Метод раздавленной капли микробиология кратко

Обновлено: 05.07.2024

Для изучения формы и выявления подвижности бактерий их исследуют в живом состоянии в препаратах раздавленной или висячей капли.

Раздавленная капля. На предметное стекло наносят каплю бульонной культуры. При обильном росте микробов культуру предварительно разводят стерильным изотоническим раство­ром хлорида натрия (рец. 31). Нанесенную на предметное стекло каплю раздавливают. Для этого покровное стекло ставят на ребро у края капли и опускают, постепенно вытесняя воз­дух, находящийся между предметным и покровным стеклами, чтобы избежать образования в капле пузырьков воздуха. В пра­вильно приготовленном препарате раздавленной капли стекла плотно склеиваются и жидкость тончайшим слоем заполняет пространство между ними, не выступая за края покровного стекла.

Препарат микроскопируют, используя объективы х40 или х50. Очень хорошие результаты дает микроскопия этих пре­паратов в темном поле.

Недостаток метода в том, что препараты быстро высыха­ют, поэтому следует просматривать их сразу после изготовле­ния или помещать во влажную камеру (чашка Петри, на дно которой положено 2–3 кружка влажной фильтровальной бу­маги, покрытых двумя сухими фильтровальными листками).

Висячая капля. На середину обезжиренного покровного стекла наносят небольшую каплю культуры в бульоне или физиологическом растворе, покрывают предметным стеклом с лункой таким образом, чтобы капля свободно висела в центре лунки, не касаясь ее дна. Для того чтобы создать герметизи­рованную камеру, края лунки предварительно смазывают вазе­лином. После этого предметное стекло с прилипшим к нему покровным стеклом переворачивают. Капля оказывается вися­чей в герметически закрытой влажной камере, из которой жидкость испаряется очень медленно, и поэтому препарат дол­гое время остается пригодным для изучения (рис. 6.1).

Висячую каплю микроскопируют с плоским зеркалом и суженной диафрагмой. При малом увеличении (х8) находят край капли, отчетливо видный в затемненном поле зрения. По одну сторону края видно множество мельчайших капелек кон­денсата, осевших на внутренней поверхности покровного стек­ла, по другую сторону края фон равномерно серого цвета – искомая капля. Найденный край капли устанавливают в центре поля зрения микроскопа при малом увеличении и, не сдвигая препарата, переходят на объектив (х40) или иммерсионную систему, слегка расширив диафрагму микроскопа.

Подвижные бактерии проходят с одинаковой скоростью большие пространства, иногда через все поле зрения микро­скопа, вращаясь вокруг своей оси.

Живые микробы, находящиеся в висячей капле, можно изу­чать и в темном поле зрения. При этом методе микроскопирования толщина предметных стекол не должна превышать 1,2 мм, покровных – 0,2 мм.

При микроскопировании препаратов в темном поле зрения на верхнюю поверхность конденсора наносят каплю кедрового или вазелинового масла, поверх которой очень осторожно, чтобы не образовалось пузырьков воздуха, накладывают пре­парат. На покровное стекло наносится вторая капля масла. Наносить масло на обе поверхности препарата необходимо для того, чтобы при микроскопировании с иммерсионной систе­мой проходящие лучи света не преломлялись.

Раздавленная капля в микробиологии дает возможность изучить жизнь и размножение многих микроорганизмов. Чтобы провести эксперимент, достаточно иметь немного воды из любого природного водоема. Заранее подготовьте также предметное и покровное стекла, а также стерильную пипетку и любое средство для обезжиривания поверхности. Дальше рекомендуется следовать простой инструкции:

Капля будет находиться в специальной герметичной камере, поэтому храниться может на протяжении длительного времени.

Воду стоит наносить пипеткой или специальной петлей. Важно проследить, чтобы в образце не появилось лишнего воздуха. Чтобы предотвратить высыхание, препарат хранят во влажной камере.

Производитель оставляет за собой право вносить любые изменения в стоимость, модельный ряд и технические характеристики или прекращать производство изделия без предварительного уведомления.

На предметное стекло наносят пипеткой или петлей каплю культуры и покрывают ее покровным стеклом. !Чтобы не образовалось пузырьков воздуха, покровное стекло подводят ребром к краю капли и резко опускают его

Для предохранения от высыхания препарат помещают во влажную камеру

Микроскопируют в темном поле при увеличении объектива 40Х

Препарат можно поместить во влажную камеру для предохранения от высыхания

Метод висячей капли


Для приготовления препарата необходимы стекло с лункой, покровное стекло, вазелин. Края лунки покрывают тонким слоем вазелина (рис. № 10)

На покровное стекло наносят каплю культуры и осторожно накрывают покровное стекло стеклом с лункой так, чтобы капля оказалась в центре

Склеившиеся стекла быстро переворачивают покровным стеклом вверх. Капля находится в герметической камере и сохраняется долгое время

Микроскопия сначала при увеличении 8Х. Находят край капли, а затем переводят на большое увеличение 40Х (рис. № 11).

Рис. №10. Техника приготовления препарата висячая капля


Рис. №11. Лептоспира в темном поле

ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗАНЯТИЕ №6

Зачетное занятие с замером навыков по теме:

Перечень манипуляций к зачету:

- подготовить препарат и окрасить его по методу Грама. Значение метода

- подготовить препарат и окрасить его по методу Ожешко. Значение метода

- подготовить препарат и окрасить его по методу Бурри-Гинса. Значение метода

- подготовить препарат, окрасив его по методу Циля-Нильсена (1999г). Значение метода

- подготовить препарат висячая капля, значение методики

- подготовить препарат раздавленная капля, значение методики

- промикроскопировать готовые препараты, окрашенные различными методами: по Граму, Ожешко, Бурри-Гинсу, Циля-Нильсену.

Вопросы к зачету:

- назовите основные формы бактериальных клеток,

-перечислите основные и дополнительные структуры прокариотической клетки, их функции,

- укажите состав и строение жгутиков, группы бактерий по расположению жгутиков,

- назовите строение и функции нуклеоида у прокариот,

- укажите, что собой представляет спора и ее значение для бактерий, расположение спор в клетке (примеры микробов).

Тестовые задания для самоконтроля

1. Расставьте этапы приготовления препарата в нужном порядке:

в) приготовление мазка

2. Укажите соответствие между возбудителем и методом его окраски:

стафилококк а) по Граму

микобактерия туберкулеза б) Циля - Нильсену

пневмококк в) Бурри - Гинсу

бацилла сибирской язвы г) Ожешко

3. Простой метод окраски:

б) метиленовым синим

г) по Романовскому - Гимзе

4. Хранителем наследственной информации у прокариот является:

5. Окраска по методу Бурри отличается от метода Бурри-Гинса:

а) по времени окрашивания

б) отсутствия фуксина Пфейффера

в) разные разведения туши

г) мазок фиксируется в пламени горелки

6. При окраске препарата методом Циля-Нильсена (инструкция 1999г.) используется:

7. К спорообразованию способны:

г) кишечная палочка

8. В методике окраски по Бурри-Гинсу используется черная тушь, разведенная в

9. Укажите соответствие:

Метод окраски: Цель метода:

метод Ожешко а) обнаружение капсулы

метод Бурри б) определение кислотоустойчивости

метод Циля-Нильсена в) отношение к Граму

4. метод Грама г) определение споры

10. При изучении подвижности используется микроскопия: а) фазово-контрастная

Читайте также: