Метод сали для определения гемоглобина кратко

Обновлено: 07.07.2024

Определение содержания гемоглобина в крови производится колориметрическими способами, один из которых (гематиновый метод Сали) основан на образовании устойчивого раствора коричневого цвета при взаимодействии гемоглобина с соляной кислотой. Принцип колориметрического способа заключается в том, что если исследуемый раствор путем разбавления довести до окраски, одинаковой со стандартным раствором, то концентрация растворенных веществ в обоих растворах будет одинакова, а количества веществ будут соотносится как их объемы. В стандартном растворе гемоглобина содержится 167 г/л.

Ц е л ь р а б о т ы: освоить методику определения гемоглобина и найти содержание гемоглобина в исследуемой крови.

Д л я р а б о т ы н е о б х о д и м ы: гемометр Сали, капилляр с меткой 0,02 мл, 0,1 н раствор соляной кислоты, дистиллированная вода, свежая кровь, пипетка, стеклянная палочка, стерильная инъекционная игла, вата, спирт, йод, эфир, стерильный скарификатор. Объект исследования - человек.

Х о д р а б о т ы

В среднюю пробирку гемометра налить 0,1 н раствор соляной кислоты до нижней кольцевой метки. Из пальца обычным способом набрать в капилляр кровь без пузырьков до метки. Излишек крови можно удалить из капилляра прикладыванием ваты или фильтровальной бумаги к кончику капилляра. Выдуть кровь на дно пробирки из капилляра так, чтобы верхний слой кислоты остался неокрашенным. Не вынимая капилляр, промыть его раствором соляной кислоты из верхнего слоя пробирки гемометра. После этого содержимое пробирки перемешать стеклянной палочкой и поставить в гемометр на 5-10 мин. Это время необходимо для полного превращения гемоглобина в солянокислый гематин

Затем к содержимому пробирки прибавить по каплям дистиллированную воду, каждый раз перемешивая раствор стеклянной палочкой до тех пор, пока цвет полученного раствора не станет одинаковым с цветом стандартного раствора боковых ампул гемометра. Цифра, стоящая на уровне нижней границы мениска полученного раствора отражает содержание гемоглобина в исследуемой крови в грамм-процентах (г%).

Перевод полученных данных в единицы системы СИ (в г/л) производят путем умножения измеренного количества гемоглобина в г% на 10. Зарисовать гемометр и капилляр.

В выводе сравнить с нормой полученное содержание гемоглобина в исследуемой крови.

4) Подсчет количества эритроцитов

Ц е л ь р а б о т ы: освоить методику и определить количество эритроцитов в исследуемой крови.

Д л я р а б о т ы н е о б х о д и м ы: микроскоп, счетная камера Горяева, меланжер для эритроцитов, 3 % раствор хлорида натрия, покровные стекла, регулируемая пипетка, пробирки, стерильный скарификатор, вата, спирт, эфир, йод. Объект исследования - человек.

Х о д р а б о т ы

Необходимо перед началом работы рассмотреть счетную камеру под микроскопом, найти малые квадратики и большие квадраты сетки (рис.1). Камеру предварительно необходимо подготовить путем притирания покровного стеклышка к боковым выступающим граням камеры до появления цветных (ньютоновских) колец. В каплю свежей крови, полученной из пальца, погрузить кончик меланжера (с красной бусинкой в расширении) для эритроцитов и набрать кровь до метки 0,5, следя, чтобы в капилляр не

попали пузырьки воздуха. Быстро, пока кровь не свернулась, перенести кончик меланжера в 3 % раствор хлорида натрия и набрать его до метки 101, т.е. развести кровь в 200 раз. После этого взять заполненный меланжер (смеситель), зажать его концы 1 и 3 пальцами и в течение 1 мин встряхи-

вать. После тщательного перемешивания крови, удалив предварительно 1-2 капли, нанести небольшую капельку на сетку камеры.

При необходимости такое же разведение может быть выполнено другим способом. Например, 0,02 мл крови смешать с 4 мл 3 % NaCl в пробирке. Содержимое пробирки в этом случае тщательно перемешивается.

Если капля разведенной крови будет слишком велика, то жидкость может попасть на боковые грани камеры и высота слоя над сеткой будет больше 0,1 мм. В этом случае камеру следует промыть дистиллированной водой, насухо вытереть и заполнить снова. Разведенную (в меланжере) кровь следует еще раз перемешать.

Заполнив камеру, поместить ее под микроскоп и, если форменные элементы расположены равномерно (что является показателем хорошего перемешивания крови), приступить к подсчету. Считать эритроциты удобнее при большом увеличении.

Необходимо подсчитать число эритроцитов в 5 больших квадратах, расположенных в разных местах сетки, например, по диагонали. Во избежание двухкратного подсчета клеток, лежащих на границе между малыми квадратиками, руководствоваться правилом Егорова, согласно которому, относящимися к данному квадратику считаются эритроциты, лежащие как внутри квадратика, так и на его левой и верхней границе. Эритроциты, лежащие на правой и нижней границе для данного квадратика не учитываются.

Формула для вычисления количества эритроцитов в 1 мм 3 крови:

N - искомое число эритроцитов;

А - число эритроцитов в 80 маленьких квадратиках (или в 5 больших);

4000 - множитель для получения содержания эритроцитов в одном мм 3 крови;

200 - степень разведения эритроцитов.

Для перевода полученного количества эритроцитов в единицы СИ, подсчитанное количество эритроцитов умножить на 10 6 и выразить в N х 10 12 /л (тера на литр). Зарисовать фрагмент сетки камеры Горяева с маленькими и большими квадратами.

Методика определения уровня гемоглобина крови. Норма гемоглобина

Дозировка гемоглобина имеет первостепенное значение для оценки эритроцитного раздела, поскольку представляет собой функциональный элемент. Учитывая тот факт, что гемоглобин в чистом состоянии получается весьма трудно, и как таковой не подлежит дозировке, в текущей практике применяются косвенные методы дозировки.

Среди многочисленных существующих способов наиболее простым и точным методом гемоглобинометрии считается фотометрическое определение в виде цианметгемоглобина, а для эталонирования фотометров — использование стандартных растворов цианметгемоглобина, приготовленных из человеческого гемоглобина.

Принципы определения гемоглобина в крови. Железосинеродистый калий окисляет железистое железо гемоглобина, в результате чего все виды гемоглобина крови преобразуются в метгемоглобин. Последний комбинируется с цианистым калием, образуя цианметгемоглобин или циангемоглобин — наиболее устойчивое производное гемоглобина.

Состав используемого реагента следующий (по van Kampen-Zijlstra):
- Железосинеродистый калий [K3Fe(CN)6] 0,2 г
- Цианистый калий (KGN) 0,05 г
- Монокалиевый фосфат (КН2РО4) 0,14 г
- Дистилированная вода до 1000 мл

Показатель водорода реагента должен укладываться в пределы от 7,2 до 7,5, быть прозрачным и очень стойким. После приготовления раствор пропускается через качественный бумажный фильтр и хранится в герметически закрытых баллонах коричневого цвета, в холодильнике при температуре +4°. Хранить не более 1—2 месяцев. Периодически проверять чистоту раствора, в случае необходимости повторно фильтровать.

Раствор нетоксичен, поскольку концентрация цианистого калия значительно меньше ядовитой дозы.

Техника определения гемоглобина в крови. Влить 0,02 мл крови (содержащийся в одной пипетке гемоглобин) в пробирку с 5 мл реагента, перемешать и отставить на 20 мин. Прочет результата делать с помощью фотометра с фильтром S53 в ванночке, величиной 1 см, по сравнению с дистилированной водой.

Концентрация гемоглобина (в г/100 мл крови) определяется по формуле: Гемоглобин в г/100 мл = экстикция пробы х К(стандартная концентрация гемоглобина/стандартная экстинкция).

Калибровка фотометров осуществляется с помощью стандартного раствора гемоглобина, который у нас в стране поставляется бухарестским гематологическим Центром. Способ простой, точный, погрешность минимальная (±2%), воспроизводимость удовлетворительная.
Нормальные значения колеблятся в зависимости от возраста, пола высоты над уровнем моря.

У взрослого: мужчин = 15 ± 2 г/100 мл, а женщин = = 13 ± 2 г/100 мл.

У детей от двухлетнего возраста до половозрелости значения растут прогрессивно от 11 до 13 г/100 мл.

Редактор: Искандер Милевски. Дата обновления публикации: 18.3.2021

Метод определения концентрации гемоглобина по Сали практически не используется в современных лабораториях. Он требует больших временных затрат и дает неточные результаты. Но метод Сали все еще эффективен в условиях ограниченного доступа к современной технике. Например, при отсутствии электроэнергии, расходных материалов или при поломке автоматического исследовательского оборудования.

Принцип проведения исследования

В основе метода Сали лежит простая реакция преобразования гемоглобина. Для этого в препарат крови добавляется определенное количество хлористоводородной кислоты. В результате в пробирке образуется вещество хлоргематин, коричневого цвета.

Определить содержание преобразованного гемоглобина можно по интенсивности окраса полученной смеси. Для этого раствор разбавляется дистиллированной водой, пока его оттенок не станет идентичным веществу в контрольной запаянной пробирке.

Со временем содержимое контрольных препаратов выцветает. В результате может быть отклонение полученных данных от реальных показателей на 1-3%.

Гемометр Сали для определения уровня гемоглобина

Чтобы упростить проведение лабораторного анализа был разработан гемометр Сали, который включает:

штатив с 3 вертикальными гнездами;
2 запаянные пробирки со стандартными жидкостями;
открытую градуированную пробирку;
капилляр (0,2 мл);
пипетку для воды;
стеклянную палочку для перемешивания.

В стандартном растворе содержится норма в 167 г/л. После разбавления препарата крови, смешанного с кислотой, дистиллированной водой, достаточно сравнить разницу в объеме жидкости, чтобы высчитать уровень гемоглобина у пациента по методу Сали.

Методика проведения анализа

Для определения содержания гемоглобина в крови лаборант наливает в пробирку 0,1% раствор соляной кислоты до нижней круговой отметки. Затем из пальца пациента забирается 0,04 мл крови и добавляется под прозрачный кислотный слой. Содержимое перемешивается и отставляется на четверть часа. Это время необходимо, чтобы гемоглобин преобразовался в хлоргематин.

По истечении 15 минут лаборант сравнивает цвет с контрольной пробиркой. Если у пациента не наблюдается анемии 3 степени, то полученный раствор окажется темнее. Затем с помощью пипетки по каплям добавляется дистиллированная вода. Каждый раз раствор перемешивается стеклянной палочкой.

Как только цвет сравняется, остается посмотреть на уровень жидкости по нижнему мениску. Учитывая, что стандартная пробирка гемометра Сали градуирована в г/%, для получения стандартной величины в г/л необходимо результат умножить на 10.

Нормой для женщин считается уровень гемоглобина в 120-140 г/л. У мужчин этот показатель выше и составляет 130-150 г/л. Детская норма сильно варьируется от возраста и составляет 180-240 г/л у младенцев до года и 110-140 г/л у вплоть до совершеннолетия.

Недостатки метода Сали

Этот способ определения количества гемоглобина в крови не получил распространения в странах СНГ. У него есть несколько серьезных недостатков:

Время. На изучение крови 1 пациента затрачивается не менее 20 минут. При этом использование автоматизированных систем позволяет получить результат за несколько секунд.
Субъективность. Хроматическая методика Сали тесно связана с индивидуальным восприятием цвета. Соответственно, результаты могут различаться даже у 1 лаборанта в зависимости от внешних факторов.
Точность. Стандартная погрешность метода — 3 г/л. При использовании старых образцов контрольных пробирок, высоком содержании билирубина в крови и при плохом освещении результат определения уровня гемоглобина может отличаться еще больше, вплоть до 30% от реальных показателей.

При заболеваниях, связанных с изменением уровня гемоглобина в крови метод Сали не может использоваться из-за низкой точности, что и привело к его низкой популярности и постепенному превращению исключительно в практическую тренировку для студентов-медиков.

Метод Сали может эффективно использоваться для обучения медиков работе с лабораторным оборудованием. Он подходит для практической демонстрации различий между “старыми” и современными способами проведения диагностических исследований. Однако практическое использование хроматического метода в медицине очень ограничено из-за его низкой эффективности и высокой погрешности при интерпретации результатов.

Стандартный анализ крови обязательно включает в себя показатель уровня гемоглобина. Такой анализ называется клиническим и является базой для исследования практически всех заболеваний. Белок гемоглобин находится в клетках крови – эритроцитах. Он выполняет важную функцию клеточного дыхания. Благодаря железу, которое в нём содержится, кровь имеет красный цвет. Колориметрический принцип определения уровня гемоглобина основан именно на таком свойстве пигментации. Как делать такой анализ предложил швейцарский врач Герман Сали (Herman Sahli) в конце 19 века.

Принцип проведения

Определение количества гемоглобина по методу Сали является классическим, его до сих пор используют во многих лабораториях. Гемоглобин – это сложный белок из группы гемопротеинов. Он состоит из двух компонентов: белкового глобина и небелкового гема. Одна молекула гемоглобина содержит 4 гема. В центре каждого из них находится атом железа, который умеет обратимо соединяться с атомами кислорода и углекислого газа, при этом не окисляясь. Именно наличие этого элемента в крови придаёт ей характерный цвет.

Прибор для измерения гемоглобина: как выбрать для использования в домашних условияхКрасные кровяные тельца называются гемоглобином. Без него были бы невозможны важные процессы жизнедеятельности. Он…

На основе такого свойства гемоглобина Г. Сали изобрёл метод измерения его количества, который основан на определении цветового показателя крови. В кислой среде глобин легко отделяется от гема, который начинает взаимодействовать с кислородом. Такая химическая реакция также меняет валентность железа и позволяет образовать новое вещество – гематин. Его и используют для колориметрического анализа количества гемоглобина в крови по методу Сали.

Что представляет собой гемометр Сали

Для подсчёта уровня гемоглобина используют прибор, который изобрёл швейцарский диагност. Гемометр Сали состоит из трёх пробирок одинакового размера. Две пробирки запаяны и наполнены раствором крови в соляной (хлороводородной) кислоте. Такая смесь носит название гематин и имеет коричневый оттенок. Интенсивность цвета зависит от количества гемоглобина. В запаянных пробирках гемометра цвет соответствует стандарту содержания гемоглобина в крови здорового человека.

Норма гемоглобина в крови мужчин составляет 130-160 г/л, у женщин – 120-140 г/л.

Третья пробирка имеет шкалу, на которой отмечены грамм-проценты и единицы гемометра. Эта ёмкость заполняется анализируемым материалом. Колориметрический анализ производится лаборантом визуально. Анализируемый гематин разбавляют водой до определённого цвета, который сравнивают со стандартным образцом.

Методика проведения

Для проведения лабораторного исследования крови по методу Сали осуществляют следующие действия. Пустую пробирку гемометра заполняют соляной кислотой до нижней отметки. Концентрация раствора должна составлять 0,1 Н. Далее специальным капилляром, который входит в комплект гемометра, набирают 0,02 мл крови пациента.

Капилляр опускают в кислотный раствор и аккуратно выпускают в него, забранный у пациента, материал. Кровь должна оказаться под слоем кислоты так, чтобы сама кислота осталась прозрачной. Далее содержимое пробирки перемешивают и выдерживают в нетронутом состоянии 5-15 минут. За это время произойдёт взаимодействие жидкостей, и образуется гематин коричневого цвета.

В образовавшееся вещество по капле добавляют дистиллированную воду, пока цвет не станет идентичным с цветом образца в запаянной пробирке гемометра. Каждый раз гематин размешивают стеклянной палочкой. При этом жидкость поднимается, её уровень соответствует шкале контрольной пробирки. Как только цвет анализируемого материала сравняется со стандартным цветом, лаборант отмечает, какому делению шкалы грамм-процентов соответствует поднявшаяся жидкость. Для перевода в необходимые граммы на литр полученную цифру умножают на 10.

Насколько точный метод определения гемоглобина

Швейцарский диагност изобрёл свой способ определения гемоглобина в крови в конце 19 века. На тот момент этот способ был самым точным. Но новые исследования, открытия в области медицины и молекулярной диагностики создали новые методы. Появились аппаратные методики, которые исключают человеческий фактор при исследованиях. Они способны оценивать биологический материал при помощи более точных замеров.

HTC в анализе крови: норма, причины отклонений, расшифровкаКровь состоит в основном из эритроцитов и лейкоцитов, взвешенных в почти прозрачной жидкости, называемой…

В связи с этим у метода Сали есть ряд недостатков, которые снижают точность измерения:

Анализ цветного показателя гематина лаборант проводит визуально. Поэтому на точность влияет освещение в помещении, способность конкретного человека различать нюансы цветового спектра, особенности зрения лаборанта. Но даже здоровый человеческий глаз не может улавливать минимальные отклонения цвета, в отличие от высокоточной аппаратуры.
Образцы в гемометре Сали со временем выцветают. Изменённый цвет стандарта даёт большую погрешность конечного результата.
Превращение крови в гематин имеет разное время реакции. Определить конечный этап реакции невозможно, он колеблется от 2 до 40 минут и зависит от содержания в крови белков. Также оттенок может меняться и из-за разного количества билирубина.

Из-за указанных недостатков колориметрическое измерение по методу Сали имеет погрешность до 30%. В феврале 2000 года был издан Приказ № 45 Министерства Здравоохранения РФ, в соответствии с которым смещение коэффициента показателя гемоглобина в крови не должно превышать 5%. В связи с этим использование метода Сали на сегодняшний день не является пригодным для использования в клинико-диагностических лабораториях.

Если есть сомнения в методах диагностики, необходимо уточнять их в лаборатории перед сдачей крови.

Отзывы

Мария

Сдавала анализ крови после гриппа. Делала в своей поликлинике по прописке. Результат поверг меня в настоящий шок – гемоглобин был сильно завышен относительно нормы. Решила пересдать кровь, только уже в платной лаборатории. Показатели оказались в норме. Администратор лаборатории объяснила, что метод Сали, который часто используют поликлиники, имеет погрешность.

Андрей

А мне в поликлинике сразу сказали, что используют недорогой метод Сали. Типа у него есть погрешности, но в пределах нормы, но можете и в другом месте сдать, если сомневаетесь. Почитал, этот метод вообще-то давно используется, и никогда проблем у людей не было. Не собираюсь переплачивать за анализы в платных лабораториях.

Светлана

Учусь на медика метод Сали, мы не раз тестировали в лабораториях. И доверия к нему мало, погрешность есть. Если нужен тест на какое-то серьёзное заболевание, лучше проводить более высокоточное и современное обследование. Можно тоже колориметрическое обследование, но только гемиглобинцианидное. Но вообще странно, сейчас метод Сали уже почти не используют, найти поликлинику с такой лабораторией сложно.

Несмотря на неточность результатов исследования и устаревшие способы их проведения, в некоторых лабораториях продолжают использовать метод Сали для определения содержания гемоглобина в крови. Такой способ является самым недорогим, быстрым и технически простым, но без сомнений влияет на точность результатов анализа.

Читайте также: