Этапы микробиологических исследований план урока

Обновлено: 05.07.2024

Презентация на тему: " Тема занятия : «Цели, задачи, сущность и структура дисциплины. Основные понятия и термины микробиологии. Микробиологические исследования и открытия А." — Транскрипт:

3 Микроорганизмы на поверхности рук и продуктов.

4 Изучением микроорганизмов занимается микробиология ( micros- малый, bios- жизнь, logos- учение ).

5 Микробиология изучает строение, жизнедеятельность, биохимическую деятельность, закономерности и условия развития микроорганизмов. Микроорганизмы – это мельчайшие живые организмы, которые видно только под микроскопом.

6 Физиология наука, изучающая процессы жизнедеятельности организма, его различных органов и систем, их взаимодействие друг с другом и внешней средой. Физиология питания является частью общей физиологии человека и изучает процессы превращения пищевых веществ в энергию и структурные элементы тканей тела человека.

7 Цель физиологии питания определить потребности организма в пищевых веществах и оптимальные условия переваривания пищи и использования ее в организме.

8 Гигиена наука, изучающая влияние различных факторов внешней среды, условия жизни и труда на здоровье человека и разрабатывающая меры профилактики заболеваний, обеспечения наиболее оптимальных условий существования, сохранения здоровья и продления жизни.

9 Гигиена питания один из важнейших разделов гигиенической науки о рациональном питании населения. Ее задачей является разработка научно обоснованных норм питания человека, способов кулинарной обработки, хранения, перевозки и реализации продуктов.

10 Санитария практическое осуществление гигиенических норм и правил. На предприятиях общественного питания она направлена на соблюдение строгого санитарного режима в процессе хранения и транспортирования пищевых продуктов, приготовления, реализации пищи и обслуживания потребителей.

11 Твердые знания и строгое соблюдение правил гигиены и санитарии обеспечивают культуру обслуживания населения и выпуск продукции высокого качества.

12 Одни микробы играют положительную, а другие отрицательную роль в жизни человека.

14 Полезные микроорганизмы Бактерии и микроорганизмы в молочной продукции под микроскопом

15 Вредные микробы Плесень- это живой микроорганизм

17 Французский ученый Луи Пастер ( гг.) положил начало изучению физиологии микроорганизмов. Он впервые установил причинную связь между микробами и процессами, происходящими в природе (брожение), доказал, что ряд болезней человека и животных возникает от болезнетворных микробов, разработал вакцины против бешенства и сибирской язвы, применение которых предупреждает возникновение этих грозных заболеваний.

18 Немецкий бактериолог Роберт Кох ( гг.) внес большой вклад в микробиологию, разработав методы исследования микробов и питательные среды для их выращивания. Он открыл возбудителей туберкулеза и холеры.

19 Развитие микробиологии связано с именами выдающихся русских ученых. И. И. Мечников ( гг.) открыл защитные свойства организма (явление фагоцитоза), создал учение о невосприимчивости (иммунитете) организма к заразным заболеваниям.

20 Исторический путь развития древнейшей науки микробиологии можно разбить на пять этапов в зависимости от уровня и методов познания мира микробов: 1. Эвристический 2. Морфологический 3. Физиологический 4. Иммунологический 5. Молекулярно-генетический

21 Эвристический этап Связан с неожиданными находками и догадками (эврика – неожиданная находка) о существовании на Земле невидимых живых существ, вызывающих болезни. Основоположник античной медицины Гиппократ считал, что болезни человека вызываются какими-то невидимыми частицами, которые он назвал миазмами, выделяемыми в болотных и других местностях.

22 Микробы, наиболее часто встречающиеся в процессе приготовления пищи делятся на: 1. Бактерии 2. Плесневые грибы 3. Дрожжи 4. Вирусы

23 Бактерии – наиболее изученные микроорганизмы, обычно одноклеточные, обладающие клеточной стенкой, но не имеющие оформленного ядра. Бактерии имеют размер 0,4- 10 мкм и по форме делятся на : 1. Кокки – микробы шаровидной формы ( микрококки, диплококки, стафилококки, стрептококки )

24 Кокки Микробы шаровидной формы

25 Палочки 2. Палочки( одиночные, двойные, цепочки)

27 Строение бактерий: Бактерии покрыты оболочкой, представляющей собой уплотненный слой цитоплазмы, которая придает клетке форму. Наружный слой оболочки у многих бактерий может представлять собой покров – капсулу. На поверхности некоторых бактерий (палочковидных) имеются нитевидные образования – жгутики, с помощью которых они передвигаются. Некоторые палочковидные бактерии при неблагоприятных условиях образуют споры. Споры не нуждаются в питании, не способны размножаться, но сохраняют свою жизнеспособность при высоких температурах, высушивании, замораживании. Споры погибают только при стерилизации ( нагревание до 120 градусов в течении 30 минут).

28 В благоприятных условиях споры прорастают в обычную бактериальную клетку. Спорообразующие бактерии называют бациллами. Размножаются бактерии путем простого деления. При благоприятных условиях размножение одной клетки протекает в течении минут.

29 Плесневые грибы Это одноклеточные или многоклеточные низшие растительные организмы, в своей жизнедеятельности нуждающиеся в готовых пищевых веществах и в доступе воздуха. Клетки плесневых грибов имеют форму вытянутых переплетающихся нитей – гифов. Размножаются с помощью гиф и спор.

Используя имеющиеся знания из курса биологии и личный опыт, вспомним, что мы знаем о бактериях? (на классной доске в левой половине) Что вам как будущим поварам хотелось бы узнать о бактериях в ходе нашей работы? (в правой)

Дисциплина: Микробиология

Преподаватель: Седенкова Эльмира Маратовна

Цели и задачи:

Образовательный аспект: в результате УЗ обучающиеся должны на минимальном уровне на базовом уровне знать:

- строение и функционирование биологического объекта: клетки;

- сущность биологического процесса размножения,

- биологическую терминологию и символику.

в пищевом производстве;

- правила личной гигиены работников

- описывать особенности видов по морфологическому критерию;

- находить информацию о биологических объектах в различных источниках (учебниках, справочниках, научно-популярных изданиях, компьютерных базах, ресурсах сети Интернет) и критически ее оценивать.

- соблюдать правила личной

гигиены при приготовлении пищи;

и давать оценку полученных результатов.

Развивающие задачи:

- продолжить формирование умений работать с микроскопом и натуральными объектами;

- продолжить развитие умений применять знания на практике;

- развитие аналитического мышления - формирование умения выделять существенные признаки и свойства;

- развитие аналитико-синтезирующего мышления - развитие умений классифицировать факты, делать обобщающие выводы.

- развитие навыков взаимодействия, коммуникации;

- использовать приобретенные знания и умения в практической деятельности и повседневной жизни: для соблюдения мер профилактики отравлений, вирусных и других заболеваний.

Воспитательные задачи:

- посредством организации групповой работы воспитывать чувство ответственности за работу членов команды, результат выполнения заданий;

- содействовать формированию познавательного интереса к предмету, к выбранной профессии;

- прививать гигиенические навыки.

Виды педагогических технологий, применяемые на данном уроке:

Интерактивные методы обучения (групповая форма)

Информационные технологии (визуализация учебной информации)

Система принципов: принцип комфортности, принцип минимакса, принцип деятельности

Оборудование:

Ноутбук, мультимедийный проектор, презентация, чашки Петри, фильтровальная бумага, лупы, микроскоп, веб-камера для микроскопа, микропрепараты.

Содержательная часть урока.

Организационный момент.

Постановка познавательной задачи

Слова преподавателя:

Почему прокисает молоко? Почему гниют фрукты? Кто в этом виноват?

Догадались, о чем пойдет речь? (Бактерии, микроорганизмы, клетки)

3. Изучение нового материала.

Слова преподавателя:

Вопросы обучающихся:

Какие бактерии наиболее распространены в пищевой промышленности

Можно ли разделить бактерии на группы

Нужно ли соблюдать гигиенические требования повару на рабочем месте

Существуют ли документы, нормирующие допустимое количество бактерий в продуктах питания

преподаватель пишет на доске.

Что мы знаем о бактериях

Что хотели бы узнать

Классификация по морфологическому признаку

Личная гигиена повара

Слова преподавателя:

Знания полученные в курсе общей биологии помогут нам расширить представления о мире бактерий и их роли в профессии повар.(Хозяйка (ин) усадьбы)

Для достижения поставленных вами целей мы посетим виртуальную экскурсию и будем работать в группах. Итак:

Морфология – это наука, изучающая форму микроорганизмов, их строение, способы передвижения и размножения.

В основу классификации бактерий положены их морфологические особенности (форма и размер клетки) способность к спорообразованию, отношение к окраске по Грамму. Я приглашаю Вас на виртуальную экскурсию в лабораторию санэпидемстанции. По завершению, которой ответьте на вопросы:

На какие группы делятся бактерии по методу Грама?

В чем отличие клеточных оболочек этих групп?

В какой цвет окрашивается каждая группа бактерий?

В СЭЗ используют метод окраски по Граму для того чтобы увидеть и классифицировать бактерии. Ребята давайте теперь ответим на вопросы

На какие группы делятся бактерии по методу Грама?

В чем отличие клеточных оболочек этих групп?

В какой цвет окрашивается каждая группа бактерий?

Продолжим изучение морфологии микроорганизмов на примере бактерий.

Ваша дальнейшая деятельность будет осуществляться в группах по 4 человека. Оценивать вы будете себя по картам самооценки за каждый этап работы.

Перед вами на столах находятся задания, на выполнение которых отводится 7 минут. В ходе работы используйте электронный учебник. В итоге каждая группа предоставит отчёт о проделанной работе.

Работа в группах:

Ответ обучающихся: Нам необходимо было изучить строение бактериальной клетки. В бактериальной клетке находятся следующие органоиды:

Из известных нам органоидов бактериальной клетки здесь присутствуют:

Рассказ о каждом органоиде.

Ответ учащихся: С помощью микроскопического метода мы определяли формы бактерий.

Изучив информацию мы узнали, что существуют следующие формы бактерий (зарисовать):

В виде запятой – это вибрионы

В виде спирали – это спириллы

В ходе своей работы мы выяснили, что

Кокки делятся на:

К бациллам относятся:

2. кишечная палочка

3. клостридиум ботулинум

На микробиологическом препарате мы увидели палочки, стафилококки, диплококки – зарисовать.

Раскройте сущность процессов размножения и спорообразования, используя

Ответ учащихся: Размножение бактерий:

Клетки бактерий при благоприятных условиях очень быстро размножаются, делясь надвое.

Деление клетки начинается с деления нуклеоида. Затем путем втягивания клеточной стенки образуется перегородка, причем нуклеоиды расходятся в разные половинки клетки, и образуются две новые клетки. Продолжительность размножения бактерий от 30 минут до нескольких часов.

При неблагоприятных условиях бактерия покрывается плотной оболочкой, её содержимое становится более густым, жизнедеятельность почти прекращается. Когда спора созреет, материнская клетка отомрёт. Спорообразование длится около 1 суток. В каждой бактериальной клетке может образовываться только одна такая спора. В таком состоянии споры бактерии могут часами находиться в глубоком вакууме, переносить температуру от –240 °С до +100 °С.

Слова преподавателя:

Этот этап работы окончен, прошу вас выставить себе оценки.

В связи с ограниченным количеством признаков у бактерий естественной классификации, отражающей эволюционное развитие отдельных видов бактерий, нет. Были созданы различные искусственные классификации бактерий, одна из них положена в основу Краткого определителя бактерий Берги. В настоящее время придерживаются именно этой классификации. Названия микроорганизмов состоят из двух латинских слов, первое означает род, второе-вид.

Наиболее распространенными видами бактерий в пищевых продуктах являются:

Lactobacillus

Лактобациллус

Escherichia coli

Эшерихия коли (кишечная палочка)

Staphilococcus aureus

Золотистый стафилококк

Bacillus cereus

Бациллус цереус

Bacillus subtilis

Бациллус субтилис

Clostridium botulinum

Клостридиум ботулинум

Первая группа способствует пищеварению, а так же используется для получения молочнокислых продуктов и в процессе брожения. Вторая группа бактерий вызывают острые пищевые отравления и порчу продуктов питания.

Предлагаю вам сюжет из жизни, подумайте, что привело к сложившейся ситуации.

4. Опыт: (связь с производством)

Расследование ведется, а как вы думаете, что могло послужить такому массовому отравлению детей.

Отвечают участники групп:

1-я группа – мы, считаем, что нарушение технологии приготовления блюд

2-я группа – мы думаем, что нарушение санитарных норм хранения продуктов

3-я группа – не соблюдение поварами и работниками столовой личной гигиены.

Слова преподавателя:

Молодцы ребята, все ваши версии имеют место быть. Но давайте оставим решение этой проблемы Росспотребнадзору. А сами опытным путем докажем, что необходимо поварам соблюдать правила личной гигиены перед работой с продуктами.

Для проведение опыта мы будем использовать простейший метод бактериологического исследования - бактериологический посев. На практике питательной средой для бактерий является агар – агар. Он очень часто используется в медицине для выявления заболевания, в пищевой промышленности, для оценки санитарного состояния воздуха, смывов с рук и поверхностей. Мы же будем использовать в качестве питательной среды пластинки картофеля.

Микробиологические исследования
Основные
Микроскопические
Культуральные
Дополнительные
Биопроба
Серологические
Биохимические
Вид бактерий
(окончательный
ответ исследований)
Аллергические
Изучение антигенных,
патогенных и вирулентных свойств

2. МИКРОСКОПИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

3. Световая микроскопия

Световая микроскопия предназначена
для изучения окрашенных препаратов
на предметных стеклах. С помощью
световой микроскопии можно
исследовать подвижность
микроорганизмов. Для этого
применяют метод висячей капли.
Небольшую каплю микробной взвеси
наносят на середину покровного
стекла. Предметное стекло с
углублением ("лункой"), края которого
смазаны вазелином, осторожно
накладывают на покровное стекло так,
чтобы капля исследуемой жидкости
оказалась в центре углубления, плотно
прижимают к стеклу и быстро
переворачивают кверху.

4. Строение светового микроскопа

5. Фазово-контрастная микроскопия

Фазово-контрастная микроскопия основана на интерференции
света: прозрачные объекты, отличающиеся по показателю
преломления от окружающей среды, выглядят либо как темные
на светлом фоне (позитивный контраст), либо как светлые на
темном фоне (негативный контраст). Фазово-контрастная
микроскопия
применяется
для
изучения
живых
микроорганизмов и клеток в культуре ткани.

6. Темнопольная микроскопия

Темнопольная микроскопия
основана на рассеянии света
микроскопическими объектами
Объекты при темнопольной
микроскопии выглядят ярко
светящимися на темном фоне.
Применяется темнопольная
микроскопия преимущественно
для изучения спирохет и
обнаружения (но не изучения
морфологии) крупных вирусов.

7. Люминесцентная микроскопия

В основе люминесцентной микроскопии
лежит явление люминесценции, т. е.
способности некоторых веществ
светиться при облучении их
коротковолновой (сине-фиолетовой)
частью видимого света либо
ультрафиолетовыми лучами с длиной
волны, близкой к видимому свету.
Люминесцентная микроскопия
используется в диагностических целях
для наблюдения живых или
фиксированных микроорганизмов,
окрашенных люминесцирующими
красителями (флюорохромами) в очень
больших разведениях, а также при
выявлении различных антигенов и
антител с помощью
иммунофлюоресцентного метода

8. Поляризационная микроскопия

Поляризационная
микроскопия основана
на явлении
поляризации света и
предназначена для
выявления объектов,
вращающих плоскость
поляризации.
Применяется в
основном для изучения
митоза.

9. Ультрафиолетовая микроскопия

В
основе
ультрафиолетовой
микроскопии
лежит
способность некоторых веществ (ДНК, РНК) поглощать
ультрафиолетовые лучи. Она дает возможность наблюдать
и количественно устанавливать распределение этих
веществ в клетке без специальных методов окраски. В
ультрафиолетовых микроскопах используется кварцевая
оптика, пропускающая ультрафиолетовые лучи.

10. Электронная микроскопия

Электронная микроскопия
принципиально отличается от
световой как устройством
электронного микроскопа, так и его
возможностями. Изображение в
электронном микроскопе наблюдают
на флюоресцирующем экране и
фотографируют. Высокая
разрешающая способность
современных электронных
микроскопов позволяет получить
полезное увеличение в миллионы раз.
С помощью электронного микроскопа
изучают ультратонкое строение
микроорганизмов и тканей, а также
проводят иммунную электронную
микроскопию.

11. Методы окраски мазков

Простой метод. Фиксированный мазок окрасить
каким-либо одним красителем, например фуксином
водным (1-2 мин) или метиленовым синим (3-5 мин),
промыть водой, высушить и микроскопировать.
Сложные методы. Последовательно нанести на
препарат определенные красители, различающиеся
по химическому составу и цвету, протравы, спирты,
кислоты и др. Это позволяет выявить определенные
структуры клеток и дифференцировать одни виды
микроорганизмов от других. Окрас методом Грама
является сложным методом.

12. Окраска по методу Грама

На фиксированный мазок нанести карболовоспиртовой раствор генцианового
фиолетового через полоску фильтровальной
бумаги. Через 1-2 мин ее снять, а краситель
слить.
Нанести раствор Люголя на 1-2 мин.
Обесцветить этиловым спиртом в течение
30-60 с до прекращения отхождения
фиолетовых струек красителя.
Промыть водой.
Докрасить водным раствором фуксина в
течение 1-2 мин, промыть водой, высушить и
микроскопировать.
Грамположительные бактерии окрашиваются
в темно-фиолетовый цвет,
грамотрицательные - в красный

13. Микроорганизмы, окрашенные различными методами

1. Туберкулезные микобактерии в молоке. 2. Пастереллы в крови
птиц. 3. Капсулы сибиреязвенных бацилл. 4. Споры
сибиреязвенных бацилл. 5. Споры столбнячных бацилл в культуре.
6. зерна волютина в дифтерийных коринебактериях.

15. КУЛЬТУРАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

16. Питательная среда

вещество или смесь веществ, применяемая для
культивирования микроорганизмов.
Питательные среды готовят из продуктов животного
или растительного происхождения. Состав сред
определяется метаболическими потребностями той или
иной группы бактерий. Все питательные среды должны
отвечать следующим требованиям:
содержать основные питательные вещества в
легкоусвояемой форме;
быть влажными, изотоничными и нетоксичными (для
исследуемых микробов);
иметь определенную вязкость;
иметь оптимальный показатель pH и окислительновосстановительный (редокс) потенциал;
обладать буферными свойствами;
быть стерильными;
по возможности быть прозрачными.

17. Классификация

По исходным компонентам:
По консистенции(степени плотности):
натуральные среды — готовят из продуктов животного и
растительного происхождения(мясо, костная и рыбная мука,
кормовые дрожжи, сгустки крови и др.)
синтетические среды — готовят из определённых химически
чистых органических и неорганических соединений, взятых в
точно указанных концентрациях и растворённых в дважды
дистиллированной воде.
жидкие
полужидкие
плотные
Плотные и полужидкие среды готовят из жидких, к которым
прибавляют агар-агар или желатин. Кроме того, в качестве
плотных сред применяют свёрнутую сыворотку крови,
свёрнутые яйца, картофель, среды с силикагелем.
Некоторые микроорганизмы используют желатин как
питательное вещество — при их росте среда
разжижается.

По составу:
простые: мясопептонный бульон(МПБ), мясопептонный
агар(МПА), питательный желатин,
сложные — готовят прибавляя к простым средам кровь,
сыворотку, углеводы и другие вещества.
По назначению:
основные — служат для культивирования большинства
патогенных микробов. МПБ, МПА, бульон и агар Хоттингера,
пептонная вода.
специальные — служат для выделения и выращивания
микроорганизмов, не растущих на простых средах.
селективные(избирательные) — служат для выделения
определённого вида микробов, росту которых они
благоприятствуют, задерживая или подавляя рост
сопутствующих микроорганизмов. Среды становятся
селективными при добавлении к ним определённых
антибиотиков, солей, изменения pH. Жидкие элективные
среды называют средами накопления.
дифференциально-диагностические — позволяют отличить
один вид микробов от другого по ферментативной активности.
консервирующие — предназначены для первичного посева и
транспортировки исследуемого материала.

19. Этапы:

II этап – Выделение чистой культуры
(откол колоний)
Изучение внешнего вида выращенных
колоний, их формы, величины и окраски.
Из подозрительных колоний делают
мазки и окрашивают их по Граму. Для
получения чистой культуры делают
петлей пересев подозрительной колонии
на косой агар, который ставят в
термостат.

III этап – Идентификация чистой культуры
Изучение
чистой
культуры
по
совокупности
морфологических,
культуральных,
биохимических
и
антигенных свойств. Для обнаружения
этих свойств делают пересев чистой
культуры
на
соответствующие
питательные среды, которые ставят в
термостат.

IV этап – Определение чувствительности
к антимикробным препаратам
Определяют свойства чистой культуры,
чувствительность
к
антибиотикам.
Окончательное определение вида чистой
культуры
производят при помощи
реакции агглютинации на стекле микроба
с иммунной сывороткой.

23. Биохимические исследования

24. Биопроба

Рис. Внутрибрюшинное заражение белой
мыши.
Силу возбудителя (вирулентность)
выражают в летальных дозах, т.е.
наименьшее число возбудителя,
вызывающего гибель 50% (LD 50 )
лабораторных животных.
Биопроба – заражение
лабораторных животных (белых
мышей, крыс, морских свинок,
голубей, кроликов, кур и др.) с
целью изучения патогенных и
вирулентных свойств бактерий,
подтверждения инфекции,
испытания лечебного действия
лекарственных препаратов.
1. Культуру бактерий в физиологическом растворе вводят
животным: подкожно,
внутримышечно, внутрибрюшинно
или др. способом
2. После гибели животных
вскрывают, определяют
патологические изменения во
внутренних органах и делают:
а)мазки из внутренних органов;
б)посев на питательные среды.

25. Серологические исследования

Гемолитическая сыворотка для
РСК
Реакция преципитации в геле
Реакция гемагглютинации (РГА)
Серологические исследования – исследование сыворотки
крови животных или человека на обнаружение специфических
антител (реакция преципитации - РП, реакция гемагглютинации
– РГА, РА, РСК, иммунофлюоресцентный метод и др.).

26. Аллергические исследования (кожно – аллергические пробы)

Рис. Кожно-аллергическая проба (реакция
Манту)
При внутрикожном введении
аллергена (продуктов
жизнедеятельности бактерий)
у больных возникает
повышенная чувствительность
(аллергия) на месте введения,
проявляющаяся в виде
покраснения, припухлости и
болезненности (например,
реакция Манту для выявления
туберкулеза. Внутрикожно
вводят туберкулин, реакцию
учитывают через 48 и 72 часа).

Вы можете изучить и скачать доклад-презентацию на тему МЕТОДЫ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ. Презентация на заданную тему содержит 26 слайдов. Для просмотра воспользуйтесь проигрывателем, если материал оказался полезным для Вас - поделитесь им с друзьями с помощью социальных кнопок и добавьте наш сайт презентаций в закладки!

Световая микроскопия Световая микроскопия предназначена для изучения окрашенных препаратов на предметных стеклах. С помощью световой микроскопии можно исследовать подвижность микроорганизмов. Для этого применяют метод висячей капли. Небольшую каплю микробной взвеси наносят на середину покровного стекла. Предметное стекло с углублением ("лункой"), края которого смазаны вазелином, осторожно накладывают на покровное стекло так, чтобы капля исследуемой жидкости оказалась в центре углубления, плотно прижимают к стеклу и быстро переворачивают кверху.

Фазово-контрастная микроскопия Фазово-контрастная микроскопия основана на интерференции света: прозрачные объекты, отличающиеся по показателю преломления от окружающей среды, выглядят либо как темные на светлом фоне (позитивный контраст), либо как светлые на темном фоне (негативный контраст). Фазово-контрастная микроскопия применяется для изучения живых микроорганизмов и клеток в культуре ткани.

Темнопольная микроскопия Темнопольная микроскопия основана на рассеянии света микроскопическими объектами Объекты при темнопольной микроскопии выглядят ярко светящимися на темном фоне. Применяется темнопольная микроскопия преимущественно для изучения спирохет и обнаружения (но не изучения морфологии) крупных вирусов.

Люминесцентная микроскопия В основе люминесцентной микроскопии лежит явление люминесценции, т. е. способности некоторых веществ светиться при облучении их коротковолновой (сине-фиолетовой) частью видимого света либо ультрафиолетовыми лучами с длиной волны, близкой к видимому свету. Люминесцентная микроскопия используется в диагностических целях для наблюдения живых или фиксированных микроорганизмов, окрашенных люминесцирующими красителями (флюорохромами) в очень больших разведениях, а также при выявлении различных антигенов и антител с помощью иммунофлюоресцентного метода

Поляризационная микроскопия Поляризационная микроскопия основана на явлении поляризации света и предназначена для выявления объектов, вращающих плоскость поляризации. Применяется в основном для изучения митоза.

Ультрафиолетовая микроскопия В основе ультрафиолетовой микроскопии лежит способность некоторых веществ (ДНК, РНК) поглощать ультрафиолетовые лучи. Она дает возможность наблюдать и количественно устанавливать распределение этих веществ в клетке без специальных методов окраски. В ультрафиолетовых микроскопах используется кварцевая оптика, пропускающая ультрафиолетовые лучи.

Электронная микроскопия Электронная микроскопия принципиально отличается от световой как устройством электронного микроскопа, так и его возможностями. Изображение в электронном микроскопе наблюдают на флюоресцирующем экране и фотографируют. Высокая разрешающая способность современных электронных микроскопов позволяет получить полезное увеличение в миллионы раз. С помощью электронного микроскопа изучают ультратонкое строение микроорганизмов и тканей, а также проводят иммунную электронную микроскопию.

Методы окраски мазков Простой метод. Фиксированный мазок окрасить каким-либо одним красителем, например фуксином водным (1-2 мин) или метиленовым синим (3-5 мин), промыть водой, высушить и микроскопировать. Сложные методы. Последовательно нанести на препарат определенные красители, различающиеся по химическому составу и цвету, протравы, спирты, кислоты и др. Это позволяет выявить определенные структуры клеток и дифференцировать одни виды микроорганизмов от других. Окрас методом Грама является сложным методом.

Окраска по методу Грама На фиксированный мазок нанести карболово-спиртовой раствор генцианового фиолетового через полоску фильтровальной бумаги. Через 1-2 мин ее снять, а краситель слить. Нанести раствор Люголя на 1-2 мин. Обесцветить этиловым спиртом в течение 30-60 с до прекращения отхождения фиолетовых струек красителя. Промыть водой. Докрасить водным раствором фуксина в течение 1-2 мин, промыть водой, высушить и микроскопировать. Грамположительные бактерии окрашиваются в темно-фиолетовый цвет, грамотрицательные - в красный

Микроорганизмы, окрашенные различными методами 1. Туберкулезные микобактерии в молоке. 2. Пастереллы в крови птиц. 3. Капсулы сибиреязвенных бацилл. 4. Споры сибиреязвенных бацилл. 5. Споры столбнячных бацилл в культуре. 6. зерна волютина в дифтерийных коринебактериях.

7. Бактерии рожи свиней в печени. 8. Клостридии эмкара в мазке из некротизированной мышцы. 9. Бруцеллы в смешанной культуре. 10. Стрептококки в молоке. 11. Кишечная палочка в мазке из агаровой культуры. 12. Азотбактерии. 7. Бактерии рожи свиней в печени. 8. Клостридии эмкара в мазке из некротизированной мышцы. 9. Бруцеллы в смешанной культуре. 10. Стрептококки в молоке. 11. Кишечная палочка в мазке из агаровой культуры. 12. Азотбактерии.

Питательная среда вещество или смесь веществ, применяемая для культивирования микроорганизмов. Питательные среды готовят из продуктов животного или растительного происхождения. Состав сред определяется метаболическими потребностями той или иной группы бактерий. Все питательные среды должны отвечать следующим требованиям: содержать основные питательные вещества в легкоусвояемой форме; быть влажными, изотоничными и нетоксичными (для исследуемых микробов); иметь определенную вязкость; иметь оптимальный показатель pH и окислительно-восстановительный (редокс) потенциал; обладать буферными свойствами; быть стерильными; по возможности быть прозрачными.

Классификация По исходным компонентам: натуральные среды — готовят из продуктов животного и растительного происхождения(мясо, костная и рыбная мука, кормовые дрожжи, сгустки крови и др.) синтетические среды — готовят из определённых химически чистых органических и неорганических соединений, взятых в точно указанных концентрациях и растворённых в дважды дистиллированной воде. По консистенции(степени плотности): жидкие полужидкие плотные Плотные и полужидкие среды готовят из жидких, к которым прибавляют агар-агар или желатин. Кроме того, в качестве плотных сред применяют свёрнутую сыворотку крови, свёрнутые яйца, картофель, среды с силикагелем. Некоторые микроорганизмы используют желатин как питательное вещество — при их росте среда разжижается.

По составу: По составу: простые: мясопептонный бульон(МПБ), мясопептонный агар(МПА), питательный желатин, сложные — готовят прибавляя к простым средам кровь, сыворотку, углеводы и другие вещества. По назначению: основные — служат для культивирования большинства патогенных микробов. МПБ, МПА, бульон и агар Хоттингера, пептонная вода. специальные — служат для выделения и выращивания микроорганизмов, не растущих на простых средах. селективные(избирательные) — служат для выделения определённого вида микробов, росту которых они благоприятствуют, задерживая или подавляя рост сопутствующих микроорганизмов. Среды становятся селективными при добавлении к ним определённых антибиотиков, солей, изменения pH. Жидкие элективные среды называют средами накопления. дифференциально-диагностические — позволяют отличить один вид микробов от другого по ферментативной активности. консервирующие — предназначены для первичного посева и транспортировки исследуемого материала.

II этап – Выделение чистой культуры (откол колоний) II этап – Выделение чистой культуры (откол колоний) Изучение внешнего вида выращенных колоний, их формы, величины и окраски. Из подозрительных колоний делают мазки и окрашивают их по Граму. Для получения чистой культуры делают петлей пересев подозрительной колонии на косой агар, который ставят в термостат.

III этап – Идентификация чистой культуры III этап – Идентификация чистой культуры Изучение чистой культуры по совокупности морфологических, культуральных, биохимических и антигенных свойств. Для обнаружения этих свойств делают пересев чистой культуры на соответствующие питательные среды, которые ставят в термостат.

IV этап – Определение чувствительности к антимикробным препаратам IV этап – Определение чувствительности к антимикробным препаратам Определяют свойства чистой культуры, чувствительность к антибиотикам. Окончательное определение вида чистой культуры производят при помощи реакции агглютинации на стекле микроба с иммунной сывороткой.

Биопроба Биопроба – заражение лабораторных животных (белых мышей, крыс, морских свинок, голубей, кроликов, кур и др.) с целью изучения патогенных и вирулентных свойств бактерий, подтверждения инфекции, испытания лечебного действия лекарственных препаратов. 1. Культуру бактерий в физиологи-ческом растворе вводят животным: подкожно, внутримышечно, внутрибрюшинно или др. способом 2. После гибели животных вскрывают, определяют патологические изменения во внутренних органах и делают: а)мазки из внутренних органов; б)посев на питательные среды.

Серологические исследования Серологические исследования – исследование сыворотки крови животных или человека на обнаружение специфических антител (реакция преципитации - РП, реакция гемагглютинации – РГА, РА, РСК, иммунофлюоресцентный метод и др.).

Аллергические исследования (кожно – аллергические пробы) При внутрикожном введении аллергена (продуктов жизнедеятельности бактерий) у больных возникает повышенная чувствительность (аллергия) на месте введения, проявляющаяся в виде покраснения, припухлости и болезненности (например, реакция Манту для выявления туберкулеза. Внутрикожно вводят туберкулин, реакцию учитывают через 48 и 72 часа).

Читайте также: