Метод висячей капли микробиология кратко

Обновлено: 18.05.2024

Прежде чем подробно излагать методы приготовления препаратов, необходимо отметить, что от качества приготовления препарата в значительной степени зависит результат микроскопии.

Предметные и покровные стекла, употребляемые для приготовления препаратов, нуждаются в специальной подготовке. Стекла должны быть чистыми и хорошо обезжиренными. Это может быть достигнуто разными способами. Стекла кипятят 15 минут в 1% растворе соды (или в мыльной воде), споласкивают водой, кладут в слабую соляную кислоту и, наконец, хорошо промывают водой.

Хранят стекла в сосудах (банках) с притертыми пробками в смеси равных количеств спирта и эфира или в 96° спирте или промытыми и вытертыми досуха.

1) Исследование микроорганизмов в живом состоянии

Исследование микроорганизмов в живом состоянии применяется главным образом для изучения формы и подвижности бактерий, реже при реакции агглютинации.

Исследование в висячей и раздавленной капле.

Исследование проводят либо в висячей, либо в раздавленной капле, т. е. в капле на предметном стекле, покрытом покровным.

Для висячей капли необходимо иметь специальное предметное стекло с луночкой.

Для приготовления препарата небольшую каплю суспензии микроорганизмов наносят на покровное стекло, переворачивают его каплей вниз и помещают на специальное предметное стекло с углублением в центре. (рис. 1).

1- предметное стекло с углублением в центре,

2 – покровное стекло,

3 – капля суспензии микроорганизмов.

Если имеют дело с культурой на жидкой среде, то маленькую капельку культуры прямо наносят на тщательно вымытое покровное стекло; если же имеется культура на плотной среде, то на покровное стекло предварительно наносят маленькую капельку водопроводной воды или физиологического раствора, затем петлей прикасаются к культуре и приставшие к ней бактерии размешивают в приготовленной капельке. Можно также заранее приготовить взвесь микроорганизмов в физиологическом растворе и взять капельку из нее. В том и в другом случае на покровное стекло накладывают предметное стекло с луночкой посередине, края которой предварительно обмазаны вазелином. Предметное стекло слегка прижимают к покровному, в результате чего оба стекла склеиваются. После этого препарат переворачивают покровным стеклом кверху. Получается герметически закрытая камера, в которой капля долго не высыхает. Под микроскопом край капли сначала отыскивают со слабым увеличением и при суженной диафрагме, а потом исследуют препарат при помощи более сильной сухой системы.

При пользовании простыми предметными стеклами материал (физиологический раствор и культуру) наносят на предметное стекло, которое покрывают покровным. Капельки материала надо брать такой величины, чтобы они заполняли все пространство между покровным и предметным стеклом и не выступали за края покровного. Препарат можно рассматривать как с сухими системами, так и с иммерсионной. Очень хорошо рассматривать живые бактерии с помощью фазово-контрастной или аноптральной установки . Препараты на простых предметных стеклах быстро высыхают, поэтому, если их приходится рассматривать не тотчас, а спустя некоторое время, их помещают во влажную камеру (чашку Петри), на дно которой положено 2—3 влажных кружка фильтровальной бумаги, покрытых двумя сухими.

Метод висячей капли в микробиологии часто применяется для изучения препаратов под микроскопом. Такой препарат изготавливают для изучения микроорганизмов в жидкой среде и для изучения жидких микропрепаратов. При помощи этого метода также удобно наблюдать за тем, как прорастают споры. Конечно, в продаже имеется множество готовых микропрепаратов, их удобно использовать не только в школе, но и дома. Однако нет ничего сложного в том, чтобы заняться самостоятельным приготовлением и сделать препарат висячая капля.

Препарат висячая капля

Как уже отмечалось, висячая капля в микробиологии используется для изучения поведения микробов, плесени и так далее. Чтобы сделать препарат, нужно приобрести красители и специальный инструмент. Важно следовать инструкции и выполнять все условия, иначе эксперимент попросту не удастся, а микропрепарат испортится.

Приготовление препарата висячая капля

Алгоритм действий следующий:

Приготовьте покровное стекло.
Нанесите на него каплю суспензии с микроорганизмами. Используйте для этого биологическую петлю.
Переверните стеклышко таким образом, чтобы капля свисала.
Поместите образец над лункой покровного стекла, на котором по центру имеется специальное углубление. Важно! Капля не должна прикасаться к стеклу, она должна свободно висеть.

Производитель оставляет за собой право вносить любые изменения в стоимость, модельный ряд и технические характеристики или прекращать производство изделия без предварительного уведомления.

На предметное стекло наносят пипеткой или петлей каплю культуры и покрывают ее покровным стеклом. !Чтобы не образовалось пузырьков воздуха, покровное стекло подводят ребром к краю капли и резко опускают его

Для предохранения от высыхания препарат помещают во влажную камеру

Микроскопируют в темном поле при увеличении объектива 40Х

Препарат можно поместить во влажную камеру для предохранения от высыхания

Метод висячей капли

Для приготовления препарата необходимы стекло с лункой, покровное стекло, вазелин. Края лунки покрывают тонким слоем вазелина (рис. № 10)

На покровное стекло наносят каплю культуры и осторожно накрывают покровное стекло стеклом с лункой так, чтобы капля оказалась в центре

Склеившиеся стекла быстро переворачивают покровным стеклом вверх. Капля находится в герметической камере и сохраняется долгое время

Микроскопия сначала при увеличении 8Х. Находят край капли, а затем переводят на большое увеличение 40Х (рис. № 11).

Рис. №10. Техника приготовления препарата висячая капля

Рис. №11. Лептоспира в темном поле

ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗАНЯТИЕ №6

Зачетное занятие с замером навыков по теме:

Перечень манипуляций к зачету:

- подготовить препарат и окрасить его по методу Грама. Значение метода

- подготовить препарат и окрасить его по методу Ожешко. Значение метода

- подготовить препарат и окрасить его по методу Бурри-Гинса. Значение метода

- подготовить препарат, окрасив его по методу Циля-Нильсена (1999г). Значение метода

- подготовить препарат висячая капля, значение методики

- подготовить препарат раздавленная капля, значение методики

- промикроскопировать готовые препараты, окрашенные различными методами: по Граму, Ожешко, Бурри-Гинсу, Циля-Нильсену.

Вопросы к зачету:

- назовите основные формы бактериальных клеток,

-перечислите основные и дополнительные структуры прокариотической клетки, их функции,

- укажите состав и строение жгутиков, группы бактерий по расположению жгутиков,

- назовите строение и функции нуклеоида у прокариот,

- укажите, что собой представляет спора и ее значение для бактерий, расположение спор в клетке (примеры микробов).

Тестовые задания для самоконтроля

1. Расставьте этапы приготовления препарата в нужном порядке:

в) приготовление мазка

2. Укажите соответствие между возбудителем и методом его окраски:

стафилококк а) по Граму

микобактерия туберкулеза б) Циля - Нильсену

пневмококк в) Бурри - Гинсу

бацилла сибирской язвы г) Ожешко

3. Простой метод окраски:

б) метиленовым синим

г) по Романовскому - Гимзе

4. Хранителем наследственной информации у прокариот является:

5. Окраска по методу Бурри отличается от метода Бурри-Гинса:

а) по времени окрашивания

б) отсутствия фуксина Пфейффера

в) разные разведения туши

г) мазок фиксируется в пламени горелки

6. При окраске препарата методом Циля-Нильсена (инструкция 1999г.) используется:

7. К спорообразованию способны:

г) кишечная палочка

8. В методике окраски по Бурри-Гинсу используется черная тушь, разведенная в

9. Укажите соответствие:

Метод окраски: Цель метода:

метод Ожешко а) обнаружение капсулы

метод Бурри б) определение кислотоустойчивости

метод Циля-Нильсена в) отношение к Граму

4. метод Грама г) определение споры

10. При изучении подвижности используется микроскопия: а) фазово-контрастная

1—висячая капля; г-луночка; 3—предметное стекло; i— покровное стекло.

питат. средах и 7) физиол. (0,85%) раствор NaCl.—С пособ приготовления В. к.: 1. Капля не слишком густой взвеси микробов в жидкой питат. среде или в 0,85% NaCl наносится предварительно прокаленной на пламени горелки и остуженной платиновой петлей на середину покровного стекла, лежащего на лабораторном столе. 2. Покровное стекло с нанесенной на него каплей микробной взвеси плотно прикрывается предметным стеклом, луночка которого по краю смазана вазелином. Предметное стекло должно быть положено на покровное так, чтобы луночка оказалась над каплей. Благодаря вазелину, покровное стекло приклеивается к предметному, и капля оказывается в герметически закрытом пространстве. 3. Осторожным и быстрым движением перевертывают препарат так, чтобы покровное стекло с каплей оказалось наверху, а предметное с луночкой—внизу (см. рисунок). 4. Исследуют каплю с помощью сухой или масляной системы микроскопа. Для первоначальной ориентировки под микроскопом находят сначала край В. к., а затем уже изучают каплю на всем протяжении. Микроскопическое исследование В. к. необходимо вести при слегка затемненном поле зрения (при опущенном осветителе или суженной ирис-диафрагме). Для специальных целей и длительных наблюдений существуют особые камеры, позволяющие поддерживать в них одну и ту же t° и предохраняющие В. к. от высыхания. Метод висячей капли применяется нередко и при изучении дрожжей, водорослей, простейших и др.

Большая медицинская энциклопедия . 1970 .

Полезное

Смотреть что такое "ВИСЯЧАЯ КАПЛЯ" в других словарях:

Висячая капля — способ определения подвижности некоторых микроорганизмов. Для приготовления В. к. на центр покровного стекла петлей или пипеткой наносят каплю теплой молодой иссл. к ры, покровное стекло с помощью вазелина прикрепляют к предметному стеклу так,… … Словарь микробиологии

висячая капля — (напр. используется в методе определения поверхностного натяжения) [А.С.Гольдберг. Англо русский энергетический словарь. 2006 г.] Тематики энергетика в целом EN pendent drop … Справочник технического переводчика

ВИСЯЧАЯ КАПЛЯ — висячая капля, метод изготовления препаратов для микроскопии живых микробов. На середину покровного стекла наносят каплю культуры, накрывают стеклом с углублением (необходимо, чтобы капля культуры была в центре углубления) и переворачивают… … Ветеринарный энциклопедический словарь

висячая капля — препарат для микроскопии живых микроорганизмов, изготовленный путем помещения капли взвеси микробов на нижнюю поверхность покровного стекла над углублением (камерой или лункой) предметного стекла … Большой медицинский словарь

Микробиологи́ческая диагно́стика — основана на идентификации возбудителя или выявлении иммунного ответа организма больного на него. Начальным этапом М.д. является отбор материала и транспортировка проб в лабораторию. Вид материала для исследования определяется особенностями… … Медицинская энциклопедия

МИКРОСКОПИЯ — микроскопия, исследования невидимых невооружённым глазом объектов при помощи микроскопа. Различают световую М., основанную на использовании световых лучей, и электронную М., где вместо световых лучей применяют поток электронов (см. Электронный… … Ветеринарный энциклопедический словарь

МИКРОСКОПИЧЕСКАЯ ТЕХНИКА — МИКРОСКОПИЧЕСКАЯ ТЕХНИКА, в узком смысле слова есть техника микро скопирования и содержит правила обраще ния с микроскопом и вспомогательными аппаратами в целях рационального использования оптических свойств и механического устройства этих… … Большая медицинская энциклопедия

Читайте также: