Получение сыворотки из крови для проведения иммунологических исследований кратко

Обновлено: 04.07.2024

Сывороточные иммунные препараты. Иммунные сыворотки. Гетерологичные сыворотки. Гомологичные сыворотки. Иммунные иммуноглобулины.

К сывороточным иммунным препаратам относят иммунные сыворотки и Ig. Эти препараты обеспечивают пассивную невосприимчивость к возбудителям инфекционных болезней. Действующее начало таких препаратов — специфические AT. Другими словами, в организм человека вводят готовые эффекторные молекулы. Поэтому их можно использовать для профилактики и лечения инфекций. Содержание AT в сывороточных иммунных препаратах (активность) выражают в титрах AT. По механизму действия AT сывороточных препаратов проявляют агглютинирующий, преципитирующий, комплементсвязывающий, нейтрализующий и другие эффекты. Обычно сывороточные препараты вводят парентерально; при этом состояние невосприимчивости развивается быстро, но длится недолго (в пределах 2-6 нед).

Иммунные сыворотки. Гетерологичные сыворотки. Гомологичные сыворотки

Иммунные сыворотки получают из крови искусственно иммунизированных животных и людей-доноров (в этих целях используют периферическую, плацентарную и абортную кровь). Для получения высоких титров AT лошадей и кроликов иммунизируют дробным введением соответствующих Аг в больших дозах. Препараты, изготовляемые из крови животных, содержат гетерологичные AT, поэтому человеку такие гетерологичные (чужеродные) сыворотки вводят при соблюдении мер предосторожности. Например, столбнячную антисыворотку (получаемую из крови иммунизированных лошадей) вводят после постановки кожных проб на чувствительность, дробно по Безрёдке на фоне приёма десенсибилизирующих средств.

Препараты, изготовляемые из крови иммунизированных доноров, содержат гомологичные AT; гомологичные сыворотки лишены многих побочных эффектов гетерологичных сывороток. Гомологичные сыворотки применяют для профилактики и лечения вирусных гепатитов, кори, столбняка, ботулизма и др. После введения гетерологичных сывороток состояние невосприимчивости длится 2-3 нед, эффект гомологичных AT сохраняется 4-6 нед.

Иммуноглобулины

Иммуноглобулины получают осаждением из сыворотки крови, что освобождает их от балластных компонентов. Затем препараты очищают и концентрируют. Ig применяют для лечения и профилактики кори, клещевого энцефалита, стафилококковых инфекций, столбняка и других инфекций.

- Вернуться в оглавление раздела "Микробиология."

Информация на сайте подлежит консультации лечащим врачом и не заменяет очной консультации с ним.
См. подробнее в пользовательском соглашении.

Получение дефибринированной крови. Кровь животного сливают в стерильную колбу со стеклянными бусами и непрерывно в течение 10–15 мин встряхивают. В результате встряхивания находящийся в крови фибрин выпадает в осадок, обволакивая бусы, а дефибринированная кровь, слитая в другую колбу или пробирку, утрачивает способность свертываться.

Приготовление взвеси эритроцитов. Для освобождения от пленок фибрина дефибринированную кровь фильтруют через трехслойный марлевый фильтр. Фильтрат наливают в центрифужные пробирки и центрифугируют при 2000–3000 об./мин в течение 10–15 мин. Эритроциты оседают на дно пробирки, а прозрачная, слегка желтоватого цвета плазма образует над-осадочный слой. После центрифугирования уровень жидкости в пробирке отмечают карандашом, отделяют плазму пастеровской пипеткой, эритроциты промывают, доливая до метки стерильный изотонический раствор хлорида натрия, и вновь центрифугируют. Промывание эритроцитов с добавлением свежего раствора производят 2–3 раза, чтобы последняя порция промывной жидкости была бесцветна.

Из промытых эритроцитов готовят 3 или 5 % взвесь, прибавляя к 3–5 мл эритроцитов соответственно 97–95 мл изотонического раствора хлорида натрия (для получения меньших количеств взвеси объемы обоих ингредиентов уменьшают в одинаковое число раз).

Взвесь эритроцитов можно хранить в холодильнике при температуре 3–4 °С в течение 5–6 дней.

Приготовление сыворотки крови. Кровь, собранную в стерильную пробирку, закрывают ватно-марлевой пробкой, ставят на 20–30 мин в термостат или водяную баню, отрегулированную на 37 °С, так как в тепле кровь свертывается быстрее и лучше. При свертывании сгусток крови обычно прилипает к стенкам пробирки. Поэтому после выдерживания в термостате сгусток отделяют от стенок пробирки круговым движением капилляра стерильной пастеровской пипетки или стеклянной стерильной палочкой.

После отделения сгустка сыворотку ставят в холодильник при температуре 3–4 °С. В течение 3–4 ч сыворотка обычно отделяется полностью, и ее можно собрать стерильной пастеровской пипеткой. Чтобы содержимое пробирки было хорошо видно, пастеровскую пипетку соединяют со стеклянной трубкой – "мундштуком" (резиновая трубка длиной 20–25 см). Это позволяет избежать соприкосновения кончика пипетки со сгустком крови и попадания в сыворотку эритроцитов.

Окрашенную в розовый цвет сыворотку центрифугируют при 2000–3000 об./мин в течение 10–15 мин для осаждения форменных элементов крови.

При взятии крови вскоре после кормления животных, а также при повторных кровопусканиях с короткими интервалами иногда возникает липемия, т.е. появление избытка жировых веществ в крови. Сыворотки, получаемые во время липемии, бывают мутные (хилезные), иногда опалесцирующие, и это очень затрудняет чтение диагностических реакций, особенно реакции преципитации. Во избежание получения мутных сывороток кровь у животных берут натощак. Просветление липе-мической плазмы наступает также при введении в кровеносное русло животного гепарина, способствующего повышению концентрации в крови фермента, называемого фактором просветления. С этой целью кроликам весом 2–2,5 кг в краевую вену уха вводят за 1–1,5 ч до обескровливания 60 мг гепарина.

Сыворотку крови можно получить методом центрифугирования. В слитой с осадка сыворотке через короткое время после центрифугирования образуется сгусток фибрина, который уплотняется при перемешивании крови стеклянной палочкой. Затем этот сгусток удаляют. В некоторых случаях фибрин из сыворотки выпадает не полностью. Для удаления остатков фибрина и выявления полноты его удаления к сыворотке прибавляют несколько капель тромбина. Освобожденную от фибрина сыворотку фильтруют через асбестовые фильтры. Полученная таким способом сыворотка совершенно прозрачна и не имеет признаков опалесценции.

Приготовление цитратной крови. Полученную из сердца или вены кровь сливают в пробирку с 5 % раствором цитрата натрия (10 мл крови, 1 мл цитрата натрия). Цитратная кровь не свертывается.

Приготовление плазмы крови. Цитратную кровь ставят на 18–20 ч в холодильник или центрифугируют. В результате над осадком эритроцитов образуется прозрачный слой жидкости желтоватого цвета – плазмы.

Иммунологические методы исследования — это современные диагностические технологии, основанные на взаимодействии антигенов и антител. Этот вид анализа очень точен и информативен.

Используются для выявления иммунодефицитных состояний организма, аутоиммунных заболеваний и аллергий, различных инфекций и паразитарных инвазий, опухолевых антигенов, нарушений гормонального фона. Также применяются как экспресс-метод точного определения группы крови и для определения беременности.

Что такое антитела

Важную роль в защите человека от агрессии внешней среды выполняет иммунитет.

Когда в организм попадает антиген – чужеродный агент, в крови начинают вырабатываться антитела.

На некоторые перенесенные инфекции существует иммунная память – в крови остаются антитела к определенному антигену.

Наличие или отсутствие определенного класса иммуноглобулинов может многое рассказать о состоянии организма человека.

Всего существует пять классов иммуноглобулинов: G, А, М, D. В зависимости от их количества и сочетания можно судить о состоянии здоровья человека и характере заболевания.

Когда назначается иммунологический анализ крови

Иммунологическое исследование крови позволяет получить четкую картину состояния иммунной системы организма, наличие иммунодефицита, как врожденного, так и приобретенного, выявить наличие и характер хронических заболеваний.

Иногда возникают сбои работы иммунитета и организм атакует сам себя (аутоиммунные заболевания). Их также легко обнаружить, используя иммунологическое серологическое исследование.

Данный вид исследования назначают в следующих случаях если:

инфекционное заболевание носит длительный и трудно поддающийся лечению характер;
есть подозрение на врожденный иммунодефицит;
возможна вероятность приобретенного иммунодефицита, в том числе вызванный ВИЧ;
вероятны аутоиммунные заболевания;
наблюдаются аллергические реакции;
возникает подозрение на онкологические процессы;
планируется сложное хирургическое вмешательство;
требуется определить причины мужского или женского бесплодия;
необходимо контролировать результат применения гормональных препаратов или иммунодепрессантов;

При помощи иммунологического лабораторного исследования можно диагностировать следующие заболевания:

иммунодефицитные состояния как врожденные, так и приобретенные, в том числе СПИД;
аутоиммунные заболевания: ревматоидный артрит, системная красная волчанка;
заболевания органов ЖКТ;
половые инфекции;
злокачественные новообразования;
заболевания щитовидной железы нарушение её функции;
аллергии с выявлением аллергенов;
токсоплазмоз;
гепатит В и С;
герпес;
резус конфликт матери и плода;
кандидоз;
цитомегаловирусная инфекция;
гломерулонефрит;
миокардит;
остеомиелит.

Это далеко не полный перечень диагнозов, для окончательной диагностики обязательно используется иммунограмма, как дополнительный метод.

Общее описание

Исследование иммунной системы включает в себя определение клеточного состава крови и определение наличия антигенов и антител в сыворотке крови.

На 1-м этапе рассматривается клеточный состав крови:

общее число лимфоцитов;
соотношение Т-лимфоцитов и В-лимфоцитов;
фагоцитарная активность нейтрофилов;
апоптоз лимфоцитов;
продуктивность В-лимфоцитов по общему количеству иммуноглобулинов.

Это исследование позволяет определить общее состояние и напряженность иммунитета.

На 2-м этапе исследуется гуморальная активность иммунных клеток:

определяется концентрация цитокининов;
измеряется количество и соотношение видов иммуноглобулинов;

При диагностике конкретных заболеваний определяется наличие антигена или антител к нему в сыворотке крови.

Нормы

Рассмотрим основные параметры иммунологического исследования.

Иммуноглобулин А (IgA) участвует в защитной реакции слизистых оболочек органов человека. Превышение нормы по этому параметру может свидетельствовать:

о артрите;
гломерулонефрите;
миеломной болезни;
воспалительных процессах в печени.

Недостаток иммуноглобулина А наблюдается:

при циррозе печени;
токсических состояниях;
лучевой болезни

Иммуноглобулин М (IgM) выделяется как экстренный ответ на проникновение антигена.

Его количество резко увеличивается:

при вирусных или бактериальных инфекциях;
паразитарных инвазиях;
аутоиммунных процессах;

Снижение показателя бывает:

при остром или накопительном отравлении;
лучевой болезни;
приеме иммунодепрессантов.

Иммуноглобулин G (IgG) обеспечивает пассивную защиту.

Превышение показателя выше нормы выявляется:

при ревматоидном артрите;
системной красной волчанке;
СПИД;
миеломной болезни;
хронических инфекционных заболеваниях.

Показатель резко снижается:

при отравлениях;
терапии иммунодепрессантами;
лучевой болезни;
циррозе печени.

Для выявления аллергических заболеваний важно знать уровень иммуноглобулина Е (IgE). Резкое увеличение значения возникает:

при поллинозе;
крапивнице;
пищевой аллергии;
наличии паразитов;
аллергии на лекарственные препараты.

Снижение уровня свидетельствует:

о приобретенном вирусном и невирусном иммунодефиците;
врожденном иммунодефиците;
приеме иммунодепрессантов.

Сама по себе иммунограмма не является медицинским заключением и для ее расшифровки требуется опытный иммунолог.

Подготовка к исследованию

Иммунологические исследования относятся к серологическим (исследованиям сыворотки крови). Для этого анализа используется венозная кровь, взятая натощак утром. Чтобы результаты были максимально достоверными следует соблюдать определенные правила:

За 12 часов до взятия крови прекратить прием пищи. Пить можно только чистую воду.
За трое суток до анализа исключить алкогольные напитки.
Не курить минимум час до взятия крови.
Исключить солярий, рентгенологические исследования за двое суток;
По возможности избегать стрессов за сутки до диагностики;
Исключить нездоровую пищу (жареное, копченое, соленое, жирное) из рациона за двое суток до взятия крови.
Если нет жизненных показаний, исключить любые препараты, особенно гормональные. Если нет возможно отменить препараты, об их приеме обязательно предупредите врача.
Женщинам не стоит назначать анализ на время менструации.

Важно! Несоблюдение этих простых правил может исказить результаты диагностики.

Е.Б. Лукоянычева–заведующая иммунологической лабораторией ГУЗ КОКБ.

Правила забора биологического материала для иммунологических исследований: Методические рекомендации / Авт.-составитель О.М.Луппова.- Кемерово: ГУЗ КОКБ ,2008.-25 стр.

Введение 4
Раздел 1. Общие правила забора биологического материала и оформления сопроводительных документов
Раздел 2.Технология забора крови из периферической вены для лабораторного исследования
Раздел 3.Правила взятия венозной крови с помощью закрытой системы (вакуумного шприца-контейнера)
Раздел 4.
Транспортировка образцов крови
Раздел 5.
Требование к маркировке пробирок
Раздел 6
Образец оформления пробирок и заполнения сопроводительных документов
Приложение № 1
Забор крови на иммунограмму
Приложение №2.
Забор крови на циркулирующий иммунный комплекс
Приложение №.3
Забор крови на криоглобулины
Приложение №.4
Забор крови на группу крови и резус принадлежность
Приложение №5.
Забор крови на реакцию Кумбса
Приложение №6
Забор крови на гемоконтактные гепатиты В и С (HBsAg, анти – HCV)
Приложение №7.
Забор крови на развернутый комплекс маркеров гепатитов
Приложение №8.
Забор крови на клещевой энцефалит, боррелиоз
Приложение №9.
Забор крови на антитела к антигенам описторхисов, лямблий, хеликобактеру
Приложение №10.
Забор крови на цитомегаловирус, токсоплазмоз, герпес
Приложение №.11
Забор крови на а/т к тироидной пероксидазе
Приложение №12
Забор крови на ВИЧ 23
Приложение № 4(образец заполнения)
Список литературы

Данное методическое пособие предназначено для медицинских сестер Кемеровской областной клинической больницы.

Методическое пособие поможет правильно произвести забор биологического материала и оформить сопроводительные документы.

Правильно произведенный забор биологического материала и правильно оформленные направления исключат ошибку на преаналитическом этапе исследования.

Формы сопроводительных документов составлены так, чтобы сократить время медицинской сестры, затрачиваемое на оформление направлений.

Необходимо, чтобы образцы крови были правильно взяты и вовремя доставлены в лабораторию. Нарушения, допущенные на преаналитическом этапе, могут повлиять на результат исследования и его дальнейшую интерпретацию.

Раздел 1.
Общие правила забора биологического материала и оформления сопроводительных документов

Перед забором крови пациенту следует сообщить:

1. На какой вид исследования будет проводиться забор крови.

2. Требования необходимые для данного исследования.

Порядок забора венозной крови

1. Исследование проводится утром натощак, последний прием пищи за 12 часов до взятия крови.

2. Исключение приема алкоголя не менее чем за 24 часа до взятия крови.

3. Утренний прием лекарственных препаратов, лечебно-диагностических процедур (массаж, ЭКГ, физиотерапевческое лечение и др.) проводится после взятия крови.

5. Пациент перед процедурой должен находиться в покое, сидеть или лежать не менее 5 минут.

6. Продолжительность пережатия сосудов жгутом должна составлять не более 1 минуты.

7. Нельзя просить работать пациента кулаком и массировать предплечье по ходу вен.

Раздел 2
Технология забора крови из периферической вены для лабораторного исследования

подготовить на манипуляционном столе стандартный набор для забора крови из периферической вены, проверив целостность упаковок и сроки годности:

1. лоток для использованных материалов;

2. пробирки для крови;

3. упаковка с 2-мя стерильными салфетками (5х5см) или 4-5 шариками;

5. кожный спиртовой антисептик во флаконе с дозатором;

сделать необходимые надписи на пробирках;

оформить сопроводительные документы в лабораторию;

обеспечить удобное освещение;

помочь пациенту найти удобное положение;

разъяснить пациенту суть предстоящей процедуры, создавая атмосферу доверия, предоставляя возможность задать вопросы;

обработать руки спиртовым антисептиком;

вскрыть упаковки со стерильными материалами;

руку больного уложить в положении максимального разгибания, для чего под руку следует положить валик, имеющий влагостойкое покрытие.

наложить жгут на 10 - 15 см выше выбранной зоны, не нарушая ток крови;

выбрать вену для венепункции;

обработать место венепункции кожным антисептиком и дать высохнуть самостоятельно;

Не пальпируйте вену повторно!

надеть на стерильный шприц иглу;

снять с иглы защитный колпачок;

пальцами левой руки фиксировать кожу над веной;

ввести под кожу иглу срезом вверх под углом 30-40 0 ;

установить иглу параллельно вене и быстрым движением проколоть ее стенку;

иглу продвинуть немного вверх по длине вены;

набрать необходимое количество крови в шприц

- запрещается забор крови свободным кровотоком из иглы в пробирку, а также присоединение к игле нового шприца;

- для безопасного забора крови предпочтительно использовать вакуумный шприц-контейнер.

иглу извлечь из вены;

прижать место венепункции стерильной салфеткой на 2-3 минуты;

осторожно, предупреждая разбрызгивание крови, вылить содержимое шприца через иглу в одну или несколько пробирок.

Раздел 3
Правила взятия венозной крови с помощью закрытой системы (вакуумного шприца-контейнера)

Закрытые системы взятия венозной крови представляют собой новое поколение вакуумных шприцев - контейнеров с реактивами. Их использование имеет следующие преимущества перед традиционными способами:

полностью исключается контакт медперсонала с кровью на всех этапах взятия крови и ее транспортировки;

особо прочный пластик закрытых систем позволяет осуществить безопасную доставку крови на любые расстояния;

благодаря наличию широкого спектра пробирок с заранее добавленными реагентами для различных видов анализов (ЭДТА для гематологии, цитрат натрия для коагулогии, активатор свертывания для получения сыворотки), значительно облегчается работа медсестер и лаборатории. Международная цветовая маркировка предотвращает их не правильное применение;

уменьшается количество ошибочных анализов, связанных с неправильным взятием проб крови и неверным соотношением реагентов.

закручивающаяся крышка предотвращает "аэрозольный эффект" при открывании;

1. Надеть иглу на контейнер и закрепить легким поворотом по часовой стрелке. Провести пункцию вены.

1. Провести пункцию вены иглой. Благодаря защитной мембране кровь из иглы не вытекает.

2. Медленно оттягивая поршень, наполнить контейнер кровью. После заполнения кровью контейнер вместе с иглой вынуть из вены. Поршень зафиксировать в конечном положении до характерного щелчка. В случае взятия нескольких образцов крови, контейнер отсоединить. Иглу оставить в вене и на нее надеть следующий контейнер.

2. Создать вакуум в контейнере.
Для этого отвести поршень в конечное положение (до характерного щелчка) и отломить его

3. По окончании взятия крови, шток поршня обломить. Вы получаете транспортный контейнер с кровью и антикоагулянтом или готовую пробирку для сепарации сыворотки.

3. Насадить контейнер на иглу. Взятие крови осуществляется под действием вакуума. В этом случае вы также получаете транспортный контейнер с кровью и антикоагулянтом или готовую пробирку для сепарации сыворотки.

Транспортировка образцов крови

При транспортировке образца внутри лечебно-диагностического учреждения, пробирки с кровью должны находиться в контейнере, который в случае повреждения пробирки будет предотвращать разлитие крови.

Порядок доставки крови в лаборатории

Штативы с кровью поместить в герметичный контейнер;

наружные части контейнера двукратно с интервалом в 15 минут протереть дезинфицирующим средством (концентрация по режиму для вирусных гепатитов);

доставить контейнер в лабораторию;

вынимать образцы крови из контейнера только в перчатках!

после возвращения из лаборатории контейнер вновь двукратно с интервалом в 15 минут протереть дезинфицирующим средством (концентрация по режиму, предусмотренному для гемоконтактных вирусных гепатитов).

Требование к маркировке пробирок.

Маркировку пробирок и заполнение сопроводительных документов следует проводить аккуратно и четко.

Фамилию, имя, отчество пациента писать четко и разборчиво.

В направлении заполнять все графы.

Не допускается, чтобы этикетка на пробирке была размыта, порвана или плохо приклеена.

Читайте также: