Кратко законспектировать основные правила взятия инфицированного материала
Обновлено: 02.07.2024
Резюме: Статья направлена на расширение знаний врачей-клиницистов правилам забора материала и обоснованием необходимости соблюдения их для получения адекватного качественного результата исследования. Совместная работа врачей клинического и лабораторного профиля приведет к успешному выбору терапии у пациента.
Клиническая микробиология - это раздел медицинской микробиологии, изучающий основы этиологии, патогенеза, иммунитета, лабораторную диагностику микробных заболеваний, возникающих у неинфекционных (соматических) больных - терапевтических, онкологических, хирургических, гинекологических, урологических и пр. [1].
Микробиологические исследования позволяют определить присутствие в организме возбудителей инфекционных заболеваний, а также выявить уровень их чувствительности к антибактериальным препаратам.
Предметом исследования клинической микробиологии являетсяусловно-патогеннаямикрофлора, которая симбиотическивзаимодействует с человеком. Макро-микробиологическое сосуществование чаще всего взаимовыгодно, но иногда эти микробы становятся болезнетворными. К ним относятся стафилококки, стрептококки, некоторые нейссерии, эшерихии, клебсиеллы, протей, энтеробактеры, цитобактеры, псевдомонады, бактероиды, грибы.
Материал для микробиологического исследования разнообразен, им являются кровь, моча, ликвор, грудное молоко, гной, мокрота, кал, желчь, сперма, плевральная жидкость, отделяемое слизистых и ран, соскоб, пунктат, смыв, аспират, операционный материал, биоптат, трупный материал, катетеры, а также образцы воздуха, воды и т.д. Огромное количество видов исследуемых образцов определяет сложность подхода к преаналитическому этапу в бактериологии.
Анализ – это комплексная процедура, состоящая из большого количества этапов и зависящая от многих факторов, обеспечивающих ее выполнение. За последние несколько десятилетий показано, что пре- и постаналитические этапы аналитического процесса в целом более подвержены ошибкам, чем аналитический этап. Большая часть ошибок выявлена на пре-преаналитическом и пост-постаналитическом этапах за пределами лаборатории. Только аналитическая фаза контролируется лабораторией, а преаналитический и постаналитический этапы относятся к сфере действия других ответственных сторон, таких как врачи, медсестры, пациенты и прочие лица, вовлеченные в идентификацию пациента, ввод данных, сбор и транспортировку образцов [2].
Бактериологическое исследование предъявляет жесткие требования к качеству исходного материала, а также срокам его транспортировки и хранения. Именно по этой причине, биоматериал, который сдает пациент, максимально оперативно должен попасть на изучение в лабораторию, что гарантирует получение достоверного и актуального для назначения эффективного лечения результата. Погрешности в правилах сбора материала для микробиологического исследования приводят к ошибкам в диагностике возбудителя.
Чаще всего забор биоматериала выполняется врачом, но иногда эти процедуры проводятся пациентом самостоятельно. Сотрудники лаборатории должны проводить обучение персонала клиник по сбору материала, обращению с пробами, маркировке, транспортировке. Для тех проб, которые пациент собирает сам (к примеру, моча, кал), должны быть разработаны памятки для пациентов.
Для получения достоверных результатов микробиологических исследований необходимо четкое выполнение всех этапов исследования:
1. Назначение анализа строго по клиническим показаниям. Если врач подозревает у пациента инфекционный процесс, вызванный простейшими, вирусами, то не следует назначать бактериологическое исследование.
2. Проведение исследования и сбора материала до начала лечения антибиотиками, антисептиками, противогрибковыми препаратами. Когда забор исследуемого материала проводиться не в первые дни заболевания, а уже на фоне этиотропной терапии, возбудитель может быть не выделен из-за угнетения его жизнеспособности или гибели под действием проводимого лечения.
3. Выбор материала для микробиологического исследования должен быть клинически обоснован. Врач должен иметь предварительный клинический диагноз, понимать, что он хочет получить из лаборатории. Материал для бактериологического исследования берут непосредственно из тех мест, где на данной стадии заболевания наиболее вероятно присутствие возбудителей или исследуют клинически значимый биологический материал.
4. Отбор и доставку проб проводят с учетом специфики работы с конкретным биологическим субстратом, что снижает вероятность контаминации сапрофитной флорой и обеспечивает сохранение потенциальных патогенов. В большинстве случаев материал отбирают стерильными инструментами в стерильный контейнер и доставляют в лабораторию в термоконтейнере.
Жидкий биологический материал можно транспортировать непосредственно в шприце, на кончик которого надет стерильный колпачок. Для исследования на анаэробы биологический материал необходимо помещать в анаэробные условия. Для крови, образцов из стерильных полостей, ликвора используют специальные флаконы с жидкой питательной средой, заполненные газовой смесью определенного состава, куда из шприца уколом иглы через резиновую крышку вносят материал.
Должны быть правильно составлены сопроводительные документы. Они разрабатываются лабораторией в соответствии с нормативно-правовыми актами, принятыми в Республике Казахстан. В направлении указывают наименование, источник и метод получения биологического материала, дату и время его взятия; ФИО, пол и возраст больного; название учреждения, отделения, номер палаты; предполагаемый диагноз инфекционной патологии и предшествующую антибактериальную терапию; фамилию и подпись врача, направившего материал для проведения бактериологического исследования. Обязательная маркировка пробирок, контейнеров, флаконов и транспортных сред с указанием Ф.И.О., даты рождения, даты и времени взятия материала и локализации, откуда получен образец. Информация на бланке и материале должна совпадать.
5. Соблюдение сроков и режима хранения биологических проб, полученных для исследований. Нативный материал доставляют в лабораторию в максимально короткие сроки (для большинства образцов не позднее 1,5-2 ч после их получения). Допускается хранение материала в холодильнике при 4° С (это не относится биологическому материалу, полученному из стерильных в норме локусов: ликвору, крови, внутрисуставной и плевральной жидкости).
Если посев может быть выполнен не ранее чем через 48 ч или при доставке проб в отдаленные лаборатории рекомендуют использовать транспортные среды. В настоящее время существует множество модификаций тупферов, представляющих собой пробирку с транспортной питательной средой (Амиеса, Кэри-Блэйра, Стюарта, тиогликолевой средой) и стерильный тампон для забора материала.
При транспортировке материал следует оберегать от действия света, тепла, холода, механических повреждений, чтобы исключить гибель микроорганизмов и контаминацию материала посторонней микрофлорой [3].
6. Перед проведением микробиологического исследования в лаборатории проводят бракераж проб, включающий оценку качества заполнения сопроводительных документов, визуальный контроль, а в ряде случаев – микроскопию нативного материала. При нарушении правил по отбору и доставке, а также при несоответствии критериям пригодности проба исследованию не подлежит. Анализ рекомендуют повторить, соблюдая правила взятия и доставки материала. Информацию передают телефонограммой лечащему врачу, делают соответствующую запись в бракеражном журнале и направлении. Если повторная проба не может быть получена, материал берут в работу, но при выписке результата отмечают нарушения, которые могут влиять на качество выполнения анализа.
7. Интерпретацию результатов проводят с учетом этиологической значимости при данной патологии выделенных патогенов и их количественной характеристики. Лабораторное исследование является одним из многих объективных методов, и пользоваться им следует рационально. Неправильная оценка данных лабораторного исследования может привести к диагностическим ошибкам. Индикация условно-патогенных микроорганизмов из патологического материала не всегда является доказательством их этиологической роли в генезе заболевания. Получение отрицательного результата — еще не основание для исключения предполагаемого диагноза. Отрицательный результат может быть следствием неправильного забора материала, несвоевременной доставки его в лабораторию, несовершенной методики бактериологического исследования.
Поэтому при постановке диагноза заболеваний, вызванных условно-патогенными возбудителями, надо исходить из 4 критериев: многократности обнаружения данных видов, массивности их роста в посевах на плотные питательные среды, антигенной и фаговаровой однородности выделяемых субкультур и диагностического нарастания титров гомологичных антител при серологических исследованиях.
8. При выделении этиологически значимых микроорганизмов из стерильных жидкостей (кровь, ликвор и др.), раневого отделяемого требуется экстренная передача результатов лечащему врачу.
2. Плебани М. Выявление и предотвращение ошибок в лабораторной медицине. - Annals of Clinical Biochemistry. - 2010. - № 47. – С. 101-110.
3. Практическое руководство по биологической безопасности в лабораторных условиях. - Всемирная Организация Здравоохранения, Женева, 2004 г. – 201 с.
Т?йіндеме: Б?л ма?ала зерттеуді? адекватты сапалы н?тижесін алу ?шін ж?не материалды жинау ережесін білу ?шін д?рігер- клиницисттерді? білімін ке?ейту. Клиникалы? ж?не лабороториялы? профильдегі д?рігерлерді? бірігіп ж?мыс істеуі нау?асты емдеудегі с?тті та?дауы.
Summary: The article is aimed at expanding the knowledge of clinicians about the rules of collection of samples and rationale to follow them to obtain an adequate quality of research results. Teamwork of doctors of clinical and laboratory specializations will lead to a successful choice of therapy in a patient.
ПРАВИЛА ВЗЯТИЯ ПАТОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА, КРОВИ, КОРМОВ И ПЕРЕСЫЛКИ ИХ ДЛЯ ЛАБОРАТОРНОГО ИССЛЕДОВАНИЯ
(УТВЕРЖДЕНЫ Главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР 24 июня 1971 г. взамен Правил, утвержденных 4 июля 1958 г.)
Кроме того, в лабораторию направляют корма для различных видов исследований, а также кровь и другой материал от животных для биохимических анализов.
Во всех случаях взятия и пересылки материала специалист обязан руководствоваться изложенными ниже правилами, а также соответствующими инструкциями по борьбе с болезнями животных.
Взятие и пересылка патологического материала для бактериологического и вирусологического исследований
2. Патологический материал необходимо брать стерильными инструментами в стерильную посуду. Поверхность органа (ткани), от которого берут патологический материал, на месте разреза следует обжечь над пламенем или прижечь нагретой металлической пластинкой.
3. Патологический материал должен быть взят как можно раньше после смерти животного, особенно в теплое время года. Начавшееся разложение трупа может сделать его негодным для исследования.
Патологический материал отправляют в лабораторию в неконсервированном виде; в том случае, если невозможно доставить его в лабораторию в течение ближайших 24-30 часов, патологический материал посылают только в консервированном виде.
4. Для бактериологического исследования патологический материал (органы или их части) консервируют 30%-ным водным раствором химически чистого глицерина. Воду предварительно стерилизуют кипячением или автоклавированием в течение 30 минут. Материал можно консервировать также в стерильном вазелиновом масле. Материал заливают консервирующей жидкостью в количестве, в 4-5 раз превышающем его объем.
5. Материал, направляемый для вирусологических исследований, консервируют 30-50%-ным раствором химически чистого глицерина на физиологическом растворе поваренной соли. Физиологический раствор предварительно стерилизуют в автоклаве при 120° в течение 30 минут.
6. Небольшие трупы павших животных (поросят, ягнят, телят), а также трупы мелких животных лучше посылать целыми в непроницаемой таре.
7. Трубчатые кости посылают на исследование в целом виде, с неповрежденными концами, тщательно очистив их от мышц и сухожилий. Кости завертывают в марлю пли полотно, смоченное дезинфицирующей жидкостью (5%-ным раствором карболовой кислоты). Кости можно также посыпать поваренной солью и завернуть в полотно или марлю.
8. Кишечник перед посылкой для бактериологического и вирусологического исследований освобождают от фекальных масс, а концы кишечника перевязывают. На исследование посылают части кишечника с наиболее характерными патологическими изменениями. Кишечник помещают в банки с 30-40%-ным водным раствором глицерина или насыщенный водным раствором поваренной соли. Объем консервирующей жидкости должен превышать объем взятого материала в 5-7 раз.
9. Кал для исследования отправляют в стерильных стаканах, пробирках или банках, которые хорошо закрывают пергаментной бумагой. От трупов животных кал можно послать в отрезке невскрытого кишечника, завязанного с обоих концов. Кал в лабораторию должен быть доставлен не позднее 24 часов после его взятия.
10. При посылке для исследования участков кожи берут наиболее пораженные кусочки ее размером 1010 см. Кусочки кожи посылают в стерильной, герметически закупоренной посуде.
11. Кровь, гной, слизь, экссудат, мочу, желчь и другой жидкий патологический материал для бактериологического и вирусологического исследований посылают в запаянных пастеровских пипетках, стерильных пробирках или во флаконах, хорошо закрытых стерильными резиновыми пробками.
12. Кровь, гной, выделения из различных полостей, естественных отверстий и др. посылают для микроскопического исследования (для обнаружения в них микробов, кровепаразитов и для определения лейкоцитарной формулы) в виде мазков.
Предметные стекла предварительно кипятят в течение 10-15 минут в 1-2%-ном водном растворе соды, затем хорошо промывают чистой водой и насухо вытирают. Сухие стекла помещают в раствор спирт-эфира, взятых в равных частях, где и хранят до употребления.
У животных кровь берут из вены ушной раковины или края верхушки уха, у птиц - с поверхности гребня или подкрыльцовой вены. Шерсть на месте взятия крови выстригают или выбривают, кожу тщательно протирают ватными тампонами, смоченными сначала спиртом и затем эфиром. Инструменты (иглы, скальпель) должны быть стерильными.
Первую каплю крови удаляют стерильной ватой (исключение делается при исследовании крови на гемоспоридиозы, когда берут для мазка первую каплю крови), а следующую свободно выступившую каплю крови берут на предварительно подготовленное предметное стекло путем быстрого и легкого прикосновения к капле поверхностью стекла. Затем стекло быстро поворачивают вверх каплей и удерживают между пальцами левой руки в горизонтальном положении. К левому краю капли прикасаются под углом 45° шлифованным краем другого предметного (или покровного) стекла. Как только капля равномерно распределится по ребру этого стекла, его быстро проводят по поверхности предметного стекла слева направо, не доводя его до края на 0,5-1 см. Ширина мазков должна быть уже предметного стекла. Для каждого нового мазка берут свежую каплю крови.
Готовые мазки крови высушивают на воздухе; подсушивать их над пламенем или на солнце не рекомендуется. В холодное время года мазки делают в теплом помещении или на стеклах, подогретых на крышке теплого стерилизатора.
Метод фиксации мазков зависит от цели исследования (см. специальную часть Правил).
Правильно приготовленные мазки крови должны быть тонкими, равномерными и достаточной длины. На высушенных мазках и отпечатках острым предметом делают надпись с указанием номера или клички животного и даты приготовления мазка.
Мазки из тканей, гноя, органов и различных выделений готовят путем размазывания материала на предметном стекле стерильной палочкой или ребром другого предметного стекла до тонкого слоя. Частицы органов плотной консистенции, твердые узелки, а также вязкий материал целесообразно заключать между двумя предметными стеклами. После растирания помещенного между ними материала стекла разъединяют в противоположные стороны в горизонтальном направлении, в результате чего получаются два довольно тонких мазка. Иногда получают так называемые препараты-отпечатки. Для этого вырезанный острым скальпелем кусочек органа захватывают пинцетом и свободной поверхностью кусочка делают на стекле несколько тонких отпечатков.
Взятие крови для серологического исследования
13. У лошадей, крупного рогатого скота, верблюдов, оленей, овец и коз кровь берут из яремной вены в верхней трети шеи.
Иглы перед взятием крови от каждого животного обязательно стерилизуют кипячением. Шерсть на месте взятия крови тщательно выстригают, и кожу дезинфицируют спиртом или 3%-ным раствором карболовой кислоты. Нужно следить, чтобы кровь стекала по стенке в пробирку струей, а не каплями. Кровь, взятая каплями и вспененная, скорее гемолизуется и часто дает неправильные результаты показаний при исследовании. Нельзя допускать, чтобы кровь попадала на землю. Для этого надо пользоваться тазиком с дезинфицирующей жидкостью, куда спускают первую порцию крови.
У свиней кровь берут из уха (иглой или шприцем) или из кончика хвоста. Хвост предварительно обмывают водой с мылом и дезинфицируют спиртом или 3%-ным раствором карболовой кислоты, а затем кончик отрезают ножницами. После взятия крови копчик хвоста обрабатывают йодом, перевязывают или прижигают.
У птиц кровь берут из вены крыла или из гребешка.
Брать кровь надо по возможности утром, до кормления животных. Для серологического исследования от крупного рогатого скота, лошадей и других крупных животных, овец, свиней кровь берут в количестве 7-10 мл.
Взятую кровь выдерживают около часа при 30-35° для свертывания, а затем выносят в прохладное помещение для отстаивания. Через 10-12 часов отстоявшуюся сыворотку переливают в другие пробирки. Если сыворотка недостаточно отстоялась или верхний слой сгустка плотно прилегает к стенкам пробирки и отстаивание начинается снизу, то сгусток отделяют от стенок пробирки тонкой предварительно прокаленной и остывшей проволокой.
Сыворотка крови должна быть доставлена в лабораторию в течение первых суток и в исключительных случаях не позднее третьего дня после взятия крови.
При пересылке сыворотки на большое расстояние, особенно летом, ее необходимо консервировать 5%-ным раствором карболовой кислоты на физиологическом растворе из расчета на каждые 9 мл сыворотки 1 мл раствора карболовой кислоты или 1-2 капли раствора на 1 мл сыворотки. Раствор карболовой кислоты необходимо подливать по каплям при постоянном встряхивании пробирки с сывороткой.
Сыворотку или кровь можно консервировать также борной кислотой (в порошке) из расчета 0,05-0,07 г (на кончике скальпеля) на одну пробирку с кровью (сывороткой). Сыворотку можно консервировать также высушиванием.
Для высушивания сыворотку наносят на фильтровальную бумагу размером 55 см в количестве 0,4 мл и выдерживают в комнате при рассеянном свете до полного высыхания. После этого на каждой бумаге с высушенной сывороткой делают соответствующие записи простым карандашом и завертывают в пергаментную бумагу (каждую пробу отдельно), а затем упаковывают в конверт и в таком виде отсылают в лабораторию.
В лаборатории каждую пробу сухой сыворотки помещают в пробирку, заливают 2 мл физраствора, помещают в термостат на 6-10 часов или оставляют в комнате на 24 часа и затем исследуют. Сухие сыворотки сохраняют свои антигенные свойства от 40 до 130 дней.
Для серологического исследования в лабораторию можно отправлять и цельную кровь, не отделяя сыворотку, но при условии, что в пути ее не будут встряхивать и она не подвергнется гемолизу.
На каждой пробе сыворотки или крови указывают ее номер или кличку животного или фамилию владельца животного. Пробы направляют с описью в двух экземплярах (см. Приложение 2).
Пробирки с сыворотками плотно закрывают стерильными пробками и устанавливают для пересылки в строго вертикальном положении.
Зимой сыворотки упаковывают и пересылают так, чтобы они не замерзали.
Взятие материала для патологогистологического исследования
14. Для патологогистологического исследования материал берут от свежих трупов или убитых животных. Нужно брать те органы и ткани, где обнаружены те или иные патологические изменения. Из разных участков патологически измененных органов (тканей) вырезают тонкие, небольшие кусочки, но не более 1-2 см толщиной. Вместе с пораженными участками ткани захватывают и граничащую с ней нормальную ткань.
При иссечении кусочка учитывают микроскопическое строение того или иного органа и ткани. Так, кусочки из почки берут с таким расчетом, чтобы попадали оба слоя - корковый и мозговой. Из органов, имеющих во всех частях одинаковое строение, при иссечении необходимо захватывать и их капсулы.
После взятия материал тотчас помещают в фиксирующую жидкость, объем которой должен в 10 раз превышать объем взятого материала. В качестве фиксирующей жидкости лучше всего использовать 10%-ный водный раствор продажного формалина. За неимением формалина можно использовать в качестве фиксирующей жидкости 96%-ный чистый спирт. При применении спирта толщина кусочков ткани не должна превышать 0,5 см.
Фиксирующую жидкость во всех случаях через сутки необходимо заменить свежей.
Патологический материал фиксируют в стеклянной посуде или в крайнем случае в глиняной.
В холодное время года во избежание промерзания при пересылке материал, профилированный в формалине, как указано выше, перекладывают в 30-50%-ный раствор глицерина, приготовленный на 10%-ном формалине, или в 70%-ный спирт, или в насыщенный раствор поваренной соли.
На банку с кусочками органов и тканей наклеивают ярлык с указанием номера или клички животного, а внутрь ее опускают этикетку из плотной бумаги или картона с написанным на ней простым (не химическим) карандашом номером животного.
Помещать в одну посуду несколько объектов исследования от разных животных можно только при том условии, если каждый из них завязывают в марлю вместе с отдельной этикеткой.
Упаковка и пересылка патологического материала
15. Трупы мелких животных, части трупов крупных животных и отдельные органы в свежем (нефиксированном) виде отправляют для исследования в лабораторию только с нарочным. Посылаемый материал, особенно от животных, подозрительных по заболеванию инфекционной болезнью, должен быть тщательно упакован в плотный деревянный или металлический ящик, чтобы предупредить возможность рассеивания инфекции в пути. Перед упаковкой материал необходимо завернуть в холст или мешковину, смоченную дезинфицирующим раствором (фенольного креолина, лизола, известкового молока), и уложить в ящик со стружками, мякиной или опилками.
16. Части органов, жидкости, отправляемые в лабораторию почтой в фиксированном или консервированном виде, должны быть помещены в герметически закупоренную стеклянную посуду с притертой стеклянной, пластмассовой, резиновой или корковой пробкой. Пробка должна быть закреплена проволокой или бечевкой и залита менделеевской замазкой (сургучом, смолкой, парафином или воском), чтобы укупорка была непроницаемой для жидкости. Укупоренную посуду вкладывают в прочный плотный ящик и хорошо обкладывают ватой, паклей, стружками, опилками или другими упаковочными материалами.
Кости обертывают целлофаном, полиэтиленовой пленкой или смоченными в дезрастворе марлей или полотном и также упаковываются в ящики.
17. При пересылке почтой или с нарочным патологического материала от животных, подозрительных по заболеванию инфекционной болезнью, или явно инфицированного материала упаковка должна гарантировать доставку материала в целости и исключить возможность рассеивания возбудителей инфекции. На лицевой стороне посылки вверху должна быть надпись "Осторожно - стекло" и "Верх".
18. Стеклянную посуду, в которой заключен посылаемый материал с подозрением на наличие особо опасных болезней (сап, сибирская язва, эмфизематозный карбункул, бруцеллез, туляремия, перипневмония крупного рогатого скота, чума крупного рогатого скота, чума свиней, псевдочума птиц, ящур, бешенство), обязательно упаковывают в металлическую коробку, которую запаивают, пломбируют, или опечатывают, а затем упаковывают еще в деревянный ящик.
Если такой материал доставляют с нарочным, можно отправлять его в стеклянной, герметически закупоренной посуде, без металлической коробки, но в деревянном ящике.
19. На взятый патологический материал составляют сопроводительный документ (см. пункт 141).
Если при вскрытии посылки в лаборатории будут установлены несоответствие сопроводительному документу или порча патологического материала, об этом обязательно составляют акт, копию которого отправляют ветеринарному врачу, направившему материал в лабораторию.
Взятие и пересылка патологического материала при отдельных инфекционных болезнях
20. Сибирская язва. При подозрении на сибирскую язву вскрывать трупы запрещается. Для исследования от трупа животного берут кровь из надреза уха, периферических сосудов или отрезают и отсылают в лабораторию ухо.
Если подозрение на сибирскую язву появилось в процессе вскрытия трупа, вскрытие тотчас же приостанавливают и для исследования посылают ухо, как указано ниже.
Подозрение на заболевание сибирской язвой свиней обычно возникает при наличии опухоли в области шеи. Если подозрение возникло во время вскрытия трупа свиньи, то дальнейшее вскрытие прекращают, а для бактериологического исследования берут участки отечной соединительной ткани, заглоточные лимфатические узлы.
Место надреза предварительно тщательно дезинфицируют и после взятия крови прижигают огнем или раскаленным металлическим предметом. Кровь наносят на стекло толстым слоем и высушивают на воздухе без дополнительной фиксации.
Ухо отрезают с той стороны, на которой лежит труп. Предварительно его туго перевязывают шпагатом у основания в двух местах и отрезают между перевязками. Не снимая шпагата, отрезанное ухо завертывают в чистую тряпочку или марлю, пропитанную 3%-ным раствором карболовой кислоты, а затем обертывают целлофаном, полиэтиленовой пленкой или пергаментной бумагой и помещают в герметически закрытую посуду. Место отреза уха на трупе прижигают огнем.
Для исследования на сибирскую язву кожевенного сырья реакцией преципитации посылают кусочки кожи величиной 55 см в порядке, предусмотренном "Указаниями по ветеринарно-санитарной обработке заготовляемого кожевенного и мехового сырья".
21. Эмфизематозный карбункул и злокачественный отек. Для бактериологического исследования посылают в запаянных пипетках экссудат из воспаленного крепитирующего отека, а также препараты-отпечатки на предметных стеклах из пораженных частей мышц больных животных.
От трупов животных посылают кусочки печени, селезенки, почек и пораженных мышц в растворе глицерина (см. пункт 4) или же пересыпанные солью.
22. Брадзот овец. Для бактериологического исследования посылают кусочки печени, селезенки, мышц, подкожной клетчатки (если имеются отеки), содержимое тонких кишок, кусочки пораженных частей тонкого кишечника, сычуга и трубчатую кость.
Материал для бактериологического исследования берут только от свежих трупов.
23. Инфекционная энтеротоксемия овец. Для бактериологического и биологического исследований направляют содержимое тонкого отдела кишечника, перитонеальную жидкость, мезентериальные лимфатические узлы, паренхиматозные органы.
Государственное бюджетное учреждение здравоохранения
Тюменской области "Областная клиническая больница №1"
Нам доверяют самое ценное!
Правила взятия, доставки биологических материалов для основных микробиологических исследований в лаборатории клинической микробиологии
Правила взятия, доставки биологических материалов для основных микробиологических исследований в лаборатории клинической микробиологии
- производят в стерильные пробоотборники (пробирки, контейнеры, флаконы и др. посуду) до начала антибактериальной терапии;
- доставляют с соблюдением сроков доставки (без транспортных сред) не позднее 2 часов с момента взятия, без переохлаждения.
ИССЛЕДОВАНИЕ КРОВИ.
Взятие материала производит процедурная медицинская сестра в кабинете или палате с соблюдением асептики во время подъема температуры тела (37,2-380С) во флаконы с питательной средой.
Подготовка флаконов: визуально убедиться в целостности флакона и пробки, защитного колпачка; в прозрачности бульона, проверить цвет сенсора (сенсор должен быть голубовато-зеленый или серый, но не желтый; при наличии желтой окраски флакон не используется).
Удалить защитный колпачок, продезинфицировать пробку 70%-ым раствором спирта или раствором йода, дать высохнуть перед контактом с иглой.
Подготовка кожи: обработать место венепункции 70% раствором спирта в течение не менее 30 секунд. Затем нанести на кожу вокруг места венепункции 1-2% раствор йода концентрическими кругами (диаметр зоны обработки – около 3-5 см). Продолжительность обработки – не менее 30 секунд. Если используется раствор спирта, время обработки – не менее 60 секунд. Дать коже высохнуть перед венепункцией. Не пальпировать вену после обработки. При необходимости пальпации использовать стерильные перчатки.
Произвести венепункцию, используя шприц, набрать необходимое количество крови.
Внести во флаконы необходимое количество крови в соответствии с инструкцией (для флаконов SA, SN, FA, FN рекомендуется вносить до 10 мл); PF (педиатрические аэробные) - от 0,5 до 4 мл крови.
При использовании шприца на 20 мл рекомендуется сначала внести кровь в анаэробный флакон, затем – в аэробный.
Не проталкивать кровь во флакон принудительно при помощи поршня – жидкость легко поступает во флакон, поскольку в нем отрицательное давление воздуха (вакуум). В вечерние и ночные часы, в воскресенье флаконы с кровью помещать в термостат на 350С или хранить при комнатной температуре до утра. В направлениях дополнительно указывать температуру тела в момент взятия крови.
ИССЛЕДОВАНИЕ СОСУДИСТЫХ КАТЕТЕРОВ.
Взятие материала производит врач.
Область кожи вокруг катетера обрабатывают тампоном с 70% спиртом. В условиях асептики извлекают катетер и стерильными ножницами отрезают 5 см дистального конца катетера в стерильную пробирку или флакон.
При невозможности доставить в течение 2 часов рекомендуется хранить при +40С до 24 часов.
ИССЛЕДОВАНИЕ МОЧИ.
Взятие материала производит пациент. У лежачих пациентов – медицинская сестра.
Собирается моча после туалета наружных половых органов утренняя (накопительная) средняя порция мочи в количестве 3-5 мл. Катетеризация не рекомендуется.
При наличии постоянного катетера необходимо: пережать трубку ниже уровня отверстия уретры на 1-3 см, продезинфицировать трубку спиртовым тампоном и с помощью шприца с иглой взять до 5 мл мочи в стерильный пробоотборник (контейнер), снять зажим с катетера.
Доставлять не позднее 2 часов с момента взятия.
При уретрите, цистите – доставляют первую порцию мочи.
ИССЛЕДОВАНИЕ МОКРОТЫ.
Взятие материала производит пациент под контролем медицинской сестры.
Перед взятием почистить зубы, прополоскать рот свежей кипяченой водой. Утреннюю (накопительную) мокроту без слюны в количестве 1-5 мл собрать в прозрачный контейнер. Доставлять не позднее 2 часов с момента забора.
ИССЛЕДОВАНИЕ ПРОМЫВНЫХ ВОД БРОНХОВ.
Взятие материала производит врач.
В стерильную пробирку - в количестве до 3-5 мл. Доставлять в течение 2 часов с момента взятия.
ИССЛЕДОВАНИЕ ОТДЕЛЯЕМОГО НОСА.
1. При ЛОР заболеваниях. Взятие материала производит врач.
Достовернее пунктат из пазух носа в шприце или стерильной пробирке (менее информативно) - стерильным ватным тампоном из средних (по показаниям – глубоких) отделов, предварительно освободив нос от слизи.
2. На носительство золотистого стафилококка. Взятие материала производит обученный медицинский персонал. Из передних отделов слизистой полости носа одним тампоном из обоих носовых ходов, не касаясь кожи носа. Доставлять в течение 2 часов с момента взятия.
ИССЛЕДОВАНИЕ ОТДЕЛЯЕМОГО ЗЕВА.
Взятие материала производит врач или обученный медицинский персонал.
Натощак или через 2 часа после приема пищи, жидкости. Необходимо хорошее освещение, корень языка придавить шпателем. Не касаться слизистой рта, языка!
1. На микрофлору, на носительство золотистого стафилококка - ватным тампоном обтереть слизистую правой миндалины, дужки, язычка, левой миндалины, задней стенки глотки. Доставлять не позднее 2 часов с момента взятия.
2. На возбудителей дифтерии – из зева: при наличии налетов на границе здоровой и пораженной ткани. При отсутствии налетов – как на микрофлору. Одновременно - из носа: отделяемое слизистой носа тампоном из обоих носовых ходов.
При подозрении на дифтерию (по цито) - 2 или 3 тампона из зева для прямой бактериоскопии, постановки опыта на токсигенность, посева. По показаниям - из мест редкой локализации: отделяемое глаз, уха, ран, другое. Доставлять не позднее 2 часов с момента взятия. В вечерние и ночные часы, воскресенье материал опускать в теплую среду обогащения или транспортную среду с активированным углем, хранить в термостате +350С или комнатной температуре до утра.
3. На менингококк – взятие с посевом у постели больного или в лаборатории производит медицинский лабораторный техник с задней стенки носоглотки ватным тампоном, изогнутым под углом 45о в нижней части его длины о пробирку. Доставка немедленно в теплом контейнере!
4. На коклюш – взятие с посевом у постели больного или в лаборатории производит медицинский лабораторный техник изогнутым ватным тампоном под углом 45о (тампон вниз) с задней стенки глотки Доставка немедленно в теплом контейнере!
5. На микоз (грибы) - ватным тампоном с пораженных участков слизистой. Доставлять не позднее 2 часов с момента взятия.
ИССЛЕДОВАНИЕ ЛИКВОРА.
Взятие материала производит врач.
С соблюдением асептики брать последние порции ликвора в количестве 1-3 мл в стерильную пробирку (края пробирки обжечь до взятия и после над спиртовкой). Доставлять немедленно в теплом пенале. Вне часов работы лаборатории - помещать в термостат на 35°С до утра.
ИССЛЕДОВАНИЕ ОТДЕЛЯЕМОГО РАН.
Взятие материала производит врач, перевязочная медицинская сестра.
РАНЫ ПОВЕРХНОСТНЫЕ: во время перевязки кожу вокруг раны предварительно обработать раствором антисептика; некротические массы, детрит, гной удалить стерильной салфеткой. Взятие материала производить последовательно двумя ватными тампонами круговыми вращательными движениями от центра к периферии. Один тампон - для бактериоскопии, второй - для посева. По Cito! - 3 тампона: для бактериоскопии, посева и постановки чувствительности к антибиотикам.
ИССЛЕДОВАНИЕ ОТДЕЛЯЕМОГО ГЛАЗ.
Взятие материала производит врач.
За 5-6 часов до взятия отменить все процедуры и манипуляции. Раздельно из каждого глаза ватным тампоном со слизистой конъюнктивы от наружного к внутреннему краю, не касаясь кожи. Доставлять не позднее 2 часов с момента взятия.
ИССЛЕДОВАНИЕ ОТДЕЛЯЕМОГО УШЕЙ.
Взятие материала производит врач.
При поражении наружного уха обработать кожу 70° спиртом с последующим промыванием физиологическим раствором натрия хлорида. Затем отделяемое из очага взять ватным тампоном.
Доставлять не позднее 2 часов с момента взятия.
При поражении среднего, внутреннего уха доставляют пунктаты и материал, полученный во время оперативных вмешательств, собранный в стерильную посуду.
Вне часов работы лаборатории материал берется в среду обогащения или коммерческие накопительные среды (Амиеса, тиогликолиевая и др.) и хранится в термостате при 35' С или комнатной температуре в течение 24-48 часов (см. раневое отделяемое).
ИССЛЕДОВАНИЕ ЖЕЛЧИ.
Взятие материала производит процедурная медицинская сестра.
При зондировании после взятия желчи в клиническую лабораторию порции в стерильные пробирки в количестве 3-5 мл (чаще исследуется порция В, реже - порция С), либо во время операции с помощью шприца, соблюдая правила асептики. Доставлять в течение 2 часов.
ИССЛЕДОВАНИЕ ГРУДНОГО МОЛОКА.
Взятие материала производит пациентка под контролем медицинской сестры.
С соблюдением правил асептики, после туалета молочных желез, предварительно сцедив первые капли в салфетку. Доставлять в стерильных пробоотборниках (контейнерах) в количестве 1-3 мл в течение 0,5-1 часа.
ИССЛЕДОВАНИЕ ОТДЕЛЯЕМОГО ПОЛОВЫХ ОРГАНОВ.
Взятие материала производит врач.
1. НА НЕСПЕЦИФИЧЕСКИЕ ВОЗБУДИТЕЛИ:
Вульва - до манульного исследования, после введения зеркала и подъемника брать ватным тампоном с патологически измененных участков.
2. НА МИКОПЛАЗМОЗ, УРЕАПЛАЗМОЗ - посев материала (соскоб из уретры, заднего свода влагалища, канала шейки матки) в пробирки осуществляют ложкой Фолькмана или тампоном однократного применения. Пробирки доставляют в лабораторию не позднее 2 часов с момента взятия.
- у мужчин отделяемое слизистой берут петлей или ложкой Фолькмана из глубины уретры, предварительно очистив отверстие тампоном, смоченным изотоническим раствором хлорида натрия. При малом количестве выделений до взятия материала производят массаж уретры в дистальном направлении. При заболевании предстательной железы исследуют ее сок.
- у женщин из шейки матки материал берут после введения во влагалище зеркала Куско. Шейку вытирают, удаляют наружную слизисто – гнойную пробку (вагинальный конец) и из отверстия шейки матки корнцангом или вагинальным пинцетом берут вязкую слизь.
- у мужчин отделяемое слизистой оболочки берут петлей или ложкой Фолькмана из глубины уретры, предварительно очистив отверстие тампоном, смоченным изотоническим раствором хлорида натрия. При малом количестве выделений до взятия материала производят массаж уретры в дистальном направлении. При заболевании предстательной железы исследуют ее сок.
- у женщин из шейки матки материал берут после введения во влагалище зеркала Куско. Шейку вытирают, удаляют наружную слизисто-гнойную пробку (вагинальный конец) и из отверстия шейки матки корнцангом или вагинальным пинцетом берут вязкую слизь (для беременных женщин взятие из экзоцервикса), не допуская загрязнение исследуемого материала микрофлорой влагалища.
ИССЛЕДОВАНИЕ ИСПРАЖНЕНИЙ.
Взятие материала производит медицинская сестра.
1. На патогенные энтеробактерий (шигеллы, сальмонеллы, эшерихий) - из судна без следов дезинфицирующих растворов брать слизь, зелень, фекалий в стерильную посуду или в пробирку с транспортными средами (глицериновый консервант, Кэри-Блейра или другие коммерческие накопительные среды) в объеме не более 1/3 от среды.
Нативный фекалий (без транспортной среды) - доставлять в течение 2 часов с момента взятия.
Вне часов работы лаборатории хранить в холодильнике +40С в глицериновом консерванте до 16-24 часов, среде Кэри-Блейра и других коммерческих средах – до 48 часов.
2. На дисбактериоз, грибы, патогенный стафилококк, УПМ (условно-патогенную микрофлору), иерсинии – из судна с соблюдением асептики 1-2 г нативного фекалия в стерильные контейнеры с лопаточкой. Доставлять не позднее 2 часов с момента взятия.
3. На возбудителей холеры – 0,5-1,5 г нативный фекалий (доставлять не позднее 2 часов с момента взятия), при невозможности доставить в требуемые сроки - в холерный консервант (хранить в термостате 350С до 6 часов).
4. На выявление антигенов лямблий; хеликобактера; рота-, нора- и аденовирусов, токсинов клостридий иммунохроматогенным методом (экспресс-метод) - нативный фекалий 0,5-1,5 г в чистой стеклянной посуде.
Каждая проба сопровождается документом - направлением, где указывают: фамилию, имя, отчество пациента; год рождения; отделение, в котором он находится; номер истории болезни (амбулаторной карты); диагноз; материал, посылаемый на исследование, и задачи исследования; дату и время взятия материала; антибактериальные (иммунные) препараты, если проба берется на фоне антибиотико- и/или иммунотерапии; фамилию, имя, отчество лечащего врача (консультанта), направляющего пробу на исследование.
Часы работы лаборатории клинической микробиологии: с 8.00 до 15.30 часов, в субботу - с 8.00 до 14.00 часов, выходной - воскресенье.
Амбулаторные пациенты исследуемый материал доставляют самостоятельно на 9 этаж административного корпуса больницы.
Из отделений материал доставляется в оперативный отдел.
Цель микробиологического исследования – установить этиологическую роль тех или иных микроорганизмов при возникшем заболевании или клиническом синдроме. Среди факторов, влияющих на достоверность микробиологической диагностики, можно выделить следующие условия взятия и транспортировки биологического материала: адекватный выбор методов микробиологического исследования; полноценность сведений о состоянии обследуемого пациента, важных с точки зрения оценки полученных результатов.
СБОР, ХРАНЕНИЕ И ТРАНСПОРТИРОВКА МАТЕРИАЛА ДЛЯ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ
Содержание учебного материала
Значение своевременного и адекватного взятия материала для микробиологических исследований. Меры предосторожности при сборе и транспортировке исследуемого материала. Предохранение от контаминации исследуемого материала нормальной микрофлорой. Правила взятия, сроки, температурные и другие условия транспортировки материала для бактериологических, микологических, паразитологических и вирусологических исследований, поддерживающие жизнедеятельность возбудителя, предотвращающие избыточный рост сопутствующей микрофлоры и обеспечивающие безопасность людей и окружающей среды. Количество отбираемого материала. Посуда, инструменты и химические реагенты, используемые для сбора материала, их перечень. Подготовка к работе, утилизация. Оформление сопровождающихся документов.
Значение своевременного и адекватного взятия материала для микробиологических исследований
Цель микробиологического исследования – установить этиологическую роль тех или иных микроорганизмов при возникшем заболевании или клиническом синдроме. Среди факторов, влияющих на достоверность микробиологической диагностики, можно выделить следующие условия взятия и транспортировки биологического материала: адекватный выбор методов микробиологического исследования; полноценность сведений о состоянии обследуемого пациента, важных с точки зрения оценки полученных результатов.
Меры предосторожности при сборе и транспортировке исследуемого материала
Правила работы в базовой лаборатории включают: запрет работ с пипеткой при помощи рта; запрет приема пищи, питья, курения, хранения пищи и применения косметических средств в рабочих помещениях; поддержание чистоты и порядка; дезинфекцию рабочих поверхностей не реже 1 раза в день и после каждого попадания на них заразного материала; мытье рук персоналом после работы с заразным материалом, животными, перед уходом из лаборатории; проведение всех работ таким образом, чтобы свести к минимуму возможность образования аэрозоля; обеззараживание всех инфицированных материалов перед выбросом или повторным использованием.
Правила взятия исследуемого материала: знание оптимальных сроков для взятия материала на исследование; взятие материала с учетом места максимальной локализации возбудителя путем его выделения в окружающую среду; отбор материала для исследования в необходимом и достаточном объеме с обеспечением условий, исключающих контаминацию проб; по возможности взятие материала до применения антибиотиков и других химиотерапевтических препаратов или после отмены антибиотиков через 2 – 3 дня. Материал доставляется в контейнерах, исключая их опрокидывание. При транспортировке не допускаются смачивание ватных пробок и замораживание материала. Материал поставляется в течение 1 – 2 ч после взятия. При невозможности доставки в указанные сроки биоматериал хранят в холодильнике (кроме крови и материала, исследуемого на наличие менингококка). При увеличении времени доставки проб до 48 ч необходимо использовать транспортные среды.
Собранный материал должен быть доставлен в лабораторию и подвергнут исследованию в максимально сжатые сроки, поскольку некоторые микробы не выдерживают высушивания, длительного пребывания при измененном температурном режиме (гонококки, менингококки). К тому же если исследуемый материал наряду с патогенными микробами содержит и другую микрофлору, то последняя может оказать антагонистическое действие на возбудителей данного заболевания.
Для взятия и транспортировки биологического материала следует использовать одноразовые стерильные тубсеры (пробирки с тампонами) промышленного производства или транспортные системы со средой. Ватные (хлопковые) тампоны, изготовляемые непосредственно в лаборатории из медицинской ваты, могут быть использованы только в крайнем случае, так как медицинская вата может обладать антимикробными свойствами.
Предохранение от контаминации исследуемого материала нормальной микрофлорой
Для сбора исследуемого материала должны использоваться стерильные посуда, инструменты и должны соблюдаться правила асептики, чтобы предупредить загрязнение исследуемого материала посторонней микрофлорой. Внесение случайной микрофлоры в исследуемый материал может помешать выделению микроба – возбудителя данного заболевания.
Во избежание загрязнения материала посторенней микрофлорой тот, кто берет материал, должен вымыть руки. При некоторых видах исследований необходимо руки берущего материал, а также место взятия материала у больного дезинфицировать. При необходимости берущий исследуемый материал должен работать в эластичных перчатках.
Пробирки и флаконы должны быть закрыты стерильными пробками, а баночки – крышками или бумажными стерильными колпачками. Следует помнить, что если ватная пробка смочена жидкостью, то она становится проницаемой для микробов и, следовательно, не может обеспечить стерильность материала.
Персонал, доставляющий материал в лабораторию, должен быть предупрежден об этом и должен нести материал больного, не взбалтывая содержимое пробирок или флаконов. Нельзя доставлять в лабораторию материал в антисанитарном состоянии, когда посуда, пробка или бумага загрязнены этим материалом снаружи. Это может служить источником для заражения окружающих.
Количество отбираемого материала
Посуда, инструменты и химические реагенты, используемые для сбора материала, их перечень. Подготовка к работе, утилизация. Исследуемый материал должен соответствовать месту локализации инфекционного процесса (мокрота при пневмонии, кровь при сепсисе, испражнения при дизентерии). Для обеспечения тщательного исследования материал должен быть собран в достаточном количестве. Для микробиологических исследований необходима различная стеклянная посуда. Чашки Петри (диаметр 10 см, высота 1,5 см) применяют для выделения чистых культур, количественного учета микроорганизмов, анализа качественного состава микрофлоры на плотных питательных средах и других исследований; стеклянные поплавки – для изучения процессов брожения; пробирки биологические – для хранения чистых культур и проведения микробиологических исследований; пастеровские пипетки с оттянутым капилляром. Кроме специальной посуды широко используют обычную химическую посуду: колбы плоскодонные конические Эрленмейера, круглодонные, мерные, пипетки, градуированные на 1 мл, пипетки Мора, мензурки, мерные цилиндры, бюксы, склянки и т.д.
Колбы и пробирки, используемые для приготовления и стерилизации питательных сред и выращивания микроорганизмов, закрывают ватно-марлевыми пробками, которые изготовляют вручную или при помощи специальной машины. Правильно изготовленная пробка для пробирок должна иметь длину 3 – 4 см, умеренно туго входить в пробирку, быть плотной и не менять своей формы при многократном применении. В микробиологической практике применяют петли, иглы, пинцеты, ножницы, пластмассовые и металлические штативы для пробирок, металлические лотки и др. Петли и иглы изготовляют из платиновой, никелевой или хромоникелевой проволоки и закрепляют в металлическом петледержателе.
Для лабораторных исследований в микробиологии используются специальные химические реактивы – реагенты. В процессе всестороннего изучения микроорганизмов применяют реагенты для окраски мазков по Граму, различные реактивы для биохимической идентификации бактерий, наборы реагентов. Окрашивание мазков может производиться с помощью широкого спектра красителей: метиленовый синий, основной фуксин Циля, карболовый генциан‒виолет, реагенты для окраски по способу Ожешки, по Нейссеру, по Цилю-Нильсену, по Гинсу. биохимическую идентификацию патогенных и условно‒патогенных микроорганизмов позволяют проводить следующие реагенты: реактив Эрлиха, раствор Люголя, реагенты для определения цитохромоксилазы, лизиндекарбоксилазы, аргининдигидролазы, уреазы, каталазы и другие.
Оформление сопровождающих документов
Материал, направляемый в лабораторию, должен иметь сопроводительный бланк со следующими сведениями:
Читайте также: