Окраска по бурри гинсу кратко

Обновлено: 05.07.2024

Некоторые виды бактерий продуцируют слизистое вещество, которое, концентрируясь вокруг тела микробной клетки, образует капсулу. При обычных методах окраски капсулы ос­таются бесцветными. Это позволяет применять простые мето­ды окраски для выявления капсульных микроорганизмов в мазках из органов и тканевой жидкости.

При окраске метиленовым синим клетки тканей и тела бактерий окрашиваются в голубой цвет, вокруг бактерий со­храняется бесцветная зона – капсула, которая выявляется на темном фоне.

Для окрашивания вещества капсул применяют специальные способы окраски.

6.6.1. Выявление капсул по способу Бурри

На узкий конец предметного стекла наносят каплю туши (рецепт 27) в бактериологическую петлю исследуемого мате­риала. Смесь перемешивают тщательно петлей, делают мазок, как мазок крови, высушивают на воздухе и, не фиксируя, микроскопируют с иммерсионной системой. Способом Бурри можно пользоваться не только для выявления капсул микро­бов, но и для обнаружения в исследуемом материале спирохет. Фон препарата окрашен в темно-дымчатый цвет, микробные тела и их капсулы не окрашиваются тушью и остаются бес­цветными, вследствие чего этот способ получил название негативного.

6.6.2. Окраска капсул по способу Бурри–Гинса

  • Приготавливают негативно окрашенный по способу Бурри препарат;
  • фиксируют любым химическим способом: метиловым спир­том, смесью Никифорова или другими смесями;
  • промывают водой;
  • окрашивают карболовым фуксином Циля, разведенным 1:3, в течение 3–5 мин (рец. 17);
  • препарат промывают водой, высушивают и микроскопируют с иммерсионной системой.

При микроскопии на темном фоне препарата контрастно выделяются неокрашенные капсулы, внутри которых находятся бактерии ярко-малинового цвета.

Микробиология

— наука, изучающая организмы, неразличимые (невидимые) невооруженным глазом, которые за свои микроскопические размеры называют микроорганизмами (микробы).

Предметом изучения микробиологии

является их морфология, физиология, генетика, систематика, экология и взаимоотношения с другими формами жизни. В таксономическом отношении микроорганизмы очень разнообразны.

Метод окраски по Бурри-Гинсу

Метод Бурри-Гинса используется для окраски капсульных бактерий и основан на том, что капсула не воспринимает красители. Капсулу выявляют негативным контрастированием фона по Бурри. Для этого черную тушь смешивают в культурой и высушивают. После этого проводят фиксацию в пламени горелки, окрашивают тела микробных клеток по Гинсу - водным фуксином в течение 1 минуты и промывают водой 5-10 секунд.

NB! В результате на темном фоне хорошо видна бесцветная капсула и красные тела микробов.


Klebsiella pneumonia. Мазок из чистой культуры. Окраска по Бурри-Гинсу.

На середину предметного стекла наносят каплю черной туши и смешивают ее с помощью петли с каплей культуры капсульных бактерий.

Краем другого предметного стекла делают мазок по типу кровяного. Мазок сушат на воздухе и фиксируют в пламени горелки.

Окрашивают 5 мин карболовым фуксином, разведенным водой 1:3.

Осторожно промывают водой, высушивают.

Окраска по Гинесу-Бурри. Метод выявления капсулы по Бурри-Гинса. Для обнаружения КАПСУЛ бактерий, плохо воспринимающих красители, используют метод БУРРИ–ГИНСА: в каплю туши, разведенной в 10 раз водой, вносят исследуемые бактерии и равномерно распределяют их петлей по предметному стеклу; мазок высушивают, фиксируют (наносят 2–3 капли спирта и сжигают его на стекле), окрашивают в течение 3–5 мин фуксином Пфейффера, промывают водой, высушивают; на темном фоне препарата капсулы видны в виде светлых ореолов вокруг красных бактерий.

18. Морфология кокков и заболевания, вызываемые ими. Кокки (гр. coccus — ягода, лат. coccus — шаровидный). Кокки бывают сферические, эллипсоидные, бобовидные и ланцетовидные. После деления кокки по-разному располагаются относительно друг друга, что послужило основанием подразделить их на отдельные группы.

Микрококки (гр. micrococcus — малый) — беспорядочно расположенные одиночные или парные клетки. В основном заселяют объекты внешней среды, являются сапрофитами. Заболевания не вызывают, (грам+,грам-)

Диплококки (гр. diplococcus — двойной) — попарно расположенные клетки как результат деления в одной плоскости и сохранение связи между дочерними клетками. К ним относятся возбудитель диплококковой септицемии телят, менингококк.

А) в виде пламени свечи (грам+) пневмококки б) в виде кофейных зерен (грам-) гонорея, менингит Стрептококки (гр. streptococcus — извитой) — клетки, расположенные в виде цепочек различной длины. Результат деления кокков в одной плоскости. Стрептококки вызывают мастит сельскохозяйственных животных, мыт цельнокопытных и др.

А)условнопатогенные , тонзиллит ,гайморит,отит б) патогенные, рожистые воспаления, скарлатинез

Тетракокки (гр. tetracoccus — четыре кокка) — сцепленные по четыре кокка как результат последовательного деления клеток в двух взаимно-перпендикулярных плоскостях. К патологии животныхотношения не имеют., сапрофиты

Сарцины (лат. sarcina — связываю, соединяю) — кокки, расположенные ярусами по 8—16 особей как результат последовательного деления клеток в трех взаимно-перпендикулярных плоскостях. Напоминают тюки, пакеты.заболевания не вызывают.

Стафилококки (гр. staphylococcus — виноградная гроздь). Гроздьевидные скопления кокков как результат деления кокков в различных плоскостях. Некоторые стафилококки причиняют существенный урон животноводству, вызывая септические состояния, поражения молочной железы, желудочно-кишечного тракта, кожного покрова. стафилококкус ауреус-внтрибольничные инфекции, пищ.отравл, забол.жкт

19. Палочковидные бактерии:

Палочки правильной формы, в мазках расположены беспорядочно. (Болезни сальмонеллез, брюшной тиф, эшрихии, шигелла) Гр -

Диплобактерии – расположены попарно на одной линии (болезни – пневмония, зловонный насморк – бакт. Клепсиеллы)Гр -

Палочки овоидной формы (чума, псевдотуберкуллез)Гр-

Коккообразные. (Брюцелла, коклюш, туляремия) Гр –

Спорообразные палочки. (Если d споры меньше d палочки, то бацилла(сиб язва; Если d cпоры больше d палочки, то клостридии(терминальные-столбняк, субтерминальные-газов гангрена, бутулизм)

20. извитые формы – спиралевидные бактерии, например спиреллы, имеющие вид штопорообразно извитых клеток. К патогенным спириллам относится возбудитель содоку (блезнь укуса крыс). К извитым также относятся кампилобактеры, имеющие изгибы как у крыла летящей чайки; близки к ним и такие бактерии, как спирохеты.

Бактерии имеющие 1 завиток – вибрионы

Бактерии имеющие 2 завитка – кампилобактеры, хеликобактеры

Бактерии имеющие несколько завитков – спирохеты

Бактерии имеющие крупные завитки, разные по размеру и количеству. Пример – борелии

Бактерии имеющие мелкие завитки одинаковой амплитуды. Пример – трипанема

Бактерии имеющие 2 вида завитков: мелкие и крупные. Пример – лектоспиры.

Ветвящиеся бактерии – бактерии имеющие иную форму.

Актиномицеты – лучистый гриб. Грам +. Актиномикоз

Микобактерии. Грам +. Туберкулез, лепра.

21. Основой вегетативного тела грибов является мицелий, или грибница, представляющая собой систему тонких ветвящихся нитей, или гиф, находящихся на поверхности субстрата, где живет гриб, или внутри него. Обычно грибница бывает весьма обильна, с большой общей поверхностью. У грибов, условно называемых низшими грибница неклеточная; у некоторых тело представляет голый протопласт; у остальных – грибница разделена на клетки. Клетка грибов покрыта клеточной стенкой, состоящей из хитина. В цитоплазме клетки располагаются одно или несколько ядер, митохондрии, лизосомы, эндоплазматическая сеть, вакуоли. вызывают черную пьедру, черный лишай; они могут быть причиной онихомикоза и отомикоза.

Дрожжеподобные грибы – относятся к несовершенным грибам, поэтому не имеют специальных органов плодоноше­ния. В основном, имеют вид от­дельных овальных клеток (одноклеточные грибы). У множества клеток грибов имеется клеточная стенка. На 80—90 % она состоит из азотистых и безазотистых полисахаридов, у большинства основным полисахаридом является хитин. Также в состав клеточной стенки входят белки, липиды и полифосфаты. Внутри находится протопласт, окружённый цитоплазматической мембраной. Протопласт имеет строение типичное для эукариот. Есть запасающие вакуоли, содержащие волютин, липиды, гликоген, жирные кислоты (в основном ненасыщенные) и другие вещества.

Дрожжеподобные грибы размножающиеся почковани­ем. Но есть два существенных признака, по которым их отличают при проведении микробиологических исследований: дрожжеподобные гри­бы, в отличие от истинных дрожжей, образуют псевдомицелий и не образуют половых спор. Дрожжеподобные грибы рода Candida мо­гут быть обнаружены на слизистых оболочках здоровых людей. У новорожденных и грудных детей, у ослабленных больных они вызывают кандидоз - поражение слизистых оболочек, кожи, внутренних органов. Это заболевание может возникнуть вследствие экзогенного заражения. Но чаще кандидоз развивается как эндогенная инфекция при длитель­ном лечении антибиотиками широкого спектра действия, которые, бу­дучи направлены против бактерий - возбудителей заболевания, попутно подавляют рост бактерий - представителей нормальной микрофлоры организма, что ведет к дисбактериозу. Наиболее часто возбудите­лями кандидозов у человека являются виды Candida albicans, C.tropicalis и другие.

22. риккетсии – мелкие грамотрицательные палочковидные бактерии размером 0,35-2,0 мкм, облигатные внутриклеточные паразиты. форма и размер риккетсии могут меняться (клетки неправильной формы , нитевидные) в зависимости от условий роста. Размоножаются бинарным делением. Большинство риккетсий не может развиваться вне живой клетки, их выращивают в желточных мешках куриного эмбриона, переживающих культурах клеток и тканях животного. Риккетсии обладают независимым от клетки хозяина метаболизмом, однако, возможно, они получают от клетки-хозяина макроэргические соединения для своего размножения. В мазках и тканях их окрашивают по методу романовского – гимзы или по здродовскому. У человека риккетсии вызывают эпидемический сыпной тиф, ку-лихорадку, клещевой риккетсиоз, лихорадку цуцугамуши, пятнистую лихорадку скалистых гор и др.

Хламидии - род бактерий, виды которого относятся к облигатным внутриклеточным паразитам.,имеют шаровидную, овоидную или палочковидную форму. Их размеры колеблются в пределах 0,2—1,5 мкм. Морфология и размеры хламидии зависят от стадии их внутриклеточного цикла развития, для которого характерно превращение небольшого шаровидного элементарного образования в крупное инициальное тельце с бинарным делением. Перед делением частицы хламидии обволакиваются образованием, напоминающим бактериальную капсулу. Хламидии окрашиваются"* по Романовскому—Гимзе, грамотрицательны, хорошо видны в прижизненных препаратах при фазово-контрастной микроскопии. Заболевания у человека- хламидиоз. У птиц - орнитоз, пситаккоз.

23. микоплазмы – мелкие бактерии, окурженные цитоплазматической мембраной и не имеющие клеточной стнки. Из-за отсутствия клеточной стенки микоплазмы осмотически чувствительны и имеют разнообразную форму: кокковидную, нитевидную, колбовидную. Эти формы видны при фазово-контрастной микроскопии чистых культур микоплазм. На плотной питательной среле микоплазмы образуют колонии, напоминающ яичницу-глазунью. Патогенные микоплазмы вызывают хронические инекции, например Vycoplasma pneumoniaе вызывает у человека заболевание, протекающее по типу острой респираторной инфекции. Микоплазмы вызывают заболеввание не только у животных, но и у растений.

3. Сбросить шлифовальное стекло в дез. средство

4. Высушить на воздухе

5. Бактериоскопировать (рис. № 7)

ОБНАРУЖЕНИЕ КАПСУЛ ПО МЕТОДУ БУРРИ-ГИНСА

1. Приготовить мазок на предметном стекле по методу Бурри

2. Высушить на воздухе

3. Фиксировать химическим способом: погружение стекла в емкость со спиртом или сулемой – 10 мин, или со смесью Никифорова (спирт и эфир 1:1) – 15-20 мин

4. Осторожно промыть водой

5. На мазок нанести фуксин Пфейффера – 3-5 мин

7. Высушить на воздухе

8. Микроскопия с иммерсией.

Внимание! Фильтровальной бумагой не пользоваться, чтобы не повредить препарат.

Препарат по Бурри – Гинсу под микроскопом: фон черный, клетки бактерий красные, капсулы неокрашенные (красители не воспринимают) (рис. № 8).

Рис. №7. Окраска по Бурри и Бурри-Гинсу




Рис. №8. Капсула у Klebsiella pneumoniae

ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗАНЯТИЕ №4

Выявление спор по методу Ожешко.

Студент должен знать:

- строение, состав и значение спор,

- примеры споровых микробов,

- классификация бактерий по расположению спор,

- методы выявления спор,

- особенности окраски по методу Ожешко, красители и реактивы

- цель применения и сущность метода,

- цель обработки препарата кислотами.

Студент должен уметь:

- выявление спор у бактерий методом Ожешко,

-микроскопия окрашенных препаратов с использованием иммерсионной системы,

- соблюдение мер безопасной работы с живыми культурами микробов,

- обработка рабочего места и рук дез. веществами.

Этапы самостоятельной аудиторной работы:

9. Подготовить препарат из культуры и окрасить его по методу Ожешко

10. Препараты, подготовленные и демонстрационные, промикроскопировать с иммерсией

11. Обработать рабочие места и руки

12. Зарисовать результаты микроскопирования и записать алгоритм метода в дневник

ОКРАСКА ПО МЕТОДУ ОЖЕШКО

1. На высушенный мазок (нефиксированный!) + несколько капель 0,5% НCl, держать над пламенем спиртовки до образования паров

2. Высушивают и фиксируют физическим способом

3. Окрашивают по методу Циля-Нильсена:

1) На фиксированный препарат + фильтровальная бумага + фуксин Циля. Подогреваем до отхождения паров + краситель (2 раза)

5) Метиленовый синий 1 % - 3-5 мин

4. Микроскопия с иммерсией

Метод Ожешко сходен с методом Циля-Нильсена, но отличается использованием раствора соляной кислоты в качестве протравы, разрыхляющей оболочку споры, которая плохо воспринимает красители.

Кислотоустойчивые споры окрашиваются в розово-красный, а бактериальная клетка в голубой цвет (рис. № 9).

Рис. №9. Споры у Bacillus subtilis


ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗАНЯТИЕ №5

Определение подвижности микроорганизмов

методами нативных препаратов.

Студент должен знать:

- строение, состав и значение жгутиков,

- классификация бактерий по расположению жгутиков,

- примеры жгутиковых микробов,

- факторы, влияющие на скорость движения микробов,

- методы определения подвижности микробов,

- особенности темнопольной микроскопии,

- принцип строения влажной камеры, ее предназначение,

- особенности культур, используемых в данных методах.

Студент должен уметь:

- техника микроскопии нативных неокрашенных препаратов в темном поле,

- выявление подвижности микроорганизмов,

- методика приготовления висячей капли,

- методика приготовления раздавленной капли,

- соблюдение мер безопасной работы с живыми культурами микробов,

- обработка рабочего места и рук дез. веществами.

Этапы самостоятельной аудиторной работы:

13. Подготовить препараты висячая и раздавленная капли из культуры, выращенной на жидкой питательной среде

14. Препараты бактериоскопировать в темнопольной микроскопии

15. Обработать рабочие места и руки

16. Записать результаты микроскопирования и алгоритмы методов в дневник

МЕТОД РАЗДАВЛЕННОЙ КАПЛИ

1. На предметное стекло наносят пипеткой или петлей каплю культуры и покрывают ее покровным стеклом. !Чтобы не образовалось пузырьков воздуха, покровное стекло подводят ребром к краю капли и резко опускают его

2. Для предохранения от высыхания препарат помещают во влажную камеру

3. Микроскопируют в темном поле при увеличении объектива 40Х

Препарат можно поместить во влажную камеру для предохранения от высыхания

МЕТОД ВИСЯЧЕЙ КАПЛИ


1. Для приготовления препарата необходимы стекло с лункой, покровное стекло, вазелин. Края лунки покрывают тонким слоем вазелина (рис. № 10)

2. На покровное стекло наносят каплю культуры и осторожно накрывают покровное стекло стеклом с лункой так, чтобы капля оказалась в центре

3. Склеившиеся стекла быстро переворачивают покровным стеклом вверх. Капля находится в герметической камере и сохраняется долгое время

Микроскопия сначала при увеличении 8Х. Находят край капли, а затем переводят на большое увеличение 40Х (рис. № 11).

Рис. №10. Техника приготовления препарата висячая капля

Рис. №11. Лептоспира в темном поле

ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗАНЯТИЕ №6

Зачетное занятие с замером навыков по теме:

Перечень манипуляций к зачету:

- подготовить препарат и окрасить его по методу Грама. Значение метода

- подготовить препарат и окрасить его по методу Ожешко. Значение метода

- подготовить препарат и окрасить его по методу Бурри-Гинса. Значение метода

- подготовить препарат, окрасив его по методу Циля-Нильсена (1999г). Значение метода

- подготовить препарат висячая капля, значение методики

- подготовить препарат раздавленная капля, значение методики

- промикроскопировать готовые препараты, окрашенные различными методами: по Граму, Ожешко, Бурри-Гинсу, Циля-Нильсену.

Вопросы к зачету:

- назовите основные формы бактериальных клеток,

-перечислите основные и дополнительные структуры прокариотической клетки, их функции,

- укажите состав и строение жгутиков, группы бактерий по расположению жгутиков,

- назовите строение и функции нуклеоида у прокариот,

- укажите, что собой представляет спора и ее значение для бактерий, расположение спор в клетке (примеры микробов).

Тестовые задания для самоконтроля

1. Расставьте этапы приготовления препарата в нужном порядке:

в) приготовление мазка

2. Укажите соответствие между возбудителем и методом его окраски:

1) стафилококк а) по Граму

2) микобактерия туберкулеза б) Циля - Нильсену

3) пневмококк в) Бурри - Гинсу

4) бацилла сибирской язвы г) Ожешко

3. Простой метод окраски:

б) метиленовым синим

г) по Романовскому - Гимзе

4. Хранителем наследственной информации у прокариот является:

5. Окраска по методу Бурри отличается от метода Бурри-Гинса:

а) по времени окрашивания

б) отсутствия фуксина Пфейффера

в) разные разведения туши

г) мазок фиксируется в пламени горелки

6. При окраске препарата методом Циля-Нильсена (инструкция 1999г.) используется:

7. К спорообразованию способны:

г) кишечная палочка

8. В методике окраски по Бурри-Гинсу используется черная тушь, разведенная в

9. Укажите соответствие:

Метод окраски: Цель метода:

1. метод Ожешко а) обнаружение капсулы

2. метод Бурри б) определение кислотоустойчивости

3. метод Циля-Нильсена в) отношение к Граму

4. метод Грама г) определение споры

10. При изучении подвижности используется микроскопия:
а) фазово-контрастная

Читайте также: