Определение группы крови кратко алгоритм

Обновлено: 02.07.2024

Группа крови (АВ0), Резус-фактор (Rh-фактор) – лабораторные исследования, которые позволяют определить группу крови по системе АВ0 и оценить резус-принадлежность человека.

Какие бывают группы крови?

0 (I) — 1-я группа крови

А (II) — 2-я группа крови

В (III) — 3-я группа крови

АВ (IV) — 4-я группа крови

Что такое резус-фактор?

Резус-фактор представляет собой антиген (белок), который находится в эритроцитах. Наличие резус-фактора не зависит от групповой принадлежности по системе АВ0, не изменяется в течение жизни и не зависит от внешних факторов. Примерно 80-85% людей имеют его и соответственно являются резус-положительными. Те же, у кого его нет – резус-отрицательными.

Определение группы крови и резус-фактора делятся на два способа:

первичное определение группы крови и резус фактора (цоликлоны Анти-А, Анти-B и Анти-D)
вторичная диагностика группы крови и резус-фактора (стандартные сыворотки и перекрестный способ, определение фенотипа, т.е. антигенов C, c, E, e, C w , K, k)

Экспресс-диагностика (первичное определение группы крови и Rh-фактора) не учитывает антигены Келл, не говоря уже про другие системы верификации. Поэтому цоликлоны применяют только для первичного определения группы крови и резус-фактора и при экстренных показаниях трансфузии компонентов крови.

Подробнее о самой редкой группе крови в Мире можно найти здесь.

Определение группы крови и резус-фактора цоликлонами анти-А, анти-В и Анти-D по системе AB0 и системе Резус

Определение группы крови и резус-фактора цоликлонами анти-А , анти-В и Анти-D супер является наиболее современным и относительно простым методом. Для определения группы крови используются цоликлоны, т.е. моноклональные антитела.

Что требуется для определения группы крови и резус-фактора?

– цоликлон анти-А ;

– цоликлон анти-В ;

– цоликлон анти-D ;

– раствор натрия хлорида 0,9 %; специальный планшет; стерильные палочки.

Алгоритм и порядок определения группы крови

Нанести цоликлоны анти-А , анти-В на специальный планшет по одной большой капле (0,1 мл), под соответствующими надписями.

Рядом с ними капнуть исследуемую кровь (0,01–0,03 мл) по одной маленькой капле. Перемешать их и наблюдать за наступлением или отсутствием реакции агглютинации в течение 3 мин. При сомнительном результате добавить 1 каплю 0,9% физиологического раствора.

Расшифровка результатов определения группы крови

если реакция агглютинации наступила с анти-А цоликлоном , то исследуемая кровь относится к группе А (II);
если реакция агглютинации наступила с анти-B цоликлоном , то исследуемая кровь относится к группе B (III);
если реакция агглютинации не наступила с анти-А и с анти-B цоликлонами, то исследуемая кровь относится к группе 0 (I);
если реакция агглютинации наступила с анти-А и с анти-B цоликлонами, то исследуемая кровь относится к группе AB (IV), как показано на рисунке.

Определение резус-фактора цоликлоном Анти- D

На планшете смешивают большую каплю (0,1 мл) анти-D цоликлона и маленькую каплю (0,01 мл) исследуемой крови пациента. За наступлением реакции агглютинации или её отсутствием наблюдают в течение 3 мин.

если реакция агглютинации наступила с цоликлоном анти-D , то исследуемая кровь относится к резус-положительной (Rh + )
если реакция агглютинации не наступила с цоликлоном анти-D , то исследуемая кровь относится к резус-отрицательной (Rh — )

Другими словами, при смешивании цоликлона Анти-D с резус-положительными эритроцитами наступает реакция агглютинации, а если кровь резус-отрицательная — агглютинация отсутствует (как показано на рисунке — четвертая группа крови резус-отрицательная).

Определение групп крови стандартными сыворотками

Определение групп крови стандартными изогемагглютинирующими сыворотками — поиск и обнаружение в крови антигенов А и В с помощью реакции агглютинации. Для достижения цели используют:

Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки групп крови О (I) — бесцветная, А (II) — синяя, В (III) — красная, АВ (IV) — жёлтая.
Белые тарелки, маркированные группами крови: 0 (I), А (II), В (III), AB (IV).
NaCl 0,9%
Стеклянные палочки

Методика определение группы крови стандартными сыворотками

Подписать тарелку (Ф.И.О. пациента);
Нанести обозначения двух серий стандартных сывороток I, II и III групп крови в объёме 0,1 мл, образующие два ряда по три капли слева направо: 0 (I), А (II), В (III);
Забрать кровь из вены. Шесть капель исследуемой крови пациента перенести стеклянной палочкой на пластину в шесть точек рядом с каплей стандартной сыворотки и перемешать.

Агглютинация начнется через 30 сек. В те капли, где произошла агглютинация, добавить по одной капле NaCl 0,9% и оценить результат.

Оценка результатов определение группы крови стандартными сыворотками

Положительная реакция агглютинации может быть пескообразной или лепестковой. При отрицательной реакции капля остаётся равномерно окрашенной в красный цвет. Результаты реакций в каплях с сыворотками одной и той же группы (двух серий) должны совпадать. Принадлежность исследуемой крови к соответствующей группе определяют по наличию или отсутствию агглютинации при реакции с соответствующими сыворотками после наблюдения в течение 5 мин. При этом следует отметить, что если сыворотки всех трёх групп дали положительную реакцию, это указывает на то, что испытуемая кровь содержит оба агглютиногена (А и В) и принадлежит к группе AB (IV). Однако в таких случаях для исключения неспецифической реакции агглютинации необходимо провести дополнительное контрольное исследование испытуемой крови со стандартной изогемагглютинирующей сывороткой группы AB (IV), не содержащей агглютининов. Лишь отсутствие агглютинации в этой капле при наличии агглютинации в каплях, содержащих стандартные сыворотки групп 0 (I), А (II) и В (III), позволяет считать реакцию специфической и отнести исследуемую кровь к группе АВ (IV).

Определение групп крови с помощью цоликлонов анти-А и анти-В.

Цоликлоны анти-А и анти-В предназначены для определения групп крови человека системы АВО взамен стандартных изогем-агглютинирующих сывороток.

Определение групп крови системы АВО включает выявление антигенов А и В в эритроцитах стандартными антителами и выявление агглютининов в сыворотке или плазме исследуемой крови стандартными эритроцитами. Антигены А и В определяют с помощью цоликлонов анти-А и анти-В. У доноров обязательно определение не только антигенов в эритроцитах, но и агглютининов в сыворотке (плазме) с помощью стандартных эритроцитов.

Основные свойства цоликлональных сывороток.

Цоликлоны анти-А и анти-В являются продуктом гибридомных клеточных линий, полученных в результате слияния мышиных антителообразующих В-лимфоцитов с клетками мышиной миеломы. Индивидуальные гибридомные линии продуцируют гомогенные антитела только одного класса иммуноглобулинов, которые полностью идентичны по структуре и биологической активности. Антитела, продуцируемые клетками одного клона (потомство одной клетки), являются моноклональными.

Справка. Клональные антитела.

Культура клеток одной специфичности, происходящих из одного лимфоцита, образует клетки одного клона. Главное заключается в следующем: необходимо получить от одной клетки специфические антитела и наработать их в неограниченном количестве. Трудность заключается в преодолении двух задач: во-первых, нормальные клетки после нескольких делений погибают; во-вторых, только раковые клетки способны неограниченно размножаться. Для решения этих двух несовместимых проблем в 1975 году Г. Кёлер и К. Мильштейн создали клеточные гибриды, или гибридомы. Гибридомы — это слияние нормальных лимфоцитов в питательной среде с клетками миеломы. Лимфоциты в этой среде не погибают, а от миеломного партнера получают возможность бесконечно размножаться. Таким образом, гибридомный клан размножается, а в результате этого процесса образуются моноклональные антитела.
Лимфоциты, несущие агтлютиноген А, вырабатывают специфическое антитело анти-А; лимфоциты, несущие агтлютиноген В, вырабатывают специфическое антитело анти-В.

Моноклональные анти-А и анти-В антитела продуцируются двумя различными гибридомами. Цоликлоны анти-А и анти-В представляют собой разведенную асцитную жидкость мышей-носителей соответствующей гибридомы, в которой содержатся специфические иммуноглобулины класса М (IgM), направленные против группоспецифических антигенов А или В человека.
Таким образом, цоликлоны не содержат антител иной специфичности и поэтому не вызывают неспецифической полиагглютинации эритроцитов.

Авидность, то есть время наступления реакции агглютинации и ее выраженность, у цоликлонов анти-А и анти-В выше, чем у изогемагглютинирующих АВО-сывороток, особенно в случае слабо выраженных антигенов эритроцитов.
Цоликлоны не являются клетками человеческих тканей, что исключает возможность инфекционного заражения.

Методика определения групп крови с помощью цоликлонов анти-А и анти-В

Определение групп крови системы АВО реагентами цоликлон производится в нативной крови, стабилизированной с помощью применяемых консервантов (глюгицир, цитроглюкофосфат, гепарин и др.); в крови, взятой из пальца; в крови, взятой без консерванта. Наиболее четкая реакция агглютинации наблюдается при использовании высокой концентрации эритроцитов.

Определение группы крови производится в помещении с хорошим освещением при температуре от +15° до +25°С. Реагенты не должны храниться открытыми, так как при высыхании активность антител снижается. Не следует пользоваться реагентами, если в них имеются нерастворимые хлопья или помутнение. Для каждого реагента используют свою маркированную (анти-А или анти-В) пипетку. Определение группы крови системы АВО производится обычными методами на белой фарфоровой или любой другой планшетке со смачиваемой поверхностью.

Высокая активность и авидность реагентов цоликлон позволяет применять по одной серии реагентов анти-А и анти-В. На плоскость планшета или тарелку наносят цоликлоны анти-А и анти-В по две капли (0,1 мл) под соответствующими надписями: анти-А или анти-В. Рядом с каплями антител наносят исследуемую кровь по одной маленькой капле, приблизительно в 10 раз меньше (0,01 мл). В случае определения группы крови, взятой из пальца или взятой без консерванта, необходимо брать большое количество эритроцитов, т. е. первые капли из пальца (без сильного выдавливания) или свободные эритроциты из осадка свернувшейся крови.

При определении группы крови антитела и кровь смешивают стеклянной палочкой или углом предметного стекла, которые промывают и досуха вытирают перед размешиванием каждой капли. Наблюдение за реакцией проводят при легком покачивании в течение не более 2,5 минуты. Положительный результат при определении группы крови проявляет себя агглютинацией (склеиванием) эритроцитов. При этом агглютинаты можно увидеть без каких-либо приспособлений в виде мелких красных агрегатов, быстро сливающихся и образующих крупные хлопья.
При отрицательной реакции определения группы крови капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агтлютинаты в ней не обнаруживаются. Агглютинация, обычно, определяется в течении первых 3—5 секунд. Несмотря на это, наблюдение за результатами необходимо вести не меньше 2,5 минуты из-за возможности более позднего наступления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В.

Определение группы крови по цоликлонам — это простая процедура, которая проводится в лабораторных условиях. В ее основе лежит химическая реакция между моноклональными сыворотками и агглютиногенами. В результате можно узнать не только группу крови, но и ее резус-фактор, и эти методики считаются наиболее простыми, точными и доступными. Вещества продаются в удобных флаконах разного объема и оснащены дозатором-капельницей. Проведение анализа занимает несколько минут, благодаря чему в лабораториях можно в течение дня обработать огромное количество проб.

Что такое цоликлоны?

Цоликоны — это моноклональные антитела, которые находятся в солевом растворе. Вещество получило свое название в честь его изобретателей — Центральный Ордена Ленина Институт, сегодня переименованный в Гематологический научный центр. Они представлены жидкостью, которая продается во флаконах объемом 5 и 10 мл. Это универсальный реагент для гематологических исследований, поскольку позволяет определить группу крови как в системе АВ0, так в системе резус.

Выделяют 3 основные разновидности цоликлонов:

анти-А — жидкость красного цвета;
анти-В — синее вещество;
анти-D — прозрачный реагент для определения резус-фактора.

Для определения группы крови применяются цоликлоны анти-А и анти-В. Они вступают в биохимические реакции с агглютиногенами, которые расположены на поверхности эритроцитов — красных кровяных клеток. Эритроциты группы крови А содержат агглютиноген А, который прореагирует с цоликлоном анти-А. Аналогично определяется содержание агглютингена В. Положительным результатом реакции считается склеивание эритроцитов и выпадение их в осадок.

СПРАВКА! Агглютинация — это склеивание веществ. Агглютиногенами называются соединения, которые находятся на поверхности эритроцитов и вызывают их склеивание при соединении несовместимых групп крови.

Процедура определения группы крови

нанести две большие капли цоликлонов на поверхность планшета (обычно реагент анти-А находится слева, а анти-В — справа);
добавить небольшие капли крови, которые по объему будут в 10 раз меньше реагентов;
аккуратно двигать планшет, чтобы кровь смешалась с раствором, но две капли не соединились друг с другом;
через несколько минут наблюдать результаты.

Для установления группы подойдет и кровь с добавлением консерванта. Однако простота методики позволяет проводить ее на месте непосредственно после взятия биологического материала. Достаточно набрать небольшое количество капиллярной крови из пальца, чтобы ее полностью хватило для проведения анализа.

Анализ проводится на специальном стеклянном планшете

Расшифровка результатов

Спустя несколько минут после соединения реагентов можно наблюдать результаты. Полное смешивание жидкостей говорит об отсутствии реакции, а агглютинация проявляется появлением красных сгустков в прозрачном растворе. Это эритроциты, которые склеиваются между собой при контакте с несовместимыми моноклональными антителами. Далее можно расшифровать результаты по простому алгоритму:

1 группа (0) — агглютинация отсутствует в обеих каплях, поскольку на эритроцитах отсутствуют агглютиногены;
2 группа (А) — реакция наблюдается в первой капле с цоликлоном анти-А;
3 группа (В) — во второй капле происходит склеивание эритроцитов при контакте с реагентом анти-В;
4 группа (АВ) — появление красного осадка в обеих каплях.

Четвертая группа крови считается самой редкой, поэтому при появлении агглютинации в обеих лунках анализ проводится повторно. Кроме того, кровь необходимо добавить в обычный физиологический раствор, чтобы исключить вероятность опасных заболеваний. У здорового человека она никак не прореагирует с физраствором, а эритроциты не будут склеиваться.

Определение резус-фактора

Для определения резус-фактора понадобится цоликлон анти- D. Он представлен бесцветной жидкостью и также продается в небольших флаконах с дозатором. Чтобы провести реакцию, достаточно одной дополнительной капли крови, которую помещают на планшете отдельно. Процедура проводится по следующей схеме:

нанести каплю цоликлона анти- D объемом 0,1 мл на стекло;
рядом добавить каплю крови, объем которой составляет 0,01 мл;
стеклянной палочкой соединить две жидкости и аккуратно шевелить стекло, чтобы кровь перемешивалась и реагентом;
спустя 3 минуты зафиксировать результат.

Первые результаты могут просматриваться через 15 секунд, но для установления окончательного результата важно подождать 3 минуты. Наличие результата, то есть появление реакции агглютинации, говорит о том, что резус-фактор положительный, его отсутствие свидетельствует об отрицательном резусе.

СПРАВКА! Агглютинация выражается появлением красных хлопьев, состоящих из эритроцитов, которые можно увидеть невооруженным глазом, без специальных условий и оборудования.

Расшифровка анализов происходит по таблице, положительным результатом считается агглютинация эритроцитов

Полезные советы

Определение группы и резус-фактора крови с использованием цоликлонов считается одним из самых простых и доступных методов, поэтому широко применяется в лабораториях разного уровня. Кроме того, такой анализ дает достоверные результаты. Однако в некоторых случаях они бывают ложными, а причиной этому становится несоблюдение нескольких правил. Простая инструкция по применению цоликлонов и работа с ними позволит избежать получения недостоверных результатов и необходимости проводить исследование заново:

хранить реагенты в холодильнике, при температуре от 2 до 8 градусов, а распечатанный флакон использовать в течение 30 суток;
исследования проводятся при комнатной температуре, а в слишком жарком помещении рекомендуется периодически охлаждать стеклянную поверхность планшета;
обозначать на планшете разные цоликлоны маркером, поскольку их цвет после добавления крови быстро исчезает;
соблюдать правильные пропорции реагентов: если крови будет слишком много, реакция агглютинации эритроцитов будет мало выражена;
не допускать смешивания капель жидкости, в которых уже присутствуют разные типы цолкиклонов — в таком случае реакцию придется проводить заново;
обозначать окончательный результат не менее, чем через 3 минуты после начала реакции.

Важно также соблюдать последовательность действий во время анализа. Так, если стеклянную поверхность не раскачивать, даже при отсутствии реакции склеивания эритроциты будут расположены в краевой зоне капли. Это может стать причиной неправильной интерпретации результатов. При определении группы крови необходимо учитывать острые и хронические заболевания, которые наблюдаются у пациента. При патологиях печени и органов кроветворной системы, а также болезнях, которые протекают по типу сепсиса, может происходить явление патагглютинации. Эритроциты будут склеиваться даже при контакте с обычным физиологическим раствором. Напротив, при лейкозе кровяные клетки не отреагируют на присутствие антител, и агглютинация не произойдет.

Цоликлоны — это важные реагенты, которые используются ежедневно в гематологических лабораториях. Они позволяют быстро и безошибочно определить группу крови и ее резус без дополнительного оборудования и специальных навыков. Однако важно выполнять простой алгоритм, чтобы результаты анализа действительно были достоверными.

Читайте также: