Технология приготовления гипериммунных сывороток реферат
Обновлено: 07.07.2024
Ключевые слова: гипериммунная сыворотка, иммуноглобулин, безвредность, антигенная активность, контроль качества.
Общие сведения
Гипериммунные сыворотки и получаемые из них иммуноглобулины предназначены для создания пассивного антибактериального, антивирусного или антитоксического иммунитета у животных и/или человека. Действие таких препаратов начинается быстро - сразу после введения, однако срок действия ограничен периодом их полувыведения из организма, который для гетерологичных препаратов составляет 14-15 суток.
С момента получения первых гипериммунных сывороток (конец 19 века) до настоящего времени разработано значительное количество сывороточных препаратов и иммуноглобулинов, моно- и поливалентных, применяемых с лечебной и с диагностической целью, как в медицине, так и в ветеринарии. Современное сывороточное производство, как отрасль биологической промышленности, представляет собой сложный, длительный и многогранный технологический процесс, включающей в себя: работу со штаммами микроорганизмов, отбор и подготовку животных-продуцентов, выбраковку иммунологически ареактивных животных, кормление, содержание, разработку схем иммунизации, забор крови, получение готового продукта, различные виды контроля, как на стадии подготовки животных и получения сырья, так и готового лекарственного средства.
- сыворотка гипериммунная против лептоспироза собак (содержит специфические антитела к лептоспирам серологических групп Canicola, Icterohaemorrhagiae и Grippotyphosa);
Технология производства.
На каждый препарат разработан и утвержден в установленном порядке технологический регламент в строгом соответствии, с которым, осуществляется изготовление каждой серии препарата.
Работу со штаммами микроорганизмов проводят согласно СТО на каждый штамм. Так, например, процесс получения системы посевных материалов любого вируса включает следующие этапы:
- приготовление соответствующей культуры;
- проведение пассажей вируса;
- получение вирусной суспензии;
- промежуточный контроль штамма вируса;
- лиофилизация или замораживание штамма вируса;
- контроль штамма вируса.
Вирусы выращивают на соответствующих перевиваемых культурах клеток, лептоспиры культивируют на жидкой сывороточной среде реакторным методом, хламидии наращивают на куриных эмбрионах.
После культивирования и контроля качества антигены подвергают очистки и концентрированию, а затем из каждого антигена готовят моновакцину с добавлением адъюванта, в качестве которого мы используем синтетический полимерный адъювант нового поколения, обеспечивающий сочетание безвредности вакцины с высокой антигенной активностью.
В качестве продуцентов, как принято во всём мире, мы используем клинически здоровых лошадей в возрасте от 2 до 15 лет, без признаков истощения, ожирения, переутомления, иммунологически реактивных, которым предварительно были проведены все вакцинации, обработки и диагностические исследования, согласно утвержденному плану противоэпизоотических мероприятий.
Перед каждым введением антигена производят измерение температуры тела лошади. Гипериммунизацию доноров проводят по соответствующим схемам, разработанным для каждого антигена.
Эксплуатация животных-продуцентов предусматривает взятие крови по определенной схеме, при этом чередуют циклы иммунизации и крововзятия у животных-доноров с последующим предоставлением животным отдыха. Кровь берут только от лошадей с нормальной температурой тела.
Кровь от свертывания предохраняют добавлением антикоагулянта, затем ее подвергают сепарации для отделения форменных элементов, плазму крови дефибринируют. Полученную сыворотку крови консервируют и отстаивают в течение 60 суток при температуре 2-8ºС, после чего, ее подвергают каскадной фильтрации на нитроцеллюлозных фильтрах с диаметром пор от 1,2 до 0,22 мкм.
Сыворотку, полученную от одного животного в течение месяца, объединяют в один пул.
При изготовлении иммуноглобулинов из полученной сыворотки методом осаждения выделяют гамма-глобулиновые фракции белков, которые в дальнейшем смешивают исходя из активности каждого компонента. Полученный поливалентный полуфабрикат подвергают стерилизующей фильтрации, устанавливают уровень рН, после чего проводят промежуточный контроль по показателям стерильность и специфическая активность. В случае положительного результата контроля полуфабрикат разливают на автоматической линии в потребительскую тару. Отдел контроля качества присваивает препарату номер серии и делает отбор образцов согласно ГОСТ с целью:
- контроля качества готовой продукции по всем показателям, заложенным в нормативную документацию;
- закладки арбитражных проб в архив;
- проведения испытаний стабильности препарата в процессе хранения.
Если контроль проходит положительно по всем параметрам, заложенным в нормативную документацию (СТО), серию препарата снабжают соответствующим паспортом качества и выпускают в реализацию. Если препарат не проходит контроль, вся серия подвергается выбраковке и утилизируется.
Контроль качества на предприятии-изготовителе.
В процессе производства сывороточных препаратов отдел контроля качества осуществляет контроль на следующих этапах:
- контроль стерильности, специфичности и активности вирусных (бактериальных) антигенов;
- контроль уровня антител у доноров при гипериммунизации;
- входной контроль сывороточных полуфабрикатов (по показателям стерильность и уровень специфических антител) при получении однородного пула сыворотки;
- промежуточный контроль полуфабриката препарата (по показателям стерильность, уровень водородных ионов и специфических антител);
- контроль готового продукта.
При этом здесь не указаны контрольные мероприятия, относящиеся ко всему производству в целом, такие как: входной контроль сырья и материалов, контроль производственной среды, контроль качества дезинфекции и пр.
Контроль готового продукта.
В таблице 1 представлен перечень показателей, по которым проводится контроль качества сывороточных препаратов.
Сыворотку получают методом цитрирования крови с последующим сепарированием (рис. 4.13) и дефибринированием плазмы. Сыворотку крови консервируют 0,5%-м раствором фенола и отстаивают в специальных емкостях в течение двух месяцев. Отстоявшуюся сыворотку фильтруют вначале через пластины Ф, а затем через стерилизующие пластины СФ. В последующем сыворотку расфасовывают во флаконы емкостью по 100 мл. Флаконы закрывают пробками и для герметичности их обкатывают алюминиевыми колпачками. На флаконы наносят этикетку и часть продукции сдают на контроль. Контроль сывороток проводят по общепринятым методикам.
Гипериммунные сыворотки, получаемые из крови путем удаления форменных элементов и фибрина, называются нативными в отличие от сывороток, подвергнутых дополнительной очистке и концентрации специальными методами.
Принципы очистки сывороток основаны на выделении из них активных белковых фракций, преимущественно гаммаглобулинов, и удаление балластных фракций, не являющихся носителями антител. Выделенные фракции растворяют в меньшем объеме растворителя по сравнению с исходным объемом, что позволяет препарат сконцентрировать и вводить в меньших дозах.
Необходимость в получении концентрированных сывороток связана, во-первых, со значительными объемами выпускаемых лечебных сывороток, исчисляемыми сотнями тонн. Для расфасовки сывороток требуется большое количество флаконов, пробок, колпачков, ящиков для упаковки. Кроме того, большие затраты уходят на транспортировку такого объема сывороточных препаратов. Во- вторых, ввиду недостаточно высокой активности отдельных сывороток, они вводятся животным в больших дозах: с профилактической целью — по 20—60 мл, с лечебной — по 40—120 мл. Уменьшения общего объема выпускаемых сывороток и повышения их активности можно достигнуть путем их очистки и концентрации иммуноглобулинов.
В производственных условиях очистку и концентрацию сывороток проводят чаще всего комбинированным способом, включающим стадии ферментативного гидролиза, прогрева ферментированных сывороток в кислой среде, солевого фракционирования и дополнительной очистки от неактивных белков и использования органических растворителей, сорбентов или дополнительного выдерживания сывороток при пониженных температурах. При такой обработке удаляется до 80—85% балластных белков. Кроме указанных методов очистки и концентрации сывороточных препаратов, гамма-глобулиновая фракция выделяется из сыворотки крови методом ультрафильтрации. Для этого используются ультрафильтрационные модули на полых волокнах, отличающихся пределом задержания по молекулярной массе: 5000, 15000, 50000, 100 000 дальтон. В соответствии с этим в биопромышленности используются модули УФУ-5, УФУ-15, УФУ-50, УФУ-100. Для задержания гамма-глобулинов лучше всего использовать УФУ-100, обеспечивающую практически полную задержку гамма-глобулинов на фильтре, так как молекулярная масса гамма-глобулинов составляет 160 000—900 000 дальтон
Лечебно-профилактические и диагностические иммунные сыворотки используют для профилактики инфекционных заболеваний, лечения больных, а также для серологических методов диагностики болезней.
Гипериммунные сыворотки представляют собой сыворотки крови животных, систематически иммунизированных бактериальными или вирусными антигенами, содержащие антитела, обладающие строго специфическим действием на бактериальные токсины, патогенные бактерии или вирусы, против которых иммунизировали животных.
Изготовление лечебно-профилактических гипериммунных сывороток представляет сложный, длительный и многогранный технологический процесс, в котором участвуют врачи-микробиологи, биотехнологи, биохимики, зооинженеры, рабочие- аппаратчики, работники электротехнической службы.
Технология производства гипериммунных сывороток объединяет ряд подразделений биопредприятий, главным из которых является сывороточный цех.
Структура сывороточного цеха включает:
1. Карантинное отделение
2 .Иммунизационные клиники
3. Антигенные лаборатории
4. Отделения получения, концентрирования и очистки сывороток. При создании гипериммунных сывороток требуются стерильные условия. Боксы должны обеспечиваться притоком стерильного воздуха. Рабочие места, стены, потолок, пол подвергаются влажной уборке с дезрастворами и УФ-облучения. Остальные помещения должны иметь приточно-вытяжную вентиляцию. Сжатый воздух, вакуум, холодная, горячая, дистиллированная, деминерализованная вода подаются по системе трубопроводов.
В сывороточном цехе должны иметься автоклавные, термостатные, рефрижераторные помещения, холодильники.
Основными задачами иммунизационных отделений являются:
1. Отбор животных
2 . Иммунологическая подготовка животных-продуцентов
3. Содержание и кормление животных
4. Иммунизация животных
6 .Ветеринарно-санитарное и зоотехническое обслуживание животных.
Для приготовления гипериммунных сывороток чаще всего используют лошадей и крупный рогатый скот (волы). При производстве сыворотки против рожи используют свиней.
Животные, применяемых для получения сывороток, завозят из стационарно благополучных по инфекционным болезням районов. Они должны быть клинически здоровыми, средней и выше средней упитанности, свободными от накожных паразитов.
На получение высокоэффективных лечебно-профилактических сывороток влияют:
-качество применяемых антигенов (в частности, их чистота, объем и концентрация);
-неспецифические раздражители и адьюванты;
-индивидуальные особенности животных-продуцентов (в частности, их способность к иммунобиологической перестройке при создании у них грундиммунитета, для чего необходим тщательный отбор животных-продуцентов);
-метод и схемы гипериммунизации;
-содержание и кормление животных в период их подготовки и
эксплуатации.
Существует прямая связь между качеством антигена, силой антигенного раздражения и уровнем накопления специфических антител в крови животных.
Для приготовления антигенов должны использоваться штаммы микроорганизмов, обладающие хорошо выраженными антигенными и иммуногенными свойствами.
Качество антигенов зависит от следующих факторов:
1. Чистота (неконтаминированность посторонней микрофлорой);
2. Степень очистки антигенов от балластных белков;
При изготовлении гипериммунных сывороток применяют антигены, специфическое действие которых усилено адъювантными веществами, в качестве которых используют гель гидроокиси алюминия, алюминиевые квасцы и др.
В практике производства антитоксических сывороток широко используют хлористый кальций, алюмокалиевые квасцы, адьюванты типа Фрейда, тапиока.
Контроль качества сывороточных препаратов.Контроль за качеством сывороток осуществляют на всех стадиях их изготовления.
После производственного контроля каждая серия сыворотки проверяется по физическим показателям (цвет и консистенция), на стерильность, безвредность, правильность объема расфасовки в разные емкости (ампулы или флаконы), герметичность их укупорки, качество этикетировки, маркировки и упаковки, а также специфическую активность после 20-дневного выдерживания при (37 ± 1) °С.
Проводят также контроль сывороточных препаратов на содержание белка, водородных ионов (рН), электрофоретическую чистоту и др. (апирогенность, остаточное содержание солей).
Сывороточные препараты должны быть стерильными (не контаминированы бактериями и вирусами), безвредными и высокоактивными специфическими препаратами.
Контроль бактериальной стерильности проводят по общепринятой методике высевами из препарата на питательные среды МПА, МПБ с глюкозой, МППБ под маслом, на агар Сабуро или среду Чапека для исключения грибковой микрофлоры.
Безвредность каждой серии сывороточных препаратов проверяют на морских свинках массой по 300 - 400 г (беременных свинок в опыт не берут), которым подкожно вводят 10 мл сыворотки (по 5 мл с обеих сторон); иногда безвредность проверяют на кроликах. Животные должны оставаться здоровыми и не иметь заметной местной и общей реакции в течение 10-дневного наблюдения.
Специфическую активность сывороточных препаратов определяют биологическим и серологическим методами. Для определения биологической активности используют восприимчивых лабораторных животных, эмбрионы птиц или культуры клеток. Разведения для РН на животных делают 1/15 М фосфатным буферным или физиологическим растворами при рН 7,4 (с 0,2 % желатина).
Серологические исследования проводят в соответствующих реакциях (РН, РДП в агаровом геле, РТГА, PGK, РИГА и др.) с использованием в качестве контроля заведомо известных позитивных и негативных сывороток (референс-препаратов).
Активность сывороточных препаратов определяют по сравнению со стандартными (эталонными) референс-препаратами. Для этого сыворотку с неизвестной активностью используют параллельно со стандартной сывороткой, а затем рассчитывают дозу испытуемой сыворотки, эквивалентную по эффекту единице активности стандарта. Это позволяет исключать влияние на результаты оценки таких факторов, как особенности тест-агентов, чувствительность подопытных животных, сезонность и др., т.к. эти факторы в равной степени будут влиять на результаты, получаемые со стандартной и испытуемой сыворотками, и активность испытуемой сыворотки относительно стандартной будет оставаться постоянной.
Дальнейшие интенсивные исследования в области стандартизации сывороточных препаратов, усиление требований к системам лабораторного и биологического контроля вновь разрабатываемых и модифицируемых препаратов, выделение этого направления в самостоятельную проблему несомненно будут способствовать еще большему улучшению качества лечебно-профилактических и диагностических сывороточных препаратов.
30.08.2019
Иммуносерум — важный инструмент в комплексе противоэпизоотических мероприятий
Препараты на основе гипериммунных сывороток способствуют созданию и поддержанию иммунитета молодняка вплоть до формирования собственного иммунного ответа к наиболее распространенным заболеваниям.
Применение производимой в России сыворотки Иммуносерум для лечения и профилактики вирусных пневмоэнтеритов телят позволяет снизить заболеваемость и гибель новорожденных телят от респираторных и кишечных инфекций, вызываемых вирусами.
Иммунодефицитные состояния связаны с неблагоприятными воздействиями окружающей среды, а также могут иметь наследственную природу. Дефициты В-клеточного звена, ответственного за гуморальный иммунный ответ, регистрируются практически у 90% новорожденных телят.
Отсутствие собственных антител в первые недели жизни телёнка в нормальных условиях компенсируется за счёт антител, содержащихся в молозиве. Однако распространённым явлением становится молозивный иммунодефицит.
Для достоверно эффективного лечения и профилактики инфекционных заболеваний предпочтительно введение гипериммунных сывороток, полученных с использованием сложных схем иммунизации, которые обеспечивают высокие защитные титры антител.
Гипериммунные сыворотки и их применение в ветеринарии
В отличие от вакцин, сыворотки уже содержат специфические антитела, и эффект от них продолжается 2–4 недели, в зависимости от титров иммуноглобулина в сыворотке.
Введение иммунных сывороток широко используется с целью плановой пассивной иммунизации телят в первые 12 часов жизни, что обеспечивает эффективную защиту организма телёнка от многих заболеваний вирусной и бактериальной этиологии.
Гипериммунные сыворотки — препараты для экстренной профилактики и терапии инфекционных заболеваний животных, и чем раньше начинается серотерапия, тем эффективнее будет результат.
Влияние вводимой сыворотки на иммунный ответ не ограничивается повышением титра антител. У животных с септическими инфекциями при введении сыворотки отмечается рост окислительной и фагоцитарной активности крови. Совместное использование сывороток и антимикробных препаратов обеспечивает существенное увеличение терапевтического эффекта.
Препарат Иммуносерум и способы его применения
При лечении телят сыворотку вводят внутримышечно в дозе 25–40 см3 в сочетании с антибиотиками 1–2 раза в сутки в течение 3–4 дней или внутривенно в той же дозе после 2–3-кратного разведения сыворотки стерильным физиологическим раствором 2–3 раза, с интервалом в один день. Одновременно сыворотку добавляют в той же дозе больным телятам в молозиво (молоко). С профилактической целью сыворотку применяют телёнку подкожно или внутримышечно в дозе 15–20 см3 через 2–3 часа после его рождения и повторно дважды, через 1 и 3 дня. Одновременно сыворотку добавляют в молозиво в те же сроки в дозе 25–30 см3.
Сыворотка Иммуносерум обеспечивает формирование пассивного иммунитета у телят, безвредна, обладает профилактическими и лечебными свойствами.
Организация производства препарата Иммуносерум. Наши дни
Иммуносерум уже более 10 лет присутствует на российском рынке, и можно с уверенностью сказать, что производство этой сыворотки соответствует мировым стандартам для данной группы ветеринарных препаратов.
Читайте также: