH.
Ход определения. К 5 мл мочи прибавляют 3 мл 10% раствора ТХУ, центрифугируют до постоянного объема осадка. Надосадочную жидкость отсасывают пипеткой, а осадок растворяют в 1 мл 3% раствора NaOH и добавляют 0,25 мл 20% раствора CuSO4, смесь перемешивают и центрифугируют. Центрифугат фотометрируют при длине волны 540 нм (зеленый светофильтр) в кювете с длиной оптического пути 10 мм против дистиллированной воды. Концентрацию белка рассчитывают по калибровочному графику, который строят так же, как описано в предыдущем методе. На оси абсцисс откладывают оптическую плотность в единицах экстинкции, а на оси ординат — концентрацию белка в г/л. При анализе суточной мочи рассчитывают потерю белка за сутки.
Алгоритм 4. Определение белка с использованием индикатора пирогаллолового красного
Принцип метода основан на фотометрическом измерении оптической плотности раствора окрашенного комплекса, образующегося при взаимодействии молекул белка с молекулами комплекса красителя пирогаллоловый красный и молибдата натрия (Pyrogallol Red-Molybdate complex) в кислой среде. Интенсивность окраски раствора пропорциональна содержанию белка в исследуемом материале. Наличие детергентов в реактиве обеспечивает равнозначное определение белков разной природы и строения.
Реактивы. 1) 1,5 ммоль/л раствор пирогаллолового красного (ПГК): 60 мг ПГК растворяют в 100 мл метанола. Хранят при температуре 0–5 °С; 2) 50 ммоль/л сукцинатный буферный раствор pH 2,5: 5,9 г янтарной кислоты (НООС–СН2–СН2–СООН); 0,14 г оксалата натрия (Na2C2O4) и 0,5 г натрия бензоата (C6H5COONa) растворяют в 900 мл дистиллированной воды; 3) 10 ммоль/ л раствор кристаллогидрата молибдата натрия (Na2MoO4 × 2H2O): 240 мг молибдата натрия растворяют в 100 мл дистиллированной воды; 4) Рабочий реактив: к 900 мл сукцинатного буферного раствора добавляют 40 мл раствора ПГК и 4 мл раствора молибдата натрия. pH раствора устанавливают 2,5 с помощью 0,1 моль/л раствора соляной кислоты (НСl) и доводят его объем до 1 л. Реактив в таком виде готов к использованию и стабилен при хранении в защищенном от света месте и температуре 2–25 °С в течение 6 мес; 5) 0,5 г/л стандартный раствор альбумина.
Ход определения. В первую пробирку вносят 0,05 мл исследуемой мочи, во вторую пробирку — 0,05 мл стандартного раствора альбумина и в третью пробирку (контрольная проба) — 0,05 мл дистиллированной воды, затем в эти пробирки добавляют по 3 мл рабочего реактива. Содержимое пробирок перемешивают и через 10 минут фотометрируют пробу и стандарт против контрольной пробы при длине волны 596 нм в кювете с длиной оптического пути 10 мм.
Расчет концентрации белка в исследуемой пробе мочи осуществляют по формуле:
где С — концентрация белка в исследуемой пробе мочи, г/л; Апр и Аст— экстинкция исследуемой пробы мочи и стандартного раствора альбумина, г/л; 0,5 — концентрация стандартного раствора альбумина, г/л.
Примечания:
- окраска раствора (цветного комплекса) стабильна в течение одного часа;
- прямо пропорциональная зависимость между концентрацией белка в исследуемой пробе и поглощением раствора зависит от типа фотометра;
- при содержании белка в моче выше 3 г/л пробу разводят изотоническим раствором натрия хлорида (9 г/л) и повторяют определение. Степень разведения учитывают при определении концентрации белка.
Приложение 2
ЛД.25.04.20.ЗЕЙНАЛИЕВА Э.Н.Клиника.1-1Б. практика № 7. Определение белка в моче количественными методами
Государственное автономное образовательное учреждение
Среднего профессионального образования Республики Крым
План занятия (практическое) № 7
Тема занятия: Определение белка в моче количественными методами
Дисциплина: МДК 01.01Теория и практика лабораторных общеклинических исследований
Специальность: 31.02.03 Лабораторная диагностика
Цели занятия:
· Изучить количественные методы определения белка в моче.
1. Записать алгоритмы определения белка в моче в дневник (Приложение 1)
2. Составить схемы по алгоритмам определения белка
3. Ответить на вопросы (Приложение 2)
Задание на дом
Подготовка по темам «лекция 1-8 и п/з № 1-4
- Составление вопросников с ответами по темам лекций 7,8
Преподаватель оценивает работу студентов, корректирует ошибки, отвечает на вопросы студентов
Преподаватель высшей категории _____________к.б.н Зейналиева Э.Н.
Алгоритм 1. Унифицированный метод Брандберга–Робертса–Стольникова
Принцип метода. В основу положена кольцевая проба Геллера, заключающаяся в том, что при добавлении к моче азотной кислоты на границе сред (кислота—моча) при наличии белка происходит его коагуляция, и появляется белое кольцо.
Реактивы: 30% раствор азотной кислоты (HNO3) (d = 1,2) или реактив Ларионовой: 20–30 г натрия хлорида (NaCl) растворяют при нагревании в 100 мл дистиллированной воды, остужают, фильтруют; к 99 мл фильтрата приливают 1 мл концентрированной HNO3.
Ход определения. В пробирку наливают 1–2 мл 30% раствора HNO3 или реактива Ларионовой и осторожно по стенке наслаивают столько же профильтрованной мочи.
Оценка результатов. Появление на границе двух жидкостей между 2-й и 3-й минутами тонкого белого кольца указывает на наличие белка в концентрации примерно 0,033 г/л. При появлении кольца раньше 2 мин после наслаивания мочу следует развести дистиллированной водой и провести повторное исследование с разведенной мочой. Степень разведения мочи подбирают в зависимости от вида кольца, его ширины, компактности и времени появления. При нитевидном кольце, появившемся ранее 2 мин, мочу разводят в 2 раза, при широком — в 4 раза, при компактном — в 8 раз и т. д. Концентрацию белка вычисляют, умножив степень разведения на 0,033 г/л.
Примечание.Белое кольцо может образовываться при наличии больших количеств уратов; в отличие от белкового, оно появляется немного выше границы двух жидкостей и растворяется при легком нагревании
Алгоритм 2. Определение количества белка в моче по реакции с сульфосалициловой кислотой фотометрическим методом
Принцип метода. Концентрация белка в моче пропорциональна помутнению, появляющемуся при его коагуляции сульфосалициловой кислотой.
Реактивы: 1) 3% раствор сульфосалициловой кислоты (C7H5O6S); 2) 0,9% раствор NaCl; 3) 1% стандартный раствор альбумина: 1 г лиофилизированного альбумина (из человеческой или бычьей сыворотки) растворяют в небольшом количестве 0,9% раствора NaCl в колбе емкостью 100 мл, а затем доводят до метки тем же растворителем. Реактив стабилизируют прибавлением 1 мл 5% раствора азида натрия (NaN3). При хранении в холодильнике реактив стабилен в течение 2 месяцев.
Ход определения. В пробирку вносят 1,25 мл профильтрованной мочи, добавляют 3,75 мл 3% раствора сульфосалициловой кислоты, перемешивают. Через 5 мин пробу фотометрируют на ФЭКе при длине волны 590–650 нм (оранжевый или красный светофильтр) против контроля в кювете с длиной оптического пути 5 нм. Контролем служит проба, в которой к 1,25 мл мочи добавлено 3,75 мл 0,9% раствора натрия хлорида. Концентрацию белка рассчитывают по калибровочному графику, для построения которого готовят разведения стандартного раствора альбумина (см. таблицу: Приготовление разведений для построения калибровочного графика).
Приготовление разведений для построения калибровочного графика
№ пробирки | Стандартный раствор, мл | 0,9% NaCl, мл | Концентрация белка, г/л |
1 | 0,05 | 9,95 | 0,05 |
2 | 0,1 | 9,9 | 0,1 |
3 | 0,2 | 9,8 | 0,2 |
4 | 0,5 | 9,5 | 0,5 |
5 | 1,0 | 9,0 | 1,0 |
Из каждого полученного разведенного раствора берут по 1,25 мл и обрабатывают, как опытные пробы.
Примечание. Прямолинейная зависимость величины экстинкции и концентрации белка сохраняется до 1 г/л. При более высоких концентрациях белка пробу следует разводить и учитывать разведение при расчете.
При наличии в моче веществ, содержащих йод, могут быть получены ложноположительные результаты. Поэтому тест нельзя использовать у больных, принимающих препараты йода или прошедших исследование с применением йодсодержащих рентгено-контрастных соединений. Ложноположительные реакции при проведении исследования могут быть вызваны приемом сульфаниламидных лекарственных средств, больших доз пенициллина и при высоких концентрациях в моче мочевой кислоты.
Алгоритм 3. Определение белка Биуретовым методом
Принцип метода. Пептидные связи белка с солями меди в щелочной среде образуют комплекс фиолетового цвета. Белки предварительно осаждают трихлоруксусной кислотой (ТХУ).
Реактивы. 1) 10% раствор ТХУ; 2) 20% раствор сульфата меди (CuSO4 × 5Н2O); 3) 3% раствор NaOH.
Ход определения. К 5 мл мочи прибавляют 3 мл 10% раствора ТХУ, центрифугируют до постоянного объема осадка. Надосадочную жидкость отсасывают пипеткой, а осадок растворяют в 1 мл 3% раствора NaOH и добавляют 0,25 мл 20% раствора CuSO4, смесь перемешивают и центрифугируют. Центрифугат фотометрируют при длине волны 540 нм (зеленый светофильтр) в кювете с длиной оптического пути 10 мм против дистиллированной воды. Концентрацию белка рассчитывают по калибровочному графику, который строят так же, как описано в предыдущем методе. На оси абсцисс откладывают оптическую плотность в единицах экстинкции, а на оси ординат — концентрацию белка в г/л. При анализе суточной мочи рассчитывают потерю белка за сутки.
Алгоритм 4. Определение белка с использованием индикатора пирогаллолового красного
Принцип метода основан на фотометрическом измерении оптической плотности раствора окрашенного комплекса, образующегося при взаимодействии молекул белка с молекулами комплекса красителя пирогаллоловый красный и молибдата натрия (Pyrogallol Red-Molybdate complex) в кислой среде. Интенсивность окраски раствора пропорциональна содержанию белка в исследуемом материале. Наличие детергентов в реактиве обеспечивает равнозначное определение белков разной природы и строения.
Реактивы. 1) 1,5 ммоль/л раствор пирогаллолового красного (ПГК): 60 мг ПГК растворяют в 100 мл метанола. Хранят при температуре 0–5 °С; 2) 50 ммоль/л сукцинатный буферный раствор pH 2,5: 5,9 г янтарной кислоты (НООС–СН2–СН2–СООН); 0,14 г оксалата натрия (Na2C2O4) и 0,5 г натрия бензоата (C6H5COONa) растворяют в 900 мл дистиллированной воды; 3) 10 ммоль/ л раствор кристаллогидрата молибдата натрия (Na2MoO4 × 2H2O): 240 мг молибдата натрия растворяют в 100 мл дистиллированной воды; 4) Рабочий реактив: к 900 мл сукцинатного буферного раствора добавляют 40 мл раствора ПГК и 4 мл раствора молибдата натрия. pH раствора устанавливают 2,5 с помощью 0,1 моль/л раствора соляной кислоты (НСl) и доводят его объем до 1 л. Реактив в таком виде готов к использованию и стабилен при хранении в защищенном от света месте и температуре 2–25 °С в течение 6 мес; 5) 0,5 г/л стандартный раствор альбумина.
Ход определения. В первую пробирку вносят 0,05 мл исследуемой мочи, во вторую пробирку — 0,05 мл стандартного раствора альбумина и в третью пробирку (контрольная проба) — 0,05 мл дистиллированной воды, затем в эти пробирки добавляют по 3 мл рабочего реактива. Содержимое пробирок перемешивают и через 10 минут фотометрируют пробу и стандарт против контрольной пробы при длине волны 596 нм в кювете с длиной оптического пути 10 мм.
Расчет концентрации белка в исследуемой пробе мочи осуществляют по формуле:
где С — концентрация белка в исследуемой пробе мочи, г/л; Апр и Аст— экстинкция исследуемой пробы мочи и стандартного раствора альбумина, г/л; 0,5 — концентрация стандартного раствора альбумина, г/л.
Свидетельство и скидка на обучение каждому участнику
Зарегистрироваться 15–17 марта 2022 г.
Тема: Определение белка в моче.
Цель: Изучить исследование химических свойств мочи.
Изучить количественные и качественные методы определения белка в моче;
Изучить основные принципы работы с тест-полосками на автоматических анализаторах.
Тип занятия: практическое (6ч)
Планируемые результаты:
Студент должен знать:
Качественные пробы для определения белка.
Метод Робертса – Стольникова.
Определение белка 3 % ССК.
Биуретовый метод определения белка (ТХУ).
Диагностическое значение исследования показателей.
Студент должен уметь:
Подготовить рабочее место к исследованию мочи.
Приготовить реактивы, посуду и оборудование к исследованию.
Определять химические свойства мочи (белок в моче качественными и количественными методами).
Работать с бланочной продукцией (оформление бланков анализа).
Правильно интерпретировать полученные результаты исследования.
Средства достижения поставленной цели:
1. Работа с конспектами, учебной и специальной литературой.
2. Подготовка к практическим занятиям с использованием методических рекомендаций преподавателя, выполнение и оформление практических работ.
3. Работа с информационными средствами обучения на электронных и бумажных носителях.
Оборудование учебного кабинета и рабочих мест кабинета:
посадочные места по количеству обучающихся;
рабочее место преподавателя;
специализированная мебель и оборудование.
Технические средства обучения:
компьютеры для оснащения рабочего места преподавателя и обучающихся;
технические устройства для аудиовизуального отображения информации;
аудиовизуальные средства обучения (презентация, учебный видеосюжет).
Результатом освоения урока является:
Формирование практических профессиональных умений и первоначального практического опыта, в том числе профессиональными ( ПК ) и общими ( ОК ) компетенциями:
ПК 1.1 . Готовить рабочее место для проведения лабораторных общеклинических исследований.
ПК 1.2 . Проводить лабораторные общеклинические исследования биологических материалов.
ПК 1.3 . Регистрировать результаты проведенных исследований.
ПК 1.4. Проводить утилизацию отработанного материала, дезинфекцию и стерилизацию использованной лабораторной посуды, инструментария, средств защиты.
ОК 1. Понимать сущность и социальную значимость своей будущей профессии, проявлять к ней устойчивый интерес.
ОК 2 . Организовывать собственную деятельность, выбирать типовые методы и способы выполнения профессиональных задач, оценивать их эффективность и качество.
ОК 6. Работать в коллективе и команде, эффективно общаться с коллегами, руководством, пациентами.
ОК 9 . Ориентироваться в условиях смены технологий в профессиональной деятельности.
ОК 13. Организовывать рабочее место с соблюдением требований охраны труда, производственной санитарии, инфекционной и противопожарной безопасности.
I модуль. Теоретическая часть с элементами самостоятельной работы
Задание №1. Изучите и законспектируйте учебный материал в рабочие тетради.
Содержание белка в порциях мочи, собранной в разное время суток, может колебаться в значительных пределах.
П оявление белка в моче называется протеинурия.
В зависимости от суточной потери белка различают следующие степени протеинурии: умеренная - до 1 г; средняя - от 1 до 3 г; выраженная - более 3 г.
Существует два основных вида протеинурии:
Протеинурии, обусловленные заболеваниями мочевыводящих путей;
протеинурии, при поражениях (заболеваниях) почек.
Протеинурии, связанные с воспалительными процессами мочевыводящих путей, сопровождаются появлением в моче значительного количества лейкоцитов или эритроцитов, что, однако, не позволяет исключить одновременного попадания белка в мочу из почечной паренхимы; содержание белка редко превышает 1 г/л.
Почечная протеинурия в большинстве случаев связана с повышенной проницаемостью гломерул и делится на 2 группы :
К физиологической протеинурии относят случаи временного появления белка в моче, не связанные с заболеваниями:
после приема большого количества пищи, богатой не денатурированными белками (сырое мясо, сырые яйца);
при интенсивной мышечной работе (продолжительные походы, спортивные соревнования);
при приеме холодной ванны или душа;
при сильных эмоциональных переживаниях;
при эпилептических приступах.
Различают ортостатическую, или юношескую, протеинурию, встречающуюся у детей и подростков и проходящую с возрастом. В дифференциально - диагностическом отношении имеет практическое значение то, что ортостатическая альбуминурия обнаруживается нередко в период выздоровления после острого гломерулонефрита.
Патологическая почечная протеинурия может быть следствием органических заболеваний почек и других органов и систем: острые гломерулонефриты; хронические гломерулонефриты; острые пиелонефриты; хронические пиелонефриты; нефропатии беременных; различные заболевания, сопровождающиеся лихорадкой; выраженная хроническая сердечная недостаточность; а милоидоз почек; липоидный нефроз; туберкулез почки; геморрагические лихорадки; геморрагический васкулит; выраженная анемия; гипертоническая болезнь и др.
Задание №2. Перепишите и зарисуйте схемы лабораторных методов определения белка в моче.
Лабораторные методы определения белка в моче
Существуют качественные и количественные методы определения белка в моче, они основаны на коагуляции белка в объеме мочи или на границе сред (моча и кислота); при этом измерение степени коагуляции делает пробу количественной.
Качественные методы
проба с 20% сульфосалициловой кислотой (унифицированная);
кольцевая проба Геллера (в настоящее время не используется);
обнаружение белка с помощью индикаторной бумаги (полосок) и тест-полосок.
Количественные методы
унифицированный метод Брандберга-Робертса-Стольникова;
с 3% сульфосалициловой кислотой.
Качественные методы определения белка в моче
Задание №3. Определение белка в моче с помощью у нифицированной пробы с 20% сульфосалициловой кислотой
Принцип метода: основан на коагуляции белка в объеме мочи или на границе сред (моча и кислота)
Посуда, оборудование и реактивы:
20% сульфосалициловой кислоты (2-гидрокси-5-сульфобензойная кислота C 7 H 5 0 6 S ).
3мл профильтрованной мочи
2 шт. химические пробирки
Ход исследования:
В две пробирки вносят по 3 мл профильтрованной мочи, в одну из них (опытную) прибавляют 6—8 капель сульфосалициловой кислоты. На темном фоне сравнивают обе пробирки.
Интерпретация полученных результатов:
Помутнение в опытной пробирке свидетельствует о наличии в моче белка — проба положительна.
Примечание. Мочу со щелочной реакцией перед исследованием подкисляют добавлением нескольких капель 10% раствора уксусной кислоты
Задание №4. Определение белка с помощью кольцевой пробы Геллера
Принцип метода: В основу положена кольцевая проба, заключающаяся в том, что при добавлении к моче азотной кислоты на границе сред (кислота – моча) при наличии белка происходит его коагуляция и появляется белое кольцо.
Посуда, оборудование и реактивы:
- реактивы: 30% раствор азотной кислоты ( HNO 3) ( d = 1,2) или реактив Ларионовой : 20— 30 г хлорида натрия ( NaCl ) растворяют при нагревании в 100 мл дистиллированной воды, остужают, фильтруют; к 99 мл фильтрата приливают 1 мл концентрированной HNO 3.
Ход исследования:
В пробирку наливают 1 — 2 мл 30% раствора HNO 3 или реактива Ларионовой и осторожно по стенке наслаивают столько же профильтрованной мочи.
Интерпретация полученных результатов:
Появление на границе двух жидкостей между 2-й и 3-й мин тонкого белого кольца указывает на наличие белка в моче.
Зарисуйте схему определения белка
Количественное определение белка
Принцип метода: В основу положена кольцевая проба Геллера, заключающаяся в том, что при добавлении к моче азотной кислоты на границе сред (кислота — моча) при наличии белка происходит его коагуляция и появляется белое кольцо.
Посуда, оборудование и реактивы:
Биологическая жидкость (моча);
Ход исследования:
В пробирку наливают 1 - 2 мл 30% раствора HNO 3 или реактива Ларионовой и осторожно по стенке наслаивают столько же профильтрованной мочи.
Интерпретация полученных результатов:
Появление на границе двух жидкостей между 2-й и 3-й мин
тонкого белого кольца указывает на наличие белка в концентрации примерно 0,033 г/л. При появлении кольца раньше 2-х мин после наслаивания мочу следует развести дистиллированной водой и провести повторное исследование с разведенной мочой. Степень разведения мочи подбирают в зависимости от вида кольца, его ширины, компактности и времени появления.
При нитевидном кольце, появившемся ранее 2 мин, мочу разводят в 2 раза, при широком — в 4 раза, при компактном — в 8 раз и т.д. Концентрацию белка вычисляют, умножив степень разведения на 0,033 г/л.
Белое кольцо может образовываться при наличии большого количества уратов; в отличие от белкового оно появляется немного выше границы двух жидкостей и растворяется при легком нагревании.
Задание №6. Определение количества белка в моче с 3 % сульфосалициловой кислотой
Принцип метода: Концентрация белка в моче пропорциональна помутнению, появляющемуся при его коагуляции сульфосалициловой кислотой
Посуда, оборудование и реактивы:
3% раствор сульфосалициловой кислоты ( C 7 H 5 O 6 S ); j
0,9% раствор хлорида натрия;
1% стандартный раствор альбумина - 1 г лиофилизированного альбумина (из человеческой или бычьей сыворотки) растворяют в небольшом количестве 0,9% раствора NaCl в колбе емкостью 100 мл, а затем доводят до метки тем же растворителем. Реактив стабилизируют прибавлением 1 мл 5% раствора азида натрия ( NaN 3). При хранении в холодильнике реактив стабилен в течение 2 месяцев.
Ход исследования:
В пробирку вносят 1,25 мл профильтрованной мочи, добавляют 3,75 мл 3% раствора сульфосалициловой кислоты, перемешивают. Через 5 мин пробу фотометрируют на ФЭКе при длине волны 590—650 нм (оранжевый или красный светофильтр) против контроля в кювете с длиной оптического пути 5 мм. Контролем служит проба, в которой к 1,25 мл мочи добавлено 3,75 мл 0,9% раствора хлорид е натрия. Концентрацию белка рассчитывают по калибровочному графику, для построение которого готовят разведения стандартного раствора альбумина (см. таблицу) . Из каждого полученного разведенного раствора берут по 1,25 мл и обрабатывают, как опытные пробы.
Приготовление разведений для построения калибровочного графика
Стандартный раствор, мл
0,9% раствор хлорида натрия, мл
Концентрация белка, г/л
Прямолинейная зависимость величины экстинкции и концентрации белка сохраняется до 1 г/л. При более высоких концентрациях белка пробу следует разводить и учитывать разведение при расчете.
При наличии в моче веществ, содержащих йод, могут быть получены ложноположительные результаты. Поэтому тест нельзя использовать у больных, принимающих препараты йода или прошедших исследование с применением йодсодержащих рентгеноконтрастных соединений. Ложноположительные J реакции при проведении исследования могут быть вызваны приемом сульфаниламидных лекарственных средств, больших доз пенициллина и при высоких концентрациях в моче мочевой кислоты.
Зарисуйте схему определения белка
Задание №7. Обнаружение в моче белка Бенс-Джонса
Принцип метода: основан на реакции термопреципитации
Посуда, оборудование и реактивы:
Реактив: 2М ацетатный буфер рН 4,9.
Ход исследования:
4 мл профильтрованной мочи смешивают с 1 мл буферного раствора и нагревают 15 мин на водяной бане при температуре 56°С.
Интерпретация полученных результатов:
При наличии в моче белка Бенс-Джонса уже в первые 2 мин появляется выраженный осадок.
При концентрации белка менее 3 г/л проба может быть отрицательна, что встречается довольно редко, так как обычно концентрация белка Бенс-Джонса в моче весьма значительна.
Наиболее достоверно выявление белка Бенс-Джонса осаждением при температуре 40—60°С. Однако в слишком кислой (рН менее 3,0) или слишком щелочной (рН более 6,5) моче, при низкой относительной плотности мочи и низкой концентрации бежа Бенс-Джонса (менее 3 г/л) осаждение может не происходить.
Зарисуйте схему определения белка
II модуль. Самостоятельная работа с исследовательским этапом
Методические установки:
- Получите образцы биологической жидкости (мочи) у преподавателя, пронумеруйте образцы;
- Проведите исследование мочи с помощью диагностических тест-полосок;
- Оцените полученный результат (норма, патология). Предположите причину возникновения белка в моче.
- Результат запишите в бланки анализа, сдайте их преподавателю.
Приложение №1
Принцип. Белок изменяет цвет индикатора, нанесенного на полоску. Индикаторы упакованы в комплекте по 100 полосок, которые хранятся в плотно закрытом пенале, прохладном и сухом месте.
Правила работы с диагностическими тест-полосками
При работе с диагностическими тест-полосками необходимо соблюдать следущие правила:
- держать диагностические тест-полоски в плотно закрытых упаковках-пеналах;
- хранить пеналы в темном, сухом, прохладном месте при температуре, не превышающей 30ºС, но не в холодильнике;
- не подвергать полоски действию влаги и прямого солнечного света, высокой температуры и летучих химических веществ;
- доставать только строго необходимое количество полосок, после чего немедленно закрывать пенал;
- не дотрагиваться пальцами до диагностических зон.
Правила проведения теста
1. Для исследования используйте утреннюю мочу, собранную в одноразовый пластиковый контейнер для мочи (или чистую сухую посуду). Перемешайте доставленную мочу, но не центрифугируйте.
В нимание!
При использовании нестандартной приспособленной тары остатки моющих средств в посуде для сбора мочи являются причиной ложных результатов.
2. Из пенала возьмите тест-полоску.
3. Сразу же закройте пенал фабричной крышкой, полоску охраняйте от влаги.
4. Индикаторные бумажные зоны полоски опустите на 2-3 секунды в исследуемую мочу и сразу же выньте.
5. Для удаления избытка влаги с диагностических зон полоски проведите ее длинным краем по краю контейнера (или иной емкости, в которой доставлена моча) или приложите этот край полоски к фильтровальной бумаге.
Смывать с диагностических зон полоски лишнюю мочу нельзя.
6. По истечении времени, указанного на этикетке пенала или в инструкции к каждому тесту, сравните цвет соответствующей диагностической зоны с цветной шкалой на этикетке пенала с полосками (эталоном). Порядок проведения теста представлен рисунками 1-7.
7. Реакцию оценивают как положительную или отрицательную. Или выражают в цифровом обозначении в г/л. (см. рисунок №8).
Рис. №8 Оценка результатов исследования
III Модуль. Контрольные вопросы и задания
Ответьте на поставленные вопросы, используя рабочую тетрадь
Расскажите метод определения белка в моче 50% азотной кислотой.
Расскажите метод определения белка в моче 20 % ССК.
Расскажите методику определения белка в моче методом Робетса – Стольникова – Бранберга.
Расскажите методику определения белка в моче диагностическими тест- полосками.
Какие существуют правила работы с диагностическими тест-полосками.
Назовите основные критерии правильно проведенного теста.
Расскажите методику обнаружения в моче белка Бенс-Джонса.
Диагностическое значение определения химических свойств мочи.
Клиническая оценка химических свойств мочи.
Запишите в рабочей тетради термины и дайте им обозначение , используя изученный материал
Знать теоретический и практический материал.
Отвечать на контрольные вопросы.
Литература для самостоятельной подготовки: И.И.Миронова, Л.А.Романова, В.В.Долгов. Общеклинические исследования: моча, кал, ликвор, эякулят.- М.-Тверь: ООО "Издательство "Триада", 2005
Кольцевая проба Геллера относится к качественным реакциям определения белка в моче. Так как она основана на реакции коагуляции, то исследуемая моча должна соответствовать определенным требованиям: быть прозрачной и иметь кислую реакцию.
Реактивы: концентрированная (или 50%-я) азотная кислота или реактив Ларионовой. Приготовление реактива Ларионовой: готовят насыщенный раствор хлорида натрия (20 - 30 г соли растворяют в 100 мл воды при подогревании, дают отстояться до охлаждения). Надосадочную жидкость сливают, фильтруют. К 99 мл фильтрата добавляют 1 мл концентрированной азотной кислоты. Вместо азотной кислоты можно добавить 2 мл концентрированной соляной кислоты.
Ход определения: В пробирку наливают 1 - 1,5 мл азотной кислоты или реактива Ларионовой и пипеткой осторожно по стенке пробирки наслаивают такое же количество мочи, стараясь не взбалтывать жидкость в пробирке. При наличии белка на границе двух жидкостей появляется белое кольцо. Реакцию оценивают на черном фоне и учитывают время появления нитевидного кольца. Чувствительность пробы 0,033 г/л. При таком содержании белка на границе жидкостей появляется белое нитевидное кольцо между 2-й и 3-й минутами.
Недостатки пробы:
постановка пробы является достаточно трудоемкой и длительной процедурой, требующей концентрированной азотной кислоты;
Читайте также: