Метод раздавленной капли микробиология кратко
Обновлено: 05.07.2024
Для изучения формы и выявления подвижности бактерий их исследуют в живом состоянии в препаратах раздавленной или висячей капли.
Раздавленная капля. На предметное стекло наносят каплю бульонной культуры. При обильном росте микробов культуру предварительно разводят стерильным изотоническим раствором хлорида натрия (рец. 31). Нанесенную на предметное стекло каплю раздавливают. Для этого покровное стекло ставят на ребро у края капли и опускают, постепенно вытесняя воздух, находящийся между предметным и покровным стеклами, чтобы избежать образования в капле пузырьков воздуха. В правильно приготовленном препарате раздавленной капли стекла плотно склеиваются и жидкость тончайшим слоем заполняет пространство между ними, не выступая за края покровного стекла.
Препарат микроскопируют, используя объективы х40 или х50. Очень хорошие результаты дает микроскопия этих препаратов в темном поле.
Недостаток метода в том, что препараты быстро высыхают, поэтому следует просматривать их сразу после изготовления или помещать во влажную камеру (чашка Петри, на дно которой положено 2–3 кружка влажной фильтровальной бумаги, покрытых двумя сухими фильтровальными листками).
Висячая капля. На середину обезжиренного покровного стекла наносят небольшую каплю культуры в бульоне или физиологическом растворе, покрывают предметным стеклом с лункой таким образом, чтобы капля свободно висела в центре лунки, не касаясь ее дна. Для того чтобы создать герметизированную камеру, края лунки предварительно смазывают вазелином. После этого предметное стекло с прилипшим к нему покровным стеклом переворачивают. Капля оказывается висячей в герметически закрытой влажной камере, из которой жидкость испаряется очень медленно, и поэтому препарат долгое время остается пригодным для изучения (рис. 6.1).
Висячую каплю микроскопируют с плоским зеркалом и суженной диафрагмой. При малом увеличении (х8) находят край капли, отчетливо видный в затемненном поле зрения. По одну сторону края видно множество мельчайших капелек конденсата, осевших на внутренней поверхности покровного стекла, по другую сторону края фон равномерно серого цвета – искомая капля. Найденный край капли устанавливают в центре поля зрения микроскопа при малом увеличении и, не сдвигая препарата, переходят на объектив (х40) или иммерсионную систему, слегка расширив диафрагму микроскопа.
Подвижные бактерии проходят с одинаковой скоростью большие пространства, иногда через все поле зрения микроскопа, вращаясь вокруг своей оси.
Живые микробы, находящиеся в висячей капле, можно изучать и в темном поле зрения. При этом методе микроскопирования толщина предметных стекол не должна превышать 1,2 мм, покровных – 0,2 мм.
При микроскопировании препаратов в темном поле зрения на верхнюю поверхность конденсора наносят каплю кедрового или вазелинового масла, поверх которой очень осторожно, чтобы не образовалось пузырьков воздуха, накладывают препарат. На покровное стекло наносится вторая капля масла. Наносить масло на обе поверхности препарата необходимо для того, чтобы при микроскопировании с иммерсионной системой проходящие лучи света не преломлялись.
Раздавленная капля в микробиологии дает возможность изучить жизнь и размножение многих микроорганизмов. Чтобы провести эксперимент, достаточно иметь немного воды из любого природного водоема. Заранее подготовьте также предметное и покровное стекла, а также стерильную пипетку и любое средство для обезжиривания поверхности. Дальше рекомендуется следовать простой инструкции:
Капля будет находиться в специальной герметичной камере, поэтому храниться может на протяжении длительного времени.
Воду стоит наносить пипеткой или специальной петлей. Важно проследить, чтобы в образце не появилось лишнего воздуха. Чтобы предотвратить высыхание, препарат хранят во влажной камере.
Производитель оставляет за собой право вносить любые изменения в стоимость, модельный ряд и технические характеристики или прекращать производство изделия без предварительного уведомления.
На предметное стекло наносят пипеткой или петлей каплю культуры и покрывают ее покровным стеклом. !Чтобы не образовалось пузырьков воздуха, покровное стекло подводят ребром к краю капли и резко опускают его
Для предохранения от высыхания препарат помещают во влажную камеру
Микроскопируют в темном поле при увеличении объектива 40Х
Препарат можно поместить во влажную камеру для предохранения от высыхания
Метод висячей капли
Для приготовления препарата необходимы стекло с лункой, покровное стекло, вазелин. Края лунки покрывают тонким слоем вазелина (рис. № 10)
На покровное стекло наносят каплю культуры и осторожно накрывают покровное стекло стеклом с лункой так, чтобы капля оказалась в центре
Склеившиеся стекла быстро переворачивают покровным стеклом вверх. Капля находится в герметической камере и сохраняется долгое время
Микроскопия сначала при увеличении 8Х. Находят край капли, а затем переводят на большое увеличение 40Х (рис. № 11).
Рис. №10. Техника приготовления препарата висячая капля
Рис. №11. Лептоспира в темном поле
ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗАНЯТИЕ №6
Зачетное занятие с замером навыков по теме:
Перечень манипуляций к зачету:
- подготовить препарат и окрасить его по методу Грама. Значение метода
- подготовить препарат и окрасить его по методу Ожешко. Значение метода
- подготовить препарат и окрасить его по методу Бурри-Гинса. Значение метода
- подготовить препарат, окрасив его по методу Циля-Нильсена (1999г). Значение метода
- подготовить препарат висячая капля, значение методики
- подготовить препарат раздавленная капля, значение методики
- промикроскопировать готовые препараты, окрашенные различными методами: по Граму, Ожешко, Бурри-Гинсу, Циля-Нильсену.
Вопросы к зачету:
- назовите основные формы бактериальных клеток,
-перечислите основные и дополнительные структуры прокариотической клетки, их функции,
- укажите состав и строение жгутиков, группы бактерий по расположению жгутиков,
- назовите строение и функции нуклеоида у прокариот,
- укажите, что собой представляет спора и ее значение для бактерий, расположение спор в клетке (примеры микробов).
Тестовые задания для самоконтроля
1. Расставьте этапы приготовления препарата в нужном порядке:
в) приготовление мазка
2. Укажите соответствие между возбудителем и методом его окраски:
стафилококк а) по Граму
микобактерия туберкулеза б) Циля - Нильсену
пневмококк в) Бурри - Гинсу
бацилла сибирской язвы г) Ожешко
3. Простой метод окраски:
б) метиленовым синим
г) по Романовскому - Гимзе
4. Хранителем наследственной информации у прокариот является:
5. Окраска по методу Бурри отличается от метода Бурри-Гинса:
а) по времени окрашивания
б) отсутствия фуксина Пфейффера
в) разные разведения туши
г) мазок фиксируется в пламени горелки
6. При окраске препарата методом Циля-Нильсена (инструкция 1999г.) используется:
7. К спорообразованию способны:
г) кишечная палочка
8. В методике окраски по Бурри-Гинсу используется черная тушь, разведенная в
9. Укажите соответствие:
Метод окраски: Цель метода:
метод Ожешко а) обнаружение капсулы
метод Бурри б) определение кислотоустойчивости
метод Циля-Нильсена в) отношение к Граму
4. метод Грама г) определение споры
10. При изучении подвижности используется микроскопия: а) фазово-контрастная
Читайте также: