Реферат методы получения гамма глобулинов

Обновлено: 02.07.2024

Изобретение относится к вирусологии и может быть использовано в клинической и диагностической работе, а также при изготовлении антительных препаратов для иммунохимических реакций и пассивной иммунизации.

Чистота препаратов антител, получаемых при использовании этого метода, зависит от того, сколь большая часть гамма-глобулинов приходится на долю выделяемых антител, а также от степени предварительного удаления балластных веществ, главным образом липопрйтеинов.

Известен способ получения гамма-глобулина путем его фракционирования по методине Кона спиртовым осаждением на холоде 1.

Использование спиртового метода Кона получения гамма-глобулина ограничено трудоемкостью, длительностью процедуры, необходимостью большого количества холодильного оборудования. К тому же препараты, полученные из молока и молозива, содержат кроме гамма-глобулина альбумин, оС и -глобулины и молочные сахара-.

Однако известные способы не обеспечивают высокой степени очистки целевого продукта с сохранением необходимой степени специфической активности. Длительный и сложный технологический процесс включает открытые стадии и стадии, оказывающие денатурирующие воздействия на сывороточные белки, что является одной из причин снижения активности сывороток на 20-30%.,

Цель изобретения - повыщение степени очистки гамма-глобулина с сохранением высокой специфической активности.

. Указанная цель достигается тем, что согласно способу получения гамма-глобулина путем обработки биологической жидкости хлороформом с последующей очисткой, в биологическую жидкость перед обработкой хлороформом добавляют полиэтиленимин в конечной концентрации 0,5- 1,5%, далее обработку проводят полиакриловой кислотой в конечной концентрации 0,2-0,6%, причем конечная концентрация хлороформа составляет 5-10%.

Учитывая сложный состав таких биологических жидкостей, как сыворотка крови.

молоко, молозиво, желчь, феномен селективного выделения гамма-глобулина обработкой полиэтиленимином, хлороформом и полиакриловой кислотой можно объяснить следующим образом: с помощью полиэтиленимина удаляются из биологической жидкости альбумин и основная часть мелкомолекулярных белков (преальбумин, трансферин, постальбумин и др.), полиэтиленимин флоккулирует в этом случае белки с малым

суммарным зарядом; хлороформ денатурирует крупномолекулярные структурные компоненты, но с малым суммарным зарядом, в том числе липопротеины, глюкопротеины и в последующем переводит их в нерастворимое состояние; при обработке полиакриловой кислотой осаждаются альфа-2- макроглобулины и бета-глобулины, а также образовавщиеся на выщеуказанных этапах агрегаты денатурированного белка и остатки полиэтиленимина.

Селективное выделение гамма-глобулина возможно только вышеуказанной поочередной обработкой. Изменение очередности обработки не дает подобного эффекта, так как присутствие в биологической жидкости

мелкомолекулярных белков снижает эффективность удаления крупномолекулярных компонентов - липопротеинов, глюкопротеинов и др. После этой обработки в биологической жидкости, в основном, находятся крупномолекулярные белки, из которых в

дальнейшем с помощью полиакриловой кислоты удается получить гамма-глобулин.

Пример 1. К 100 мл сыворотки крови крупного рогатого скота добавляют равное количество дистиллированной воды, а затем по каплям добавляют 10 мл 10%-ного водного раствора полиэтиленимина, создав таким образом его 0,5%-ную конечную концентрацию в смеси. Смесь перемешивают до образования флоккул в течение 5-10 мин После образования флоккул в жидкость

добавляют 10 мл хлороформа, что составляет 5% его конечной концентрации в растворе, и ее энергично гемогенизируют в течение 5-10 мин. После центрифугирования в течение 20 мин при 3000 об./мин в надосадочную жидкость добавляют 10 мл 4%-ной полиакриловой кислоты, что составляет 0,2% ее конечной концентрации в растворе. Затем проводят центрифугирование при 3000 об./мин 20 мин. Для дальнейшего применения используют надосадочную жидкость. При необходимости получения препарата с более высокой удельной серологической активностью гамма-глобулин концентрируют известным образом, например путем обработки жидкости сульфатом аммония 40-50%-ного насыщения, сульфатом

в значительной степени исключает возможные при использовании обычной технологии перекрестные реакции, что особенно важно при диагностике инфекционных заболеваний.

Использование антительных препаратов, полученных предложенным способом.

даст возможность получения высокоактивных и специфических диагностикумов (в т. ч. конъюгированных ферментами, флюоресци нами, изотопами, эритроцитами, стафилококками) при незначительных потерях дорогостоящих маркеров и других реактивов, используемых при конъюгации.

Реферат патента 1984 года Способ получения гамма-глобулина

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГАММАГЛОБУЛИНА путем обработки биологической жидкости хлороформом с последующей очисткой, отличающийся тем, что, с целью повышения степени очистки целевого продукта с сохранением степени специфической активности, в биологическую жидкость перед обработкой хлороформом добавляют полиэтиленимин в конечной концентрации 0,5-1,5%, далее обработку проводят полиакриловой кислотой в конечной концентрации 0,2-0,6%, причем конечная концентрация хлороформа составляет 5-10%.

Моноклональные антитела (МКА) - это гомогенные (однотипные) антитела, синтезируемые гибридомными клетками, сочетающими способность синтеза специфических иммуноглобулинов одного эпитопа с неограниченной пролиферацией (размножением).

МКА широко применяются для диагностики инфекционных болезней. На их основе разработаны тест-системы для иммуноферментного анализа (ИФА) и РИФ.

Моноклональные антитела впервые были получены в 1975 г. английскими учёными Келлером Г. и Милштейном Ц.

Рис. 17. Схема получения моноклональных антител

(АОК – антителообразующие клетки, Пл – плазмоцитомы)

В настоящее время предложено несколько модификаций метода получения гибридом, но все они сводятся в целом к проведению следующих этапов:

- слияние иммунных лимфоцитов животных с миеломными клетками;

- селекция гибридных клеток;

- наращивание клонов и скрининг их на способность продуцировать специфические антитела;

- клонирование гибридом и наращивание клонов гибридом в культуре и организме сингенных мышей;

- изучение свойств полученных МКА.

Российскими учеными (Телер Л.А., Погуляева Л.В., Ходун Л.М., 1996) получены моноклональные антитела, специфично взаимодействующие с поверхностными антигенами микобактерий туберкулёза бычьего вида, и на их основе разработана иммуноферментная тест-система для проведения идентификации микобактерий туберкулёза бычьего вида и дифференциации их от микобактерий человеческого вида и атипичных, медленно растущих микобактерий.

4. Общие сведения о гамма-глобулинах и способы их получениия

При диагностике ряда инфекционных болезней используются глобулиновые препараты, которые получают из сыворотки крови гипериммунизированных животных путем удаления из нее балластных белков, не участвующих в иммунном ответе организма.

Кровь состоит из жидкой части - плазмы и форменных элементов: эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов.

Плазма крови, лишенная белка фибриногена и форменных элементов, называется сывороткой крови.

Белки плазмы, которые остались после удаления фибриногена, называются сывороточными белками. Известно около 100 белковых компонентов плазмы. Условно их можно разделить на три группы:

Глобулины сыворотки крови делятся на три фракции: α, β, γ- глобулины. Каждая фракция, в свою очередь, делится на подфракции. Разделение основано на их различной электрофоретической подвижности.

Альфа-глобулины (α-глобулин) - фракция глобулинов сыворотки крови, состоящая из гликопротеидов и липопротеидов, обладающая наибольшей электрофоретической подвижностью (в сравнении с другими фракциями); участвует в транспорте липидов.

Бета-глобулины (β-глобулин) - фракция глобулинов сыворотки крови, состоящая из гликопротеидов, липопротеидов и металлопротеидов (трансферрин, церулоплазмин), обладающая средней между фракциями альфа- и гамма-глобулинов электрофоретической подвижностью; участвует в транспорте комплемента и некоторых антител.

Гамма-глобулин (γ-глобулин) - фракция глобулинов сыворотки крови, которая выполняет функцию защитных антител в организме и обладает наименьшей электрофоретической подвижностью.

Впервые выделены из сыворотки крови Тизелиусом А. в 1937 г.

Из белковых фракций сыворотки крови гамма-глобулиновая является самой неоднородной (имеется более 16 подфракций). Однако все подфракции гамма-глобулина очень близки по физико-химическим свой-ствам и электрофоретической подвижности.

По форме частиц гамма-глобулин относится к глобулярным белкам, форма которых приближается к сферической (рис. 18).

(микроорганизм в центре, вокруг него - иммуноглобулины)

Содержание гамма-глобулина в сыворотке крови животных различно и непостоянно. Особенно изменяется содержание гамма-глобулинов и белкового спектра сыворотки крови, в целом, при различных инфекционных заболеваниях. Этот фактор является одним из диагностических признаков. Значительно увеличивается содержание гамма-глобулина при иммунизации животных под воздействием введенного антигена.

У молодых особей содержание гамма-глобулина значительно ниже, чем у взрослых, а у новорожденных он отсутствует совсем.

Так, например, в плазме новорождённого жеребёнка содержится 3,7 % белка, из них альбумина – 65 %, альфа-глобулина –32 %, бета-глобулина –3 %, а гамма-глобулина –0 %.

Гамма-глобулины у поросят попадают в сыворотку крови только из молока матери. Через 3 недели после рождения поросята начинают самостоятельно продуцировать сывороточный гамма-глобулин.

Таблица 2. Содержание белковых фракций в сыворотке крови

Известно пять классов гамма-глобулинов (иммуноглобулинов):

1. Jg G - доминируют в сыворотке крови при инфекционных болезнях. Относятся к поздним микроглобулинам. Молекулярная масса - 150 тыс. Д, период полужизни – 12-20 дней. На долю Jg G от всех классов иммуноглобулинов приходится 85%. В сыворотке крови Jg G - 10-25%. Особенно активны против грамотрицательных бактерий и токсинов. Единственные иммуноглобулины, проходящие через плаценту.

2. Jg M - при заражении появляются в сыворотке крови первыми, на ранних стадиях иммунного ответа. Относятся к ранним макроглобулинам. Молекулярная масса - 970 тыс. Д, период полужизни – 5 дней. В сыворотке крови животных - 6%. Эволюционно старейшие антитела, лизируют антигены совместно с комплементом.

3. Jg А - сывороточный и секреторный. Основной класс антител в секретах. Секреторный Jg А препятствует проникновению возбудителей инфекционных болезней в организм через слизистые оболочки, ингибирует колонизацию эпителия бактериями. Обеспечивает первую линию защиты. Период полужизни – 6 дней, в сыворотке крови 10-13%.

4. Jg D - найдены у людей, больных красной волчанкой, дифтерией, ревматизмом. Связываются с В-лимфоцитами, выполняет регулирующую функцию. В сыворотке крови до 0, 03%. Короткоживущие иммуноглобулины.

5. Jg E (реагины) - обнаруживают при аллергиях. Связываются с тучными клетками и базофилами, стимулируют их дегрануляцию. В сыворотке крови до 0, 001%.

Иммуноглобулины по химическому составу относятся к гликопротеидам с молекулярной массой 150-900 кД, содержат около 10 % углеводов, состоят из 18 аминокислот (рис. 19).

Рис. 19. Строение молекулы Jg G

Электрофоретически гомогенная масса гамма-глобулина сыворотки крови обычно состоит из JgG, JgЕ, JgM, поэтому ее называют общей гаммаглобулиновой или иммуноглобулиновой фракцией сыворотки крови.

Установление связи антител с гамма-глобулиновой фракцией сыворотки кpoви послужило стимулом для разработки методов её выделения с целью применения в клинической практике и изучения физико-химических свойств.

К настоящему времени известно большое число различных методов фракционирования сывороточных белков - химических, физических и физико-химических.

К химическим и физико-химическим методам относятся:

- высаливание нейтральными солями - сернокислым аммонием, хлористым натрием, сернокислым натрием и некоторыми другими;

- разведение с изменением ионной силы раствора;

- фракционирование при помощи органических осадителей - этилового и метилового спирта, ацетона, эфира;

- осаждение при помощи катионов - неорганических и органических (риванол) металлов;

- осаждение при помощи анионов;

- применение ионообменных смол.

К физическим методам относятся:

- ультрафильтрация через полупроницаемые мембраны;

- разделение белков методом хроматографии;

- электрофоретическое разделение - метод препаративного и квекционного электрофореза.

Существуют также целый ряд комбинированных методов получения иммуноглобулиновых препаратов.

Наиболее простым в применении и недорогим является риваноловый метод получения гамма-глобулина

Риванол впервые был применен для фракционирования сывороточных белков чехословацким исследователем Горжейши в 1952 г. Им было установлено, что при добавлении к сыворотке крови водно-риванолового раствора происходит осаждение альбуминов, бета- и альфа-глобулинов. Основная масса гамма-глобулинов остается в фильтрате.

Выделение гамма-глобулина этим методом проводится следующим образом. К одному объёму сыворотки крови постепенно добавляется три объёма раствора риванола в 0,4 %-ной концентрации, в результате чего в осадок выпадают альбумины и основная масса альфа- и бета-глобулинов. Гамма-глобулин при таких условиях остается в растворе.

Кроме гамма-глобулина в растворе остается риванол, который удаляется активированным углем и фильтрацией через бумажные фильтры в воронках. При этом добавляется 10 г угля на 100 мл раствора. Смесь тщательно перемешивается. Полученный прозрачный раствор гамма-глобулина подвергают лиофильному высушиванию.

Технология получения гамма-глобулина риваноловым методом занимает мало времени, не требует дорогостоящего оборудования, однако имеет некоторые недостатки:

1. Полученная фракция гамма-глобулина содержит примеси бета- и альфа-глобулинов.

2. Необходимо очищать фильтрат от риванола активированным углем с последующей фильтрацией.

3. Необходимо высушивать большие объемы раствора гамма-глобулина, т.к. сыворотка, на первом этапе получения гамма-глобулина, разводится раствором риванола в четыре раза.

4. Невозможно получить другие фракции белков сыворотки, т.к. под воздействием риванола выпавшие в осадок белки денатурируют.

Все вышеизложенное заставило исследователей проводить усовершенствование риванолового метода и предлагать для практики его различные модификации (рис. 20).

Начало применения препаратов из крови человека для профилактики и лечения инфекционных болезней относится к 1910 г., когда исследователи из Института Пастера во Франции M. Nicolle и E. Consei предложили для предупреждения тифа у детей использовать сыворотку крови реконвалесцентов [1], а в 1918 г. M. Nicolle и E. Consei, а также D.L. Richardson и H. Connor независимо друг от друга успешно применили сыворотку детей, выздоровевших после перенесенной кори, для профилактики этого заболевания [2]. В СССР это направление профилактики было начато в 1925 г. [3]. Гомологичные сыворотки обладали профилактической эффективностью в отношении ряда инфекционных заболеваний, однако было много проблем с их производством и применением. Себестоимость получаемой сыворотки была высокой, в то же время пациентам требовалось введение больших доз препарата. Так, например, для профилактики кори необходимо было вводить детям в возрасте до 2 лет от 15 до 40 мл сыворотки, процедура была болезненной и небезопасной из-за высокой вероятности развития абсцессов в месте введения [4]. Практическому здравоохранению требовались более дешевые, безопасные и эффективные иммунобиологические лекарственные препараты.

В СССР в 1948 г. исследователями Московского института эпидемиологии и бактериологии Н.В. Холчевым и Л.И. Колесниковой метод получения гамма-глобулина из сыворотки, разработанный Коном и сотрудниками, был доработан, вместо центрифугирования осадка предложен метод фильтрации [6]. Методика была принята к использованию для производства гамма-глобулина с целью профилактики кори [7]. Препарат, содержащий не менее 18% белка, для предупреждения кори вводился внутримышечно в объеме 3,0 мл (соответствовало 60 мл проти-вокоревой сыворотки) [8].

В 1952 г. военный врач O. Вruton (США) успешно использовал фракцию гамма-глобулина человека, полученную Коном и сотрудниками [9], в форме внутримышечной инъекции для профилактики хронических болезней легких и других бактериальных инфекций у детей с крайне низким содержанием иммуноглобулинов, выявленным методом электрофореза образцов крови [10]. В 1952–1953 гг. гамма-глобулин был внесен в медицинские стандарты США [11]. Таким образом, было положено начало широкого применения препаратов иммуноглобулина человека нормального (ИГЧН) в заместительной терапии первичных и некоторых вторичных иммунодефицитов (отсутствия или снижения уровня выработки антител), а также иммуномодулирующей терапии. В середине ХХ в. гамма-глобулин активно применяли для профилактики кори, краснухи, ветряной оспы, полиомиелита, эпидемического паротита и инфекционного гепатита [12–15].

Менее токсичное подкожное введение препаратов ИГЧН практиковалось реже, т.к. этот способ введения препарата был ограничен по объему (как правило, не более 5 мл за одну инъекцию), что не позволяло использовать его в качестве средства для иммунозаместительной терапии [19].

В отчете экспертного комитета по применению иммуноглобулина при ВОЗ [16] отмечено, что начиная с 1945 г., когда гамма-глобулин начали применять для профилактики кори и инфекционного гепатита, сфера его применения значительно расширилась и получила развитие в двух направлениях: профилактика некоторых вирусных болезней (корь, инфекционный гепатит и краснуха); лечение синдромов дефицита антител для предотвращения рекуррентных бактериальных инфекций. Тем не менее в отчете было указано, что нормативная база, регламентирующая применение гамма-глобулина, должна быть пересмотрена, т.к. развитие и широкое применение безопасных и эффективных вакцин снижает необходимость пассивной иммунизации и, соответственно, применения гамма-глобулина.

Авторы отчета на основании результатов многочисленных клинических данных (в т.ч. с участием воинских контингентов в различных странах) признали, что ИГЧН не эффективен для профилактики и лечения гриппа и других респираторных вирусных инфекций.

Согласно современным требованиям ВОЗ, опыту практического применения препаратов, внутримышечное введение ИГЧН ограничено коротким перечнем показаний: профилактика гепатита А, а также некоторых специфических инфекций (например, кори) [20, 21]. Показана эффективность таких препаратов для предупреждения бактериальных инфекций у детей с наследственной агаммаглобулинемией [22].

В инструкциях по применению отечественных препаратов указаны следующие показания: профилактика гепатита А, профилактика кори, профилактика и лечение гриппа, профилактика коклюша, профилактика менингококковой инфекции, профилактика полиомиелита, лечение гипо- и агаммаглобулинемии у детей, повышение резистентности организма в периоде реконвалесценции острых инфекционных заболеваний с затяжным течением и при хронических пневмониях. При этом перечень показаний в инструкциях по применению различных препаратов значительно различается и требует пересмотра. Результаты многочисленных клинических исследований подтвердили неэффективность применения иммуноглобулина для профилактики и лечения гриппа [24], а также внутримышечного введения препаратов для заместительной терапии и иммуномодуляции [21].

В тексте документа указано противопоказание к применению ИГЧН – дефицит IgA, т.к. терапия иммуноглобулином может вызывать индукцию антител против IgA и как следствие – нежелательную реакцию. Тем не менее применение иммуноглобулина может быть целесообразным под наблюдением специалиста в случае комбинированного дефицита IgA-IgG2, если препарат содержит низкий уровень IgA.

В последние годы выпускаются препараты ИГЧН для внутривенного введения с высокой чистотой, полной активностью Fc-фрагмента, высокой степенью вирусной безопасности, достигаемой многоступенчатым процессом производства. В то же время следует констатировать, что пока не разработаны технологические приемы, позволяющие гарантировать вирусную безопасность крови на 100%. Достигнута только максимальная степень вирусной безопасности [22, 29].

Терапевтическая эффективность иммуноглобулинов для внутривенного введения при отдельной патологии по мере накопления опыта их применения периодически переоценивается. Использование стандартных иммуноглобулинов для внутривенного введения, по данным многоцентрового исследования, не снижало смертности у кардиохирургических больных с тяжелой послеоперационной системной воспалительной реакцией, считавшейся показанием к их применению. Многолетняя клиническая практика показала, что только введение препаратов, обогащенных иммуноглобулинами классов M и A, повышает выживаемость пациентов при лечении сепсиса [22].

Современные технологии получения препаратов иммуноглобулина с высокой степенью очистки позволили за последнее десятилетие вернуться к практике их подкожного введения. Применение иммуноглобулина в виде подкожных инфузий было обсуждено в рекомендациях ВОЗ в 2007 г. [33]. Данный способ введения ИГЧН эксперты ВОЗ рекомендовали при лечении первичных иммунодефицитов. На основании многолетней практики применения подкожного введения ИГЧН практикующие врачи и международные органы контроля Европейского союза в нормативных документах [20, 34, 35] указывают, что подкожное введение предпочтительно, т.к. может проводиться в домашних условиях, позволяет поддерживать постоянный уровень IgG в сыворотке (в отличие от снижения концентрации IgG при внутривенном введении), уменьшает вероятность возникновения нежелательных реакций и переноса трансмиссивных инфекционных агентов. Такой способ введения значительно комфортнее для пациентов, зачастую подходит даже пациентам, у которых были ранее отмечены нежелательные реакции при внутривенном введении иммуноглобулинов, и позволяет врачам и пациентам проводить заместительную терапию без премедикации кортикостероидами или антигистаминными препаратами. Кроме того, подкожное применение иммуноглобулина комфортно как для детей и взрослых, так и для пожилых пациентов и, что немаловажно, значительно снижает стоимость лечения. Продолжительность инфузии при подкожном введении препаратов иммуноглобулина ограничивается одним часом или менее, в то время как внутривенные инфузии продолжаются в течение нескольких часов. В настоящее время ИГЧН для подкожного введения в основном используются для лечения пациентов с низким уровнем IgA, с положительными серологическими воспалительными маркерами, флебитами, заболеваниями почек и другой патологией, создающей условия для осложнения при внутривенном введении иммуноглобулинов [36]. Целью заместительной терапии служит снижение частоты и тяжести бактериальных инфекций, предотвращение развития необратимых и тяжелых осложнений, а также жизнеугрожающих инфекций, что возможно при достижении близких к нормальным претрансфузионных уровней IgG [37].

Спрос на препараты иммуноглобулина человека растет по мере появления новых показаний. Так, на Европейском конгрессе иммунологов (Германия, 2014 г) было отмечено, что 42% мирового потребления ИГЧН связано с неврологическими показаниями, 18% – с гематоонкологическими болезнями [38, 40]. В 33% случаев препараты ИГЧН применяются не по показаниям. В настоящее время проводятся многочисленные клинические исследования по применению ИГЧН для лечения дерматомиозитов/полимиозитов, хронического идиопатического и комплексного регионального болевого синдрома, тяжелой диабетической полинейропатии, глиобластомы, нейробластомы, аутоиммунной вегетативной ганглиопатии, аутоиммунных нейропсихиатрических нарушений у детей, ассоциированных со стрептококковой инфекцией, ВИЧ-ассоциированной миелопатии, анемии, вызванной парвовирусом B19 и/или кардиомиопатией, спинально-церебеллярной атаксии типа 3, острого ишемического инсульта, миастении гравис, синдромаЛамберта–Итона, токсического эпидермального некролиза, системной красной волчанки и волчаночного нефрита, идиопатической острой и рефрактерной солнечной крапивницы, при трансплантации органов, для предотвращения опосредованного антителами отторжения трансплантированного органа, септического шока, беременных женщин с первичной цитомегаловирусной инфекцией, привычных выкидышей, для удаления антигенов лейкоцитов человека [38].

Согласно действующим нормативным документам Минздрава России и Роспотребнадзора (приказы об утверждении стандартов оказания медицинской помощи различного уровня, санитарно-эпидемиологические правила и методические указания по профилактике отдельных инфекционных болезней), препараты ИГЧН без указания способа введения рекомендовано применять детям и взрослым для профилактики вирусных гепатитов В, дельта, ни А, ни В с парентеральным механизмом передачи возбудителя, профилактики и лечения гриппа и острых респираторных заболеваний, профилактики и лечения эпидемического паротита; детям – для лечения ветряной оспы, инфекционного мононуклеоза, цитомегаловирусной инфекции, геморрагической лихорадки с почечным синдромом, генерализованной формы менингококковой инфекции, шигеллеза, сальмонеллеза, острых кишечных инфекций и пищевых отравлений, псевдотуберкулеза, иерсиниоза, кампилобактериоза, хронических панкреатитов, гастроэнтеритов вирусной этиологии, хронического активного гепатита (аутоиммунного), цирроза печени, болезни Крона, язвенного (хронического) илеоколита (неспецифического язвенного колита), эпилепсии, тяжелой миастении, осложненной кризом, вирусного энцефалита, миелита, острого рассеянного энцефаломиелита, юношеского артрита с системным началом; взрослым – для лечения полиневропатии с системными поражениями соединительной ткани, узелкового полиартрита и родственных состояний, других некротизирующих васкулопатий и других системных поражений соединительной ткани, при системном склерозе, абсцессе, фурункуле, карбункуле кожи, при искусственном прерывании беременности, при гипертензии со значительной протеинурией, вызванной беременностью, больным с неуточненными эффектами излучения, острым промиелоцитарным лейкозом, наследственным дефицитом фактора VIII, наследственным дефицитом фактора IX, отдельными нарушениями, вовлекающими иммунный механизм.

Заявка

ВСЕСОЮЗНЫЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ГЕНЕТИКИ И СЕЛЕКЦИИ ПРОМЫШЛЕННЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ

ТЕЛЬНОВА МАРИНА АЛЕКСЕЕВНА, КОТОВА ТАТЬЯНА СЕМЕНОВНА, БЕЛЯЕВ СЕРГЕЙ ВАСИЛЬЕВИЧ, СТЕПАНОВ ВАЛЕНТИН МИХАЙЛОВИЧ

МПК / Метки

Код ссылки

Способ нейтрализации овчин кубового крашения после обработки формалиновым раствором и установка для выполнения способа

Номер патента: 126216

. герметически закрывающиеся дверцы б.Внутри камеры 2 монтированы два ленточных транспортера б, расположенных один над другим, и имеющих приводные валики 7 и натяжные валики 8, регулируемые при помощи винтов 9 и маховичков 10. Свободно вращающиеся ролики 11 предохраняют транспортерные ленты б от провисания,126216Под транспортерами и камерой расположен баллон 12 с аммиаком, соединенный трубопроводом с испарителем И, монтированным в камере 2. Количество подаваемых в камеру паров аммиака регулируется вентилем 14, а для удаления паров аммиака из камеры служит трубопровод 15, поперечное сечение которого регулируется заслонкой 1 б, поворачиваемой рукояткой 17. Зазоры в камере 2 спереди установки прикрываются поворотными шиберами 18.Для.

Способ осаждения нуклеиновых кислот из растворов, содержащих фосфатный буфер

Номер патента: 1161511

. М Формиатным буфером, имев-щнм рН 2,9-3,0, до значения рН раствора 3,5-3,6.Качество получаемых согласно предлагаемому способу препаратов ДНК и РНК проверяли хроматографическими и спектроскопическими методами. Для титрования используют формиатный буфер, имеющий рН 2,9-3,0.Нижняя граница рН буФера 2,9 подобрана с таким расчетом, чтобы приподкисленны, которое осуществляетсяпутем добавления формиатного буферак раствору нуклеиновой кислоты приодновременном перемешивании с.помощью магнитной мешалки, не произошла денатурация биополимера. При значении рН, которое имеет используемыйдля титрования буфер, денатурацнядезоксирибонуклеиновой кислоты, например, протекает за десятки секунд.Но поскольку перемешивание раствораи выравнивание рй происходит.

Способ получения водонерастворимых протеиновых препаратов

Номер патента: 576959

. ферментов целесообразно добавлять стабилизаторы. В качестве таковых применяют полиэтиленгликоли и неионный смачиватель для ослабления денатурации на поверхности, а также известные сульфогидрильные реагенты или ионы металлов для специальных ферментов, рН-метром поддерживают оптимальное для соответствующей связи значение рН 2 - 9, преиму. щественно 5 - 7. При использовании пенициллинаци. лазы целесообразно значение рН 5,7 - о,8. Причем для постоянного поддержания рН добавляют неорганические (раствор едкого натра) или органичес. кие (органические амины) основания. О ходе реакции судят по количеству основания, необходимого для поддержания постоянного рН, При комнатной температуре для завершения реакции необходимо примерно 16 ч.

Способвыделения фермента тромболитического действия

Номер патента: 584034

. 10 л исходной мочи подщелачивают 1 - 3 М раствором КОН или ИаОН до рН 7,5, Выпавший осадок отделяют, а полученный фильтрат подкисляют до рН 35 1 - 3 М раствором НС 1 и пропускают через колонку 5,5 р,20 см, содержащую около 300 мл набухшего в воде анионита ФАФ в хлор - форме. Обесцвеченный раствор с колонки ФАФ пропускают для сорбции урокиназы через колонку 4,5)(10 см, содержащую около 200 мл набухшего в воде карбоксильного катионита КМТ в водородной форме. Скорость пропускания раствора через ФАФ и КМТ составляет 100 мл/ч см. По окончании сорбции смолу КМТ промывают 3 л 0,05 М фосфатного буфера с рН 5,9 со скоростью 50 мл/ч см. После этого проводят элюцию урокиназы при 5 - 10 С с фосфатным буфером с рН 7,0 со скоростью 20 мл/ч см.

Способ получения эритроцитарного диагностикума для выявления специфических антител (его варианты)

Номер патента: 1079247

. эритро. цитарного диагностикума проводили в условиях примера 8, только к смеси гемисукционата атропина и Формалинизированных эритроцитов прибавляли 0,08 ммоль солянокислого 1-этил- -(3-диметиламинопропил) карбодиимида в 0,5 мл дистиллированной воды, при этом рН 6 реакционной смеси поддерживали прибавлением по каплям 0,5 н.раствора НС 1. Далее синтез эритроцитарного диагностикума проводили в условиях примера 8.П р и м е р 11.0,62 ммоль гемисукцината атропина растворяли в 3 мл дистиллированной воды, устанавливали рН 5,8, прибавляя по каплям 2,0 н.МаОН, и при перемешивании полученный раствор добавляли к 0,5 мл 503-ной суспензии формалинизированных эритроцитов барана на физиологическом растворе.0,56 ммоль.

Читайте также: